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家蝇幼虫血淋巴蛋白组及血淋巴中热稳定蛋白研究
被引量：
3
1
作者
张勇
吴建伟
+1 位作者
付萍
国果
《四川动物》
CSCD
北大核心
2012年第6期887-891,共5页
目的初步研究家蝇幼虫血淋巴蛋白组学特征及其中的热稳定蛋白。方法使用破壁法提取三龄幼虫血淋巴原液,设置全血淋巴组、沸水浴处理组,采用不同pH范围双向电泳胶条,分析血淋巴中蛋白的pH、分子量分布特点,采用二级质谱对蛋白点进行分子...
目的初步研究家蝇幼虫血淋巴蛋白组学特征及其中的热稳定蛋白。方法使用破壁法提取三龄幼虫血淋巴原液,设置全血淋巴组、沸水浴处理组,采用不同pH范围双向电泳胶条,分析血淋巴中蛋白的pH、分子量分布特点,采用二级质谱对蛋白点进行分子鉴定。结果家蝇幼虫血淋巴中蛋白的分子量主要分布在10kDa～66kDa之间,采用pH3～10的IPG胶,检测到286个蛋白点,采用pH4～7的IPG胶,测到601个蛋白点;血淋巴经沸水浴处理后,检测到41个蛋白点,分子量低于30kDa,比未处理组减少了93.1%,对其中11个蛋白点进行质谱分析,鉴定出4个功能蛋白,包括存储蛋白、气味结合蛋白、铁蛋白重链样蛋白和铁蛋白2轻链蛋白同系物。结论双向电泳能很好地分析家蝇幼虫血淋巴中的蛋白,血淋巴中的蛋白等电点主要分布在pH4～7之间;血淋巴经沸水浴处理后可去掉大量变性蛋白,其上清中可能包含耐热性较好的功能蛋白。
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关键词
家蝇
血淋巴
蛋白组
双向电泳
热稳定蛋白
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职称材料
亚洲带绦虫60S核糖体蛋白L8基因的克隆表达和免疫学分析
被引量：
1
2
作者
王宇
戴佳琳
+1 位作者
黄江
廖兴江
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第8期731-733,737,共4页
目的原核克隆表达亚洲带绦虫成虫60S核糖体蛋白L8基因(TaRPL8),探索其应用前景。方法用RT-PCR方法从亚洲带绦虫成虫cDNA中获取RPL8基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进...
目的原核克隆表达亚洲带绦虫成虫60S核糖体蛋白L8基因(TaRPL8),探索其应用前景。方法用RT-PCR方法从亚洲带绦虫成虫cDNA中获取RPL8基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析。结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-TaRPL8重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL21/DE3中获得高效表达,亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别但不能够被正常大鼠血清识别,表明其具有免疫原性。结论亚洲带绦虫成虫TaRPL8基因可在大肠埃希菌BL21/DE3中获得具有免疫原性的表达,为进一步的功能研究奠定了基础。
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关键词
亚洲带绦虫
60S核糖体蛋白L8基因
基因克隆
原核表达
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职称材料
白纹伊蚊唾液腺serpin1基因的可变剪接分析与原核表达
3
作者
程金芝
孙宇
+2 位作者
陈璐
刘鉴
吴家红
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期473-478,共6页
目的克隆并原核表达白纹伊蚊唾液腺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因1(Aalbserpin-1)。方法根据NCBI网站上白纹伊蚊Aalbserpin-1(AY826096.1)的序列设计引物,用RT-PCR从白纹伊蚊广州株中获取Aalbserpin-1全长基因序列,并进行生物信息学分析。将...
目的克隆并原核表达白纹伊蚊唾液腺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因1(Aalbserpin-1)。方法根据NCBI网站上白纹伊蚊Aalbserpin-1(AY826096.1)的序列设计引物,用RT-PCR从白纹伊蚊广州株中获取Aalbserpin-1全长基因序列,并进行生物信息学分析。将目的片段克隆到原核表达载体pET28a(+),转化到大肠杆菌中诱导表达。利用实时荧光定量RTPCR分析Aalbserpin-1_2基因在白纹伊蚊不同组织中的表达差异。结果 PCR扩增获得Aalbserpin-1基因两个转录本(Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2),Aalbserpin1_1的基因序列为1 260bp,编码419个氨基酸;Aalbserpin1_2的基因序列为1 332bp,编码443个氨基酸,均具有seprin结构域,Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2与Aalbserpin-1(AY826096.1)相比,相似性分别为95%和90%。两个转录本比较,Aalbserpin1_2中含有24个氨基酸的可变剪接子正好位于其功能活性中心环(RCL)上。以Aalbserpin1_2序列为模板,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒。SDS-PAGE结果显示目的基因在Origami(DE3)中表达,重组蛋白相对分子量(Mr)约为50 000Da,经亲和层析获得目的蛋白。组织表达谱显示Aalbserpin-1_2在唾液腺(SG)、中肠(MG,P>0.05)丰富表达,脂肪体低表达(FB,P<0.05)。结论白纹伊蚊广州株Aalbserpin-1基因具有两个可变剪接子,其中Aalbserpin-1_2在唾液腺、中肠丰富表达,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒并获得重组蛋白。
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关键词
丝氨酸蛋白酶抑制剂
可变剪接子
克隆表达
白纹伊蚊
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职称材料
题名
家蝇幼虫血淋巴蛋白组及血淋巴中热稳定蛋白研究
被引量：
3
1
作者
张勇
吴建伟
付萍
国果
机构
贵阳医学院现代病原生物学实验室
出处
《四川动物》
CSCD
北大核心
2012年第6期887-891,共5页
基金
高等学校博士学科点专项科研基金(200806600001)资助
国家自然科学基金(No.30960343)
贵州省教育厅培育项目[No.(2009)0137]
文摘
目的初步研究家蝇幼虫血淋巴蛋白组学特征及其中的热稳定蛋白。方法使用破壁法提取三龄幼虫血淋巴原液,设置全血淋巴组、沸水浴处理组,采用不同pH范围双向电泳胶条,分析血淋巴中蛋白的pH、分子量分布特点,采用二级质谱对蛋白点进行分子鉴定。结果家蝇幼虫血淋巴中蛋白的分子量主要分布在10kDa～66kDa之间,采用pH3～10的IPG胶,检测到286个蛋白点,采用pH4～7的IPG胶,测到601个蛋白点;血淋巴经沸水浴处理后,检测到41个蛋白点,分子量低于30kDa,比未处理组减少了93.1%,对其中11个蛋白点进行质谱分析,鉴定出4个功能蛋白,包括存储蛋白、气味结合蛋白、铁蛋白重链样蛋白和铁蛋白2轻链蛋白同系物。结论双向电泳能很好地分析家蝇幼虫血淋巴中的蛋白,血淋巴中的蛋白等电点主要分布在pH4～7之间;血淋巴经沸水浴处理后可去掉大量变性蛋白,其上清中可能包含耐热性较好的功能蛋白。
关键词
家蝇
血淋巴
蛋白组
双向电泳
热稳定蛋白
Keywords
housefly
hemolymph
proteomies
2D-electrophoresis
thermostable protein
分类号
R384.2 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
亚洲带绦虫60S核糖体蛋白L8基因的克隆表达和免疫学分析
被引量：
1
2
作者
王宇
戴佳琳
黄江
廖兴江
机构
贵阳医学院
寄生虫学教研室
贵阳医学院现代病原生物学实验室
贵阳医学院
多媒体形态学
实验室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第8期731-733,737,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30760227)
贵州省科技攻关项目[黔科合NY字(2008)3060]资助
文摘
目的原核克隆表达亚洲带绦虫成虫60S核糖体蛋白L8基因(TaRPL8),探索其应用前景。方法用RT-PCR方法从亚洲带绦虫成虫cDNA中获取RPL8基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析。结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-TaRPL8重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL21/DE3中获得高效表达,亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别但不能够被正常大鼠血清识别,表明其具有免疫原性。结论亚洲带绦虫成虫TaRPL8基因可在大肠埃希菌BL21/DE3中获得具有免疫原性的表达,为进一步的功能研究奠定了基础。
关键词
亚洲带绦虫
60S核糖体蛋白L8基因
基因克隆
原核表达
Keywords
Taenia s^ginata asiatica ~ 60S ribosomal protein L8 gene
molecular cloning ~ prokaryotic expression
分类号
R383 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
白纹伊蚊唾液腺serpin1基因的可变剪接分析与原核表达
3
作者
程金芝
孙宇
陈璐
刘鉴
吴家红
机构
贵阳医学院
寄生虫教研室
贵阳医学院现代病原生物学实验室
贵阳医学院
附属医院
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期473-478,共6页
基金
国家自然科学基金(No.30600515
No.81060138)
贵州省高校优秀科技创新人才支持计划(黔教研发[2012]449)联合资助~~
文摘
目的克隆并原核表达白纹伊蚊唾液腺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因1(Aalbserpin-1)。方法根据NCBI网站上白纹伊蚊Aalbserpin-1(AY826096.1)的序列设计引物,用RT-PCR从白纹伊蚊广州株中获取Aalbserpin-1全长基因序列,并进行生物信息学分析。将目的片段克隆到原核表达载体pET28a(+),转化到大肠杆菌中诱导表达。利用实时荧光定量RTPCR分析Aalbserpin-1_2基因在白纹伊蚊不同组织中的表达差异。结果 PCR扩增获得Aalbserpin-1基因两个转录本(Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2),Aalbserpin1_1的基因序列为1 260bp,编码419个氨基酸;Aalbserpin1_2的基因序列为1 332bp,编码443个氨基酸,均具有seprin结构域,Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2与Aalbserpin-1(AY826096.1)相比,相似性分别为95%和90%。两个转录本比较,Aalbserpin1_2中含有24个氨基酸的可变剪接子正好位于其功能活性中心环(RCL)上。以Aalbserpin1_2序列为模板,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒。SDS-PAGE结果显示目的基因在Origami(DE3)中表达,重组蛋白相对分子量(Mr)约为50 000Da,经亲和层析获得目的蛋白。组织表达谱显示Aalbserpin-1_2在唾液腺(SG)、中肠(MG,P>0.05)丰富表达,脂肪体低表达(FB,P<0.05)。结论白纹伊蚊广州株Aalbserpin-1基因具有两个可变剪接子,其中Aalbserpin-1_2在唾液腺、中肠丰富表达,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒并获得重组蛋白。
关键词
丝氨酸蛋白酶抑制剂
可变剪接子
克隆表达
白纹伊蚊
Keywords
serine protease inhibitor
alternative splicing
cloning and expression
Aedes albopictus
分类号
R384 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
家蝇幼虫血淋巴蛋白组及血淋巴中热稳定蛋白研究
张勇
吴建伟
付萍
国果
《四川动物》
CSCD
北大核心
2012
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
亚洲带绦虫60S核糖体蛋白L8基因的克隆表达和免疫学分析
王宇
戴佳琳
黄江
廖兴江
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
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职称材料
3
白纹伊蚊唾液腺serpin1基因的可变剪接分析与原核表达
程金芝
孙宇
陈璐
刘鉴
吴家红
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
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