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抗periostin人源化单克隆抗体的制备及鉴定
1
作者
李雪娇
赵航
+6 位作者
张朔
康慧颖
周艳楠
贾爽
路旭
赵洪礼
海洋
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第12期2628-2633,共6页
目的:制备抗periostin人源化单克隆抗体,建立稳定的细胞株。方法:以本实验室自主研发的抗periostin鼠单抗为基础,提取细胞总RNA,经RT-PCR扩增VH和VL基因测序获得可变区序列,将小鼠抗体CDR区域移植到人源抗体框架受体区域,基因合成后亚...
目的:制备抗periostin人源化单克隆抗体,建立稳定的细胞株。方法:以本实验室自主研发的抗periostin鼠单抗为基础,提取细胞总RNA,经RT-PCR扩增VH和VL基因测序获得可变区序列,将小鼠抗体CDR区域移植到人源抗体框架受体区域,基因合成后亚克隆到表达载体PATX-GS2,稳定转染CHO细胞,经MSX加压筛选、有限稀释获得单克隆细胞株。结果:经RT-PCR扩增V_(H)和V_(L)基因,确定轻重链可变区序列,通过CDR移植方法,成功对鼠源单抗进行人源化改造,并构建了真核质粒载体,经转染至CHO细胞表达,成功获得人源化抗periostin抗体,ELISA和Western blot结果证明,制备的人源化抗体具有良好的活性和亲和力。结论:本研究成功制备了抗periostin人源化单克隆抗体,且该人源化抗体可以与体内periostin蛋白特异性结合,具有生物学活性,为精准治疗视网膜纤维化病变、组织器官纤维化病变及恶性肿瘤提供了科学数据。
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关键词
PERIOSTIN
人源化单克隆抗体
视网膜纤维化
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职称材料
抗Periostin单克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
1
2
作者
曹启江
李雪娇
+3 位作者
张朔
刘畅
张鹏
赵洪礼(指导)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期67-70,75,共5页
目的:制备抗Periostin单克隆抗体并鉴定其免疫学性能,为后期临床应用奠定基础。方法:表达并纯化Periostin的GST融合蛋白,经过免疫小鼠、细胞融合及亚克隆筛选,制备效价良好的高亲和力单克隆抗体,并用免疫组化实验鉴定其免疫学性能。结果...
目的:制备抗Periostin单克隆抗体并鉴定其免疫学性能,为后期临床应用奠定基础。方法:表达并纯化Periostin的GST融合蛋白,经过免疫小鼠、细胞融合及亚克隆筛选,制备效价良好的高亲和力单克隆抗体,并用免疫组化实验鉴定其免疫学性能。结果:获得6株杂交瘤细胞株,均能稳定分泌高亲和力抗体,经酶联免疫吸附测定、Western blot和免疫组化实验证实均能特异性识别人的Periostin,显微镜下观察发现Periostin在结直肠癌、乳腺癌等肿瘤患者的组织切片中表达水平显著高于健康人。结论:成功制备了高亲和力、特异性强的抗人Periostin单克隆抗体,为小分子抗体以及抗体人源化制备奠定了基础,进而为治疗人体内组织器官纤维化提供理论依据。
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关键词
PERIOSTIN
细胞融合
杂交瘤细胞
单克隆抗体
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职称材料
题名
抗periostin人源化单克隆抗体的制备及鉴定
1
作者
李雪娇
赵航
张朔
康慧颖
周艳楠
贾爽
路旭
赵洪礼
海洋
机构
辽宁何氏医学院基础医学院
沈阳百发科技有限公司
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第12期2628-2633,共6页
基金
辽宁省民生科技计划项目(2021JH2/10300028)。
文摘
目的:制备抗periostin人源化单克隆抗体,建立稳定的细胞株。方法:以本实验室自主研发的抗periostin鼠单抗为基础,提取细胞总RNA,经RT-PCR扩增VH和VL基因测序获得可变区序列,将小鼠抗体CDR区域移植到人源抗体框架受体区域,基因合成后亚克隆到表达载体PATX-GS2,稳定转染CHO细胞,经MSX加压筛选、有限稀释获得单克隆细胞株。结果:经RT-PCR扩增V_(H)和V_(L)基因,确定轻重链可变区序列,通过CDR移植方法,成功对鼠源单抗进行人源化改造,并构建了真核质粒载体,经转染至CHO细胞表达,成功获得人源化抗periostin抗体,ELISA和Western blot结果证明,制备的人源化抗体具有良好的活性和亲和力。结论:本研究成功制备了抗periostin人源化单克隆抗体,且该人源化抗体可以与体内periostin蛋白特异性结合,具有生物学活性,为精准治疗视网膜纤维化病变、组织器官纤维化病变及恶性肿瘤提供了科学数据。
关键词
PERIOSTIN
人源化单克隆抗体
视网膜纤维化
Keywords
Periostin
Humanized monoclonal antibody
Retinal fibrosis
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
抗Periostin单克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
1
2
作者
曹启江
李雪娇
张朔
刘畅
张鹏
赵洪礼(指导)
机构
沈阳大学生命科学与工程
学院
辽宁何氏医学院基础医学院
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期67-70,75,共5页
基金
辽宁省中央引导地方科技发展专项项目(2018217004)。
文摘
目的:制备抗Periostin单克隆抗体并鉴定其免疫学性能,为后期临床应用奠定基础。方法:表达并纯化Periostin的GST融合蛋白,经过免疫小鼠、细胞融合及亚克隆筛选,制备效价良好的高亲和力单克隆抗体,并用免疫组化实验鉴定其免疫学性能。结果:获得6株杂交瘤细胞株,均能稳定分泌高亲和力抗体,经酶联免疫吸附测定、Western blot和免疫组化实验证实均能特异性识别人的Periostin,显微镜下观察发现Periostin在结直肠癌、乳腺癌等肿瘤患者的组织切片中表达水平显著高于健康人。结论:成功制备了高亲和力、特异性强的抗人Periostin单克隆抗体,为小分子抗体以及抗体人源化制备奠定了基础,进而为治疗人体内组织器官纤维化提供理论依据。
关键词
PERIOSTIN
细胞融合
杂交瘤细胞
单克隆抗体
Keywords
Periostin
Cell fusion
Hybridoma cells
Monoclonal antibody
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗periostin人源化单克隆抗体的制备及鉴定
李雪娇
赵航
张朔
康慧颖
周艳楠
贾爽
路旭
赵洪礼
海洋
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
抗Periostin单克隆抗体的制备及鉴定
曹启江
李雪娇
张朔
刘畅
张鹏
赵洪礼(指导)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
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职称材料
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