左卡尼汀调控钙调神经磷酸酶表达抑制过氧化氢诱导心肌细胞凋亡作用 被引量：10

1

作者 贾桂枝 王洪新 +2 位作者 李红 王翠瑶 戴红良 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期129-132,共4页

目的研究钙调神经磷酸酶(CaN)是否参与左卡尼汀对过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞凋亡的抑制作用。方法将新生乳鼠心肌细胞体外培养进行实验,实验分为对照组、H2O2组、左卡尼汀+H2O2组、环孢素A(CsA)+H2O2组。对照组采用生理盐水;H2O2组加入... 目的研究钙调神经磷酸酶(CaN)是否参与左卡尼汀对过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞凋亡的抑制作用。方法将新生乳鼠心肌细胞体外培养进行实验,实验分为对照组、H2O2组、左卡尼汀+H2O2组、环孢素A(CsA)+H2O2组。对照组采用生理盐水;H2O2组加入200μmol·L-1H2O2孵育12 h;左卡尼汀+H2O2组、CsA+H2O2组分别给予1.2mmol·L-1左卡尼汀1 h或1μmol·L-1CsA 30 min预处理,再分别加入H2O2继续孵育12 h。通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹法检测cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax等凋亡相关蛋白及CaN的表达。结果与对照组相比,H2O2组心肌细胞凋亡率、促凋亡蛋白cleaved caspase-3及Bax的表达均明显增加,而其抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低,左卡尼汀及CaN特异性抑制剂CsA可明显改善上述指标。而且,左卡尼汀还可抑制H2O2刺激下CaN的过表达。结论左卡尼汀可通过调控钙调神经磷酸酶表达抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡。 展开更多

关键词 左卡尼汀 H2O2 心肌细胞 凋亡 CaN caspase-

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染料木黄酮通过抑制VEGF表达抑制人口腔癌TCA8113细胞增殖 被引量：12

2

作者 戴红良 葛树卿 +3 位作者 楚明会 梁春光 王玥 贾桂枝 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期464-469,共6页

目的:观察染料木黄酮对人口腔癌TCA8113细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:MTT法、细胞计数法及集落形成实验检测细胞增殖;蛋白质免疫印迹检测血管内皮生长因子(VEGF)、细胞外信号调节激酶(ERK)及p-ERK的蛋白水平。结果:染料木黄... 目的:观察染料木黄酮对人口腔癌TCA8113细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:MTT法、细胞计数法及集落形成实验检测细胞增殖;蛋白质免疫印迹检测血管内皮生长因子(VEGF)、细胞外信号调节激酶(ERK)及p-ERK的蛋白水平。结果:染料木黄酮能显著抑制TCA8113细胞的增殖,其抗增殖活性具有浓度依赖性;染料木黄酮还可剂量依赖性地降低VEGF、ERK及p-ERK的蛋白水平;VEGF的表达可被ERK特异性抑制剂U0126所抑制;VEGF受体拮抗剂阿西替尼及U0126均显著抑制TCA8113细胞的增殖。结论:染料木黄酮可抑制人口腔癌TCA8113细胞的增殖,其机制可能与其抑制ERK表达及活化,进而抑制VEGF的表达有关。 展开更多

关键词 染料木黄酮 TCA8113细胞 细胞增殖 血管内皮生长因子 细胞外信号调节激酶

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黄芪多糖对异丙肾上腺素诱发的SERCA2a表达及活性降低的影响 被引量：7

3

作者 戴红良 贾桂枝 +3 位作者 赵颂 赵艳 张晓红 王洪新 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期388-391,共4页

目的探讨黄芪多糖对异丙肾上腺素(isopreterenol,ISO)刺激下心肌细胞SERCA2a表达的影响。方法采用Real-time PCR法检测SERCA2a mRNA的表达;利用蛋白质免疫印迹法检测SERCA2a蛋白的表达。以4-硝基酚磷酸二钠(p-NPP)法检测SERCA2a的活性... 目的探讨黄芪多糖对异丙肾上腺素(isopreterenol,ISO)刺激下心肌细胞SERCA2a表达的影响。方法采用Real-time PCR法检测SERCA2a mRNA的表达;利用蛋白质免疫印迹法检测SERCA2a蛋白的表达。以4-硝基酚磷酸二钠(p-NPP)法检测SERCA2a的活性。结果与对照组相比,ISO组心肌细胞SERCA2a mRNA及蛋白的表达均明显降低,而黄芪多糖剂量依赖性地逆转上述降低。此外,黄芪多糖还可明显提高SERCA2a的活性。结论黄芪多糖可缓解ISO引起的SERCA2a表达及活性的下调。该作用可能是黄芪多糖缓解心肌细胞内Ca2+超载,进而发挥其心血管保护作用的重要机制。 展开更多

关键词 黄芪多糖 心肌细胞 异丙肾上腺素 Ca2+超载 SERCA2A 心肌保护

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蛋白激酶Wee1B在小鼠1-细胞期受精卵中的表达及其定位 被引量：6

4

作者 刘超 肖建英 +3 位作者 任丽莉 刘洋 马浚仁 于秉治 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期863-867,I0001,共6页

目的:检测小鼠1-细胞期受精卵各个细胞周期中蛋白激酶Wee1B的表达水平及其定位水平,初步阐明Wee1B对哺乳动物受精卵早期发育调控的机制。方法:超排卵获得小鼠1-细胞期受精卵,收集卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测Wee1B的mRN... 目的:检测小鼠1-细胞期受精卵各个细胞周期中蛋白激酶Wee1B的表达水平及其定位水平,初步阐明Wee1B对哺乳动物受精卵早期发育调控的机制。方法:超排卵获得小鼠1-细胞期受精卵,收集卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测Wee1B的mRNA和蛋白表达水平;放射自显影测定Wee1B活性;间接免疫荧光观察Wee1B在各个细胞时期的定位。结果:小鼠1-细胞期受精卵G1、S、G2和M期Wee1BmRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);S、G2和M期Wee1B蛋白表达量与G1期比较差异有统计学意义(P<0.01);与G1期比较,S、G2期Wee1B活性逐渐增高(P>0.05,P<0.01),M期Wee1B活性迅速下降(P<0.01)。G1期和S期细胞Wee1B蛋白偶联的红色荧光信号主要集中分布于细胞核,但在G2期细胞红色荧光信号弥散分布于细胞浆,在M末期和2-细胞期可见红色荧光信号又重新分布于细胞核,细胞浆内荧光减弱。结论:蛋白激酶Wee1B在小鼠1-细胞期受精卵各个细胞周期动态表达,Wee1B蛋白存在核浆转位,Wee1B的定位变化可能调控小鼠受精卵有丝分裂。 展开更多

关键词 Wee1B Wee1蛋白 小鼠 合子 蛋白表达 蛋白定位

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左卡尼汀通过抑制钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ信号通路抑制过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞凋亡 被引量：8

5

作者 戴红良 贾桂枝 +4 位作者 刘堃 梁春光 张林 张志刚 王洪新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1250-1254,共5页

目的:观察左卡尼汀对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:利用200μmol/L H2O2刺激12 h,建立体外原代培养新生乳鼠心肌细胞凋亡模型。Ca2+螯合剂1,2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸(BAPTA)... 目的:观察左卡尼汀对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:利用200μmol/L H2O2刺激12 h,建立体外原代培养新生乳鼠心肌细胞凋亡模型。Ca2+螯合剂1,2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸(BAPTA)、钙调素依赖蛋白激酶II(CaMKII)特异性抑制剂KN93及左卡尼汀分别于加入H2O2前30 min或1 h加入,以检测这3种药物对H2O2刺激下心肌细胞活力、细胞凋亡、细胞内静息钙浓度([Ca2+]i)及磷酸化CaMKII(p-CaMKII)表达的影响。利用MTT比色法检测心肌细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;利用激光共聚焦扫描检测[Ca2+]i;蛋白质免疫印迹法检测cleaved caspase-3及p-CaMKII的表达。结果:模型组经200μmol/L H2O2作用12 h后,细胞活力显著下降,细胞凋亡率显著增加。BAPTA、KN93及左卡尼汀预处理显著抑制上述细胞损伤。进一步研究发现,H2O2诱导的[Ca2+]i水平升高、cleaved caspase-3及p-CaMKII的表达增加均可被上述3种药物不同程度地抑制。结论:左卡尼汀可抑制H2O2所致的心肌细胞凋亡,该心肌保护作用可能与其抑制Ca2+/CaMKⅡ信号通路有关。 展开更多

关键词 肉碱 过氧化氢 心肌细胞 细胞凋亡 钙 钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ

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蛋白激酶CK2抑制剂TBB对甲状腺鳞癌细胞株SW579 CK2β和Akt表达的影响 被引量：5

6

作者 刘超 刘洋 +2 位作者 赵颂 王翠瑶 肖建英 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期276-280,共5页

目的:观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法:体外培养SW579细胞,实验分为对照组(未加任何处理组和DMSO组)、TBB组(终浓度为25μmol·L-1)和Wortmannin组(终浓度为100... 目的:观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法:体外培养SW579细胞,实验分为对照组(未加任何处理组和DMSO组)、TBB组(终浓度为25μmol·L-1)和Wortmannin组(终浓度为100 nmol·L-1)。MTT比色法测定细胞生长抑制率,同时测定蛋白激酶CK2的活性。采用RT-PCR方法检测SW579细胞CK2β及Akt的mRNA表达,分析各处理组CK2β及Akt基因表达变化。采用Western blotting方法检测SW579细胞CK2β及Akt的蛋白表达,分析各处理组CK2β及Akt的蛋白表达变化。结果:与对照组比较,TBB组SW579细胞生长抑制率明显增加(P<0.01),细胞内CK2的活性明显降低(P<0.01)。RT-PCR结果表明,与对照组比较,TBB组CK2β的mRNA表达水平显著降低(P<0.01),Akt的mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。Western blotting结果表明,与未处理组比较,Wortmannin组内源性CK2的活性无明显变化(P>0.05),TBB组CK2β的表达明显降低(P<0.01),同时Akt Thr308和Ser473磷酸化状态受到抑制(P<0.01),总Akt水平无明显变化。结论:TBB可降低SW579细胞蛋白激酶CK2β的表达,进而再下调Akt的活性。 展开更多

关键词 四溴苯三唑 甲状腺鳞癌 CK2β AKT/PKB SW579

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五味子多糖对甲状腺癌细胞株SW579凋亡及survivin表达的影响 被引量：25

7

作者 许珂玉 肖建英 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期279-283,I0002,共6页

目的:探讨五味子多糖对人甲状腺癌SW579细胞株的生长抑制作用及其机制。方法:48只成年雄性Wistar大鼠分为阴性对照组和药物组,阴性对照组予以生理盐水,药物治疗组予以不同剂量的五味子多糖,分别提取其血清。SW579细胞分为空白组、阴性... 目的:探讨五味子多糖对人甲状腺癌SW579细胞株的生长抑制作用及其机制。方法:48只成年雄性Wistar大鼠分为阴性对照组和药物组,阴性对照组予以生理盐水,药物治疗组予以不同剂量的五味子多糖,分别提取其血清。SW579细胞分为空白组、阴性对照组和药物组。空白组为15%小牛血清的RPMI-1640培养液,阴性对照组细胞加入阴性组大鼠的纯化血清,药物组分别加入不同浓度(100、200和400mg·kg-1)的含药血清,AO/EB荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况,MTT法检测细胞增殖情况,Western blotting检测细胞survivin的表达。结果:流式细胞术结果显示,低、中和高剂量药物组细胞凋亡率为8.63%、35.63%和38.32%,明显高于空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率(4.23%和4.10%)(P<0.01),并随剂量增加而增加。阴性对照组细胞生长抑制率为(0.12±0.06)%,低、中和高剂量药物组细胞生长抑制率为(27.51±1.62)%、(34.69±0.79)%和(45.83±1.33)%,药物组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。Western blotting检测低、中、高剂量药物组细胞survivin的表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。结论:五味子多糖能有效抑制人甲状腺癌细胞株SW579中survivin基因表达,诱导SW579细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。 展开更多

关键词 生存素 五味子多糖 细胞凋亡 甲状腺肿瘤 SW579细胞

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肌肽对ECV304细胞缺氧损伤的保护作用 被引量：4

8

作者 白剑 张俊 +5 位作者 迟戈 刘丽娜 樊淼 刘海东 李伟伟 杨菁 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期52-54,共3页

目的研究肌肽对缺氧所致人体内皮细胞系ECV304细胞损伤的影响。方法建立缺氧条件下ECV304细胞损伤模型,用MTT法观察肌肽对缺氧损伤的ECV304细胞活性的影响,测定细胞培养基中乳酸脱氨酶(LDH)活力,并对细胞骨架进行考马斯亮蓝R-250染色观... 目的研究肌肽对缺氧所致人体内皮细胞系ECV304细胞损伤的影响。方法建立缺氧条件下ECV304细胞损伤模型,用MTT法观察肌肽对缺氧损伤的ECV304细胞活性的影响,测定细胞培养基中乳酸脱氨酶(LDH)活力,并对细胞骨架进行考马斯亮蓝R-250染色观测其细胞结构。结果浓度为10～20 mmol/L肌肽孵育ECV304细胞6 h后,可以抑制缺氧12 h和24 h引起的ECV304细胞活性下降,同时减少LDH的释放,保持细胞骨架完整。结论肌肽对缺氧所致的ECV304细胞伤具有保护作用。 展开更多

关键词 肌肽 细胞骨架 ECV304细胞 缺氧

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下调蛋白激酶Wee1B表达对小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂的促进作用 被引量：3

9

作者 任丽莉 刘超 +4 位作者 刘乙蒙 孟智超 孙静 于秉治 肖建英 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期44-48,I0001,共6页

目的:利用特异性发夹结构Wee1BshRNA,探讨蛋白激酶Wee1B对小鼠受精卵早期发育的影响。方法:超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵并显微注射质粒,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、Control shRNA注射组和Wee1BshRNA注射组,收集各组卵细... 目的:利用特异性发夹结构Wee1BshRNA,探讨蛋白激酶Wee1B对小鼠受精卵早期发育的影响。方法:超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵并显微注射质粒,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、Control shRNA注射组和Wee1BshRNA注射组,收集各组卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测Wee1B shRNA的干涉效能;荧光显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率;放射自显影测定Wee1B活性。结果:与TE缓冲液和Control shRNA注射组比较,Wee1BshRNA注射组小鼠1-细胞期受精卵Wee1BmRNA水平和蛋白表达显著降低;与其他3组比较,Wee1BshRNA注射组Wee1B的激酶活性明显降低;未注射组、TE缓冲液注射组和Control shRNA注射组在hCG注射33h后1-细胞期受精卵的卵裂率分别为71.91%±1.74%、72.90%±2.25%和72.28%±2.06%,3组间比较差异无统计学意义(P>0.05);而Wee1BshRNA注射组的卵裂率提高18.00%,为90.00%±0.77%,与其他3组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:Wee1B表达沉默可提高小鼠1-细胞期受精卵的卵裂率,说明Wee1B负调控小鼠受精卵有丝分裂的进程。 展开更多

关键词 Wee1B 短发夹RNA 有丝分裂 受精卵 小鼠

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dbcAMP通过Cdc25B蛋白调控小鼠1-细胞期受精卵发育 被引量：3

10

作者 刘超 肖建英 +1 位作者 孙小涵 于秉治 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期925-932,共8页

为了研究PKA激活剂dbcAMP通过调控小鼠Cdc25B蛋白S149和S321位点磷酸化状态影响小鼠1-细胞期受精卵的发育,将质粒pBSK-Cdc25B-WT、pBSK-Cdc25B-S149A、pBSK-Cdc25B-S321A和pBSK-Cdc25B-S149A/S321A体外转录成mRNA;显微注射入S期受精卵中... 为了研究PKA激活剂dbcAMP通过调控小鼠Cdc25B蛋白S149和S321位点磷酸化状态影响小鼠1-细胞期受精卵的发育,将质粒pBSK-Cdc25B-WT、pBSK-Cdc25B-S149A、pBSK-Cdc25B-S321A和pBSK-Cdc25B-S149A/S321A体外转录成mRNA;显微注射入S期受精卵中,在2 mmol/LdbcAMP的M16培养基中培养,观察其对受精卵发育、MPF活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响.结果显示,在有dbcAMP存在时,各组受精卵卵裂时间延迟,但Cdc25B-S/A-mRNAs注射组受精卵卵裂率明显高于Cdc25B-WT-mRNA注射组,MPF活性提前达到高峰;CDC2-pTyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致.因此,在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠Cdc25B蛋白S149位点与S321位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式. 展开更多

关键词 细胞分裂周期25B蛋白 蛋白激酶A 有丝分裂促进因子 二丁酰环磷酸腺苷 小鼠受精卵

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左卡尼汀抑制过氧化氢介导的NFATc3核转位 被引量：3

11

作者 戴红良 黄雷 +3 位作者 贾桂枝 梁春光 李昕 戚春玲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1902-1904,1909,共4页

目的:探讨在过氧化氢(H2O2)刺激下,左卡尼汀对心肌细胞内胞浆活化T细胞核因子3(NFATc3)的表达及分布的影响。方法:以200μmol/L H2O2刺激心肌细胞12 h建立氧化应激模型。在药物处理组,于氧化刺激前30 min加入左卡尼汀及钙调神经磷酸酶(C... 目的:探讨在过氧化氢(H2O2)刺激下,左卡尼汀对心肌细胞内胞浆活化T细胞核因子3(NFATc3)的表达及分布的影响。方法:以200μmol/L H2O2刺激心肌细胞12 h建立氧化应激模型。在药物处理组,于氧化刺激前30 min加入左卡尼汀及钙调神经磷酸酶(CaN)特异性抑制剂环孢素A(CsA)。待刺激完成后,利用蛋白质免疫印迹法检测细胞内总NFATc3,以及胞浆内和胞核内NFATc3的水平,并以免疫荧光法检测NFATc3在细胞中的分布状况。结果:H2O2刺激不影响心肌细胞NFATc3的表达,但可诱导其由胞浆至胞核的转位。左卡尼汀预处理可以显著抑制NFATc3的核转位。结论:左卡尼汀可通过抑制NFATc3的核转位发挥其抗氧化应激损伤的作用。 展开更多

关键词 左卡尼汀 心肌细胞 氧化性应激 NFATc3蛋白

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Wee1B蛋白S15位点突变抑制小鼠1-细胞期受精卵的发育 被引量：3

12

作者 刘超 肖建英 +1 位作者 任丽莉 于秉治 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期52-59,共8页

为研究小鼠Wee1B蛋白S15位点磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,构建pcDNA3.1/V5-His-TOPO-Wee1B-S15A(Ser突变成Ala)/D(Ser突变成Asp)突变体,体外转录成mRNAs.对小鼠进行超排卵后当晚与雄鼠1∶1合笼,第2 d早取受精卵后培养至S... 为研究小鼠Wee1B蛋白S15位点磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,构建pcDNA3.1/V5-His-TOPO-Wee1B-S15A(Ser突变成Ala)/D(Ser突变成Asp)突变体,体外转录成mRNAs.对小鼠进行超排卵后当晚与雄鼠1∶1合笼,第2 d早取受精卵后培养至S期,显微注射Wee1B-WT(野生型)/KD(激酶失活型)-mRNAs和突变体Wee1B-S15A/D-mRNAs,观察其对受精卵发育、有丝分裂促进因子(MPF)活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响.结果表明,过表达Wee1B-WT和Wee1B-S15A/D可有效抑制受精卵有丝分裂进程,明显降低卵裂率.过表达模拟磷酸化的突变明显抑制MPF的活性,CDC2-pTyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致.因此,在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠Wee1B蛋白S15位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式. 展开更多

关键词 Wee1B 蛋白激酶A 有丝分裂促进因子 小鼠受精卵

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CDC25B蛋白亚细胞定位调控小鼠1-细胞期受精卵发育 被引量：2

13

作者 肖建英 刘超 +1 位作者 孙小涵 于秉治 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期33-41,共9页

为探讨小鼠细胞分裂周期25B(CDC25B)蛋白149位丝氨酸磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵中CDC25B的亚细胞定位和发育的影响,应用定制的CDC25B-pS149位的磷酸化和非磷酸化抗体检测小鼠1-细胞期受精卵各细胞时期的磷酸化和非磷酸化状态;应用... 为探讨小鼠细胞分裂周期25B(CDC25B)蛋白149位丝氨酸磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵中CDC25B的亚细胞定位和发育的影响,应用定制的CDC25B-pS149位的磷酸化和非磷酸化抗体检测小鼠1-细胞期受精卵各细胞时期的磷酸化和非磷酸化状态;应用免疫荧光观察各期受精卵中CDC25B蛋白的定位情况;将质粒pEGFP-CDC25B-WT、pEGFP-CDC25B-S149A和pEGFP-CDC25B-S149D融合质粒及空载体质粒显微注射入G1期受精卵中,观察不同显微注射组小鼠1-细胞期受精卵中外源性CDC25B蛋白亚细胞定位.结果显示,CDC25B-S149位丝氨酸在G1和S期被磷酸化,在G2和M期去磷酸化.1-细胞期受精卵从G2向M期的转换过程中,发生了CDC25B向细胞核区的移位,到2-细胞初期,部分CDC25B蛋白又从细胞核回到细胞浆.实验结果提示,小鼠1-细胞期受精卵G2/M期转换过程中,CDC25B的S149位点磷酸化修饰可能是对CDC25B细胞内定位及其活性的精确调节方式. 展开更多

关键词 细胞分裂周期25B 亚细胞定位 有丝分裂 点突变 小鼠受精卵

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BAG3蛋白Ser187位点磷酸化诱导人甲状腺癌FRO细胞上皮间质转化 被引量：2

14

作者 陈明红 李美欣 +3 位作者 刘宝琴 李超 王华芹 李宁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1213-1219,共7页

Bcl-2相关抗凋亡蛋白3(Bcl-2 associated athanogene 3,BAG3)是BAG家族的重要成员,调节肿瘤细胞的粘附、迁移和侵袭,促进恶性肿瘤的复发和转移.本室前期工作证明,PKCδ可催化BAG3的Ser187位点磷酸化.本文研究BAG3蛋白磷酸化修饰对甲状腺... Bcl-2相关抗凋亡蛋白3(Bcl-2 associated athanogene 3,BAG3)是BAG家族的重要成员,调节肿瘤细胞的粘附、迁移和侵袭,促进恶性肿瘤的复发和转移.本室前期工作证明,PKCδ可催化BAG3的Ser187位点磷酸化.本文研究BAG3蛋白磷酸化修饰对甲状腺癌FRO细胞EMT表型转化的影响.稳定转染野生型WT-BAG3、模拟磷酸化型S187D-BAG3、阻碍磷酸化型S187A-BAG3 FRO细胞后,观察细胞形态的变化.结果显示,稳定转染模拟磷酸化型S187D-BAG3引起甲状腺癌FRO细胞呈现明显的间质细胞形态.实时PCR和Western印迹,结果显示,稳定表达S187D-BAG3显著上调间质细胞标记物N-cadherin和波形蛋白mRNA与蛋白质在FRO细胞的表达,但下调上皮细胞标记物E-cadherin的mRNA和蛋白质的表达.同时,免疫荧光结果显示,稳定过表达S187D-BAG3的FRO细胞,E-cadherin和β-catenin出现向核周的内化.本文结果提示,BAG3蛋白磷酸化修饰可诱导甲状腺癌FRO细胞上皮间质转化. 展开更多

关键词 Bcl-2相关抗凋亡蛋白3(BAG3) 磷酸化 上皮细胞间质转化

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蛋白激酶CK2β小干扰RNA促进小鼠受精卵早期发育 被引量：1

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作者 刘超 任丽莉 +1 位作者 刘洋 肖建英 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期678-682,共5页

目的:利用特异性小发夹RNA(siRNA)寡核苷酸片段,研究蛋白激酶CK2调节亚基CK2β对小鼠受精卵早期发育的影响,阐明调控小鼠受精卵早期发育的机制。方法:超排卵获得小鼠1-细胞期受精卵,分别显微注射TE缓冲液、scramble siRNA和CK2βsiRNA,... 目的:利用特异性小发夹RNA(siRNA)寡核苷酸片段,研究蛋白激酶CK2调节亚基CK2β对小鼠受精卵早期发育的影响,阐明调控小鼠受精卵早期发育的机制。方法:超排卵获得小鼠1-细胞期受精卵,分别显微注射TE缓冲液、scramble siRNA和CK2βsiRNA,收集卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测CK2βsiRNA的干涉效能;相差显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率;放射自显影测定M期促进因子(MPF)活性。结果:与TE缓冲液和scramble siRNA组比较,CK2βsiRNA组CK2β的mRNA水平和蛋白表达显著降低(P<0.01),MPF的活性明显升高(P<0.01),在人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射后28.5h达到高峰;受精卵第一次有丝分裂加速,CK2βsiRNA组在hCG注射后28.5h大多数受精卵已经分裂为2-细胞期胚胎;hCG注射后32.0h卵裂率为89.5%,与TE缓冲液和scramble siRNA组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CK2βsiRNA通过提前激活MPF活性,进而促进小鼠1-细胞期受精卵的发育。 展开更多

关键词 蛋白激酶CK2β SIRNA M期促进因子 小鼠受精卵

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蛋白激酶CK2抑制剂四溴苯三唑可促进卵巢癌CAOV3细胞凋亡 被引量：6

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作者 闫威 任丽莉 +4 位作者 孟智超 郭淼 刘乙蒙 刘超 肖建英 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第14期1478-1481,共4页

目的观察蛋白激酶CK2抑制剂四溴苯三唑(4,5,6,7-tetrabromobenzotriazole,TBB)对卵巢癌CAOV3细胞增殖、凋亡及细胞凋亡调控因子Bcl-2、Bax表达的影响,进一步探讨TBB促进卵巢癌CAOV3细胞凋亡的作用机制。方法体外培养CAOV3细胞,将其分为... 目的观察蛋白激酶CK2抑制剂四溴苯三唑(4,5,6,7-tetrabromobenzotriazole,TBB)对卵巢癌CAOV3细胞增殖、凋亡及细胞凋亡调控因子Bcl-2、Bax表达的影响,进一步探讨TBB促进卵巢癌CAOV3细胞凋亡的作用机制。方法体外培养CAOV3细胞,将其分为对照组、DMSO组和TBB组(终浓度为12.5、25、50、75μmol/L)。MTT测定各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组卵巢癌CAOV3细胞凋亡;Western blot检测各组CAOV3细胞CK2α及凋亡相关因子Bcl-2、Bax的表达。结果与对照组[(92.00±4.36)%]比较,TTB各浓度组细胞增殖率分别为(73.00±2.76)%、(67.00±3.51)%、(52.00±2.83)%和(40.00±1.75)%,随着TBB浓度的增加,其对CAOV3细胞增殖的抑制呈剂量依赖性增强(P<0.01);细胞凋亡比例也呈剂量依赖性增加;与对照组比较,CK2α的表达逐渐降低,Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加(P<0.01)。结论 TBB可通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和促进促凋亡蛋白Bax的表达而促进卵巢癌CAOV3细胞凋亡。 展开更多

关键词 CK2α 四溴苯三唑 卵巢肿瘤 CAOV3细胞 细胞凋亡

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Ck2α、β-catenin和survivin在卵巢癌组织中表达的检测及其临床应用价值 被引量：3

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作者 吴爽 刘乙蒙 +2 位作者 刘超 郭琳 肖建英 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1256-1260,1337,共6页

目的:研究酪蛋白激酶2α(Ck2α)、β-catenin和survivin在卵巢癌组织中的表达情况,分析三者在卵巢癌中表达的相关性,探讨其临床应用价值。方法:采用免疫组织化学法检测8例卵巢单纯性囊肿组织、8例卵巢良性肿瘤组织和29例卵巢癌组织中Ck... 目的:研究酪蛋白激酶2α(Ck2α)、β-catenin和survivin在卵巢癌组织中的表达情况,分析三者在卵巢癌中表达的相关性,探讨其临床应用价值。方法:采用免疫组织化学法检测8例卵巢单纯性囊肿组织、8例卵巢良性肿瘤组织和29例卵巢癌组织中Ck2α、β-catenin和survivin的表达情况,分析3种蛋白在卵巢癌中表达的相关性及与患者临床病理特征的关系。结果:与卵巢单纯性囊肿和良性卵巢肿瘤组织比较,卵巢癌组织中Ck2α、β-catenin和survivin蛋白表达水平明显升高(P<0.05);卵巢癌组织中Ck2α与β-catenin和survivin表达水平呈正相关关系(r=0.438和r=0.479,P<0.05);在不同分化程度卵巢癌组织中,与低-中分化组比较,高分化组Ck2α、β-catenin和survivin蛋白阳性表达率明显降低(P<0.05);不同FIGO分期中,与Ⅰ期组比较,Ⅱ期组和Ⅲ期组Ck2α、β-catenin和survivin蛋白阳性表达率升高,3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ck2α、β-catenin和survivin在卵巢癌组织中的蛋白表达水平增加,且三者呈正相关,可能与卵巢癌的发生发展有关;Ck2α、β-catenin和survivin三者联合检测具有重要的临床应用价值。 展开更多

关键词 酪蛋白激酶2α 卵巢肿瘤 CASEIN KINASE 2α

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紫杉醇白蛋白片段纳米粒的制备 被引量：2

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作者 高原 于洪儒 王洪新 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期795-798,共4页

目的:利用蛋白酶解和纳米粒技术在白蛋白片段的基础上筛选制备紫杉醇纳米粒的新型载体,并考察相关理化指标。方法:利用牛血白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)酶解片段作为载体,分散乳化-旋蒸去溶剂法制备紫杉醇-BSA酶解片段-纳米粒,在... 目的:利用蛋白酶解和纳米粒技术在白蛋白片段的基础上筛选制备紫杉醇纳米粒的新型载体,并考察相关理化指标。方法:利用牛血白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)酶解片段作为载体,分散乳化-旋蒸去溶剂法制备紫杉醇-BSA酶解片段-纳米粒,在外观、粒径分布、收率、包封率、载药量及体外释药性方面对样品进行考察。结果:BSA酶解后经粗分离得到4个片段组,选择第4组为候选载体,得到的纳米粒外观形态圆整、均匀,初制备纳米粒混悬剂平均粒径为150.2 nm,平均收率为(45.132±0.903)%,平均包封率为(50.246±0.712)%,平均载药量为(4.804±0.101)%,48 h累计释药82.4%。结论:利用白蛋白酶解片段制备紫杉醇纳米粒是可行的,为扩大紫杉醇纳米粒的载体来源、降低制备成本提供了可能。 展开更多

关键词 紫杉醇 纳米粒 载体 白蛋白片段

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