转基因作物标记蛋白潜在致敏性的生物信息学预测 被引量：4

1

作者 赵杰宏 韩洁 赵德刚 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 2010年第3期76-79,共4页

转基因作物表达的标记蛋白带来潜在致敏性顾虑。根据FAO/WHO决策方案,使用SDAP、Farrp和NCBI三大数据库对GUS、NptII和OPH的潜在致敏性进行评估。在线Blast或Fasta发现,OPH、GUS和NptII全序列或连续80aa的匹配性皆不存在致敏性可能。连... 转基因作物表达的标记蛋白带来潜在致敏性顾虑。根据FAO/WHO决策方案,使用SDAP、Farrp和NCBI三大数据库对GUS、NptII和OPH的潜在致敏性进行评估。在线Blast或Fasta发现,OPH、GUS和NptII全序列或连续80aa的匹配性皆不存在致敏性可能。连续6aa比对中,OPH有2个片段与大豆、小麦和橡胶树的前纤维蛋白或德国蟑螂过敏原相关蛋白存在序列一致;GUS有1个片段与埃及伊蚊唾液腺过敏原存在序列一致;NptII有1个片段与摇蚊血红蛋白过敏原存在序列一致,但匹配的6aa序列皆未在各蛋白抗原性决定部位,是假阳性结果。初步证明转基因植物表达的GUS、NptII和OPH不具有潜在的致敏性风险。 展开更多

关键词 遗传转化 标记蛋白 致敏性 生物信息学

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肠菌群体外转化对甘草药用成分及镇咳作用的影响 被引量：6

2

作者 韩洁 赵晶 +2 位作者 田维毅 张玉玲 王婷 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第4期422-424,共3页

目的研究肠菌群体外转化对甘草药用主要成分及镇咳作用的影响。方法采用健康人新鲜粪便厌氧培养制备肠菌群转化模型,用HPLC对转化前后的甘草水提液进行分析,并以氨水引咳法观察肠菌群转化前后甘草提取液对小鼠的镇咳作用。结果 HPLC分... 目的研究肠菌群体外转化对甘草药用主要成分及镇咳作用的影响。方法采用健康人新鲜粪便厌氧培养制备肠菌群转化模型,用HPLC对转化前后的甘草水提液进行分析,并以氨水引咳法观察肠菌群转化前后甘草提取液对小鼠的镇咳作用。结果 HPLC分析结果显示:肠菌群转化前,甘草水提液中甘草酸的含量较高,但未检出甘草次酸;经肠菌群转化后,甘草次酸的含量明显增加。镇咳实验结果显示:转化后的甘草水提液对实验小鼠的咳嗽潜伏期及咳嗽次数抑制率高于转化前,其延长咳嗽潜伏期作用具有剂量依赖性。结论甘草经肠菌群转化后能够提高甘草次酸含量,这为筛选和利用肠道菌株转化甘草组分提供依据。 展开更多

关键词 甘草酸 甘草次酸 肠菌群 生物转化 高效液相色谱

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肠菌群对吴茱萸体外代谢转化的作用 被引量：3

3

作者 韩洁 王婷 +1 位作者 张玉玲 田维毅 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第7期112-115,共4页

为研究贵州道地药材吴茱萸提取液经肠菌群转化前后其有效成分吴茱萸碱含量的变化和抑菌活性,对转化前后的吴茱萸提取液进行了HPLC分析,并对其抑菌活性进行了纸片法检测。结果表明:经肠菌群转化后提取液中吴茱萸碱的含量逐渐增加,而抑菌... 为研究贵州道地药材吴茱萸提取液经肠菌群转化前后其有效成分吴茱萸碱含量的变化和抑菌活性,对转化前后的吴茱萸提取液进行了HPLC分析,并对其抑菌活性进行了纸片法检测。结果表明:经肠菌群转化后提取液中吴茱萸碱的含量逐渐增加,而抑菌能力也随着含量的增加而增强,并在转化后8 h吴茱萸碱的含量和抑菌能力均达到最大。其转化后的提取液对大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)的抑菌效果明显增强,抑菌圈直径最大可达16 mm。 展开更多

关键词 吴茱萸 提取液 吴茱萸碱 肠菌群 代谢转化

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篦子三尖杉产高三尖杉酯碱内生真菌的分离与鉴定 被引量：7

4

作者 韩洁 赵杰宏 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第1期158-161,共4页

为从药用植物篦子三尖杉中分离筛选产高三尖杉酯碱的内生真菌,采用枝叶外植体表面消毒后接种在PDA平板基上培养的方法分离筛选内生真菌,并对分离菌株进行了HPLC分析和ITS分子鉴定。结果表明:筛选出的10个菌株菌落形态和显微结构有明显差... 为从药用植物篦子三尖杉中分离筛选产高三尖杉酯碱的内生真菌,采用枝叶外植体表面消毒后接种在PDA平板基上培养的方法分离筛选内生真菌,并对分离菌株进行了HPLC分析和ITS分子鉴定。结果表明:筛选出的10个菌株菌落形态和显微结构有明显差异,其中,gyzy-7、gyzy-8、gyzy-9和gyzy-11具产孢结构;gyzy-6、gyzy-8和gyzy-9可产生高三尖杉酯碱;gyzy-6为裂褶菌属,gyzy-8为叶点霉属,gyzy-9为平革菌属真菌。从篦子三尖杉中初步分离出产高三尖杉酯碱的内生真菌。 展开更多

关键词 篦子三尖杉 内生真菌 高三尖杉酯碱 高效液相色谱

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转基因表达有机磷水解酶(OPH)提高黄瓜降解蝇毒磷能力的初步研究 被引量：3

5

作者 赵杰宏 韩洁 赵德刚 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第1期182-186,共5页

为快速提高黄瓜降解有机磷农药残留的能力，选取能广泛降解有机磷农药的有机磷水解酶（OPH）为表达蛋白，构建CaMV35S启动子驱动有机磷水解酶基因（opd）的植物表达载体pSOP，经双酶切证明重组载体含有插入位置和方向皆正确的目的片段... 为快速提高黄瓜降解有机磷农药残留的能力，选取能广泛降解有机磷农药的有机磷水解酶（OPH）为表达蛋白，构建CaMV35S启动子驱动有机磷水解酶基因（opd）的植物表达载体pSOP，经双酶切证明重组载体含有插入位置和方向皆正确的目的片段。通过农杆菌介导遗传转化黄瓜子叶节，诱导和筛选出9株抗性苗，获得3株GUS染色和PCR阳性转化苗。酶活性分析表明，转基因黄瓜降解蝇毒磷能力是对照（非转基因株）的4．7～9．7倍，最高达到7．8μmol／（mg·min），有助于加快降解黄瓜中的有机磷农药残留，为食品安全研究提供借鉴。 展开更多

关键词 生物修复 遗传转化 有机磷水解酶(OPH) 农药残留

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转基因表达OPH提高番茄果实降解有机磷农药能力的研究 被引量：2

6

作者 赵杰宏 赵德刚 韩洁 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期213-216,225,共5页

拟通过基因工程提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。构建了E8启动子基因驱动有机磷降解基因(OPD)的植物表达载体pSE8OP,经农杆菌介导遗传转化番茄子叶后,进行GUS染色、PCR和Southern blotting分析。证明OPD基因已整合进转基因植株... 拟通过基因工程提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。构建了E8启动子基因驱动有机磷降解基因(OPD)的植物表达载体pSE8OP,经农杆菌介导遗传转化番茄子叶后,进行GUS染色、PCR和Southern blotting分析。证明OPD基因已整合进转基因植株基因组中,为1个拷贝。HPLC比较分析发现,转基因番茄果实能显著提高降解毒死蜱和对硫磷的能力,大大减少了番茄中的农药残留。 展开更多

关键词 遗传转化 有机磷水解酶(OPH)农药残留 毒死蜱 对硫磷

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一株产高三尖杉酯碱内生真菌gyzy-6的分离与鉴定 被引量：3

7

作者 韩洁 赵杰宏 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期112-114,共3页

高三尖杉酯碱(HHT)是重要的抗白血病药物,主要从珍稀濒危三尖杉属植物中提取。从贵州篦子三尖杉中分离培养出20株菌落形态和显微结构有明显差异的菌株,经HPLC分析各菌株的发酵提取物,初步证明菌株gyzy-6能够生产高三尖杉酯碱。gyzy-6菌... 高三尖杉酯碱(HHT)是重要的抗白血病药物,主要从珍稀濒危三尖杉属植物中提取。从贵州篦子三尖杉中分离培养出20株菌落形态和显微结构有明显差异的菌株,经HPLC分析各菌株的发酵提取物,初步证明菌株gyzy-6能够生产高三尖杉酯碱。gyzy-6菌株ITS序列的系统发育分析结果表明gyzy-6为裂褶菌属真菌。 展开更多

关键词 篦子三尖杉 内生真菌 高三尖杉酯碱 高效液相色谱

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篦子三尖杉产高三尖杉酯碱内生真菌的分离和筛选 被引量：3

8

作者 韩洁 赵杰宏 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期112-115,共4页

为了从珍稀濒危药用植物篦子三尖杉中分离、筛选产高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)的内生真菌,通过分离培养,获得20株培养性状不同的菌株,皆未发现产孢结构。PDA液体发酵后提取和浓缩各菌株的总生物碱成分,HPLC分析发现,菌株12号... 为了从珍稀濒危药用植物篦子三尖杉中分离、筛选产高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)的内生真菌,通过分离培养,获得20株培养性状不同的菌株,皆未发现产孢结构。PDA液体发酵后提取和浓缩各菌株的总生物碱成分,HPLC分析发现,菌株12号和20号在HHT保留时间(2.532 min)上有显著吸收峰,保留时间分别为2.493和2.563 min。初步表明,该菌株具有HHT生产能力,可为深入研究微生物源药用活性成分HHT提供可能。 展开更多

关键词 篦子三尖杉 内生真菌 高三尖杉酯碱 液相色谱

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篦子三尖杉内生真菌gyzy-9的鉴定及其抑菌活性研究 被引量：4

9

作者 韩洁 赵杰宏 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第12期2449-2452,共4页

为研究濒危药用植物篦子三尖杉(Cephalotaxus oliveri Mast)内生真菌gyzy-9的发酵产物及其抑菌活性,对其发酵产物进行了HPLC分析,并对其抑菌活性进行了纸片法检测,同时还对菌株gyzy-9的ITS序列进行了聚类分析。HPLC分析结果表明,菌株gyz... 为研究濒危药用植物篦子三尖杉(Cephalotaxus oliveri Mast)内生真菌gyzy-9的发酵产物及其抑菌活性,对其发酵产物进行了HPLC分析,并对其抑菌活性进行了纸片法检测,同时还对菌株gyzy-9的ITS序列进行了聚类分析。HPLC分析结果表明,菌株gyzy-9能够产生高三尖杉酯碱(Homoharringtonine),其发酵液对表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、提取物对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的抑菌效果较强,抑菌圈直径均大于15 mm。对gyzy-9菌株ITS序列的系统发育聚类分析结果表明,gyzy-9为平革菌属(Phanerochaete sp.)真菌。对此菌株的研究为进一步研发生产三尖杉药用活性成分提供了条件。 展开更多

关键词 篦子三尖杉 内生真菌 高三尖杉酯碱 高效液相色谱

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番茄果实特异性表达有机磷水解酶的农药降解活性分析 被引量：1

10

作者 赵杰宏 赵德刚 韩洁 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2010年第5期77-80,共4页

为研究番茄果实中表达有机磷水解酶(OPH)降解有机磷农药的活性,经农杆菌介导,将携带表达元件E8-OPD的植物表达载体pSE8OP遗传转化番茄子叶,通过抗性筛选和分子检测,获得6株GUS染色和PCR扩增阳性的转基因番茄植株。酶活分析发现,酶促反... 为研究番茄果实中表达有机磷水解酶(OPH)降解有机磷农药的活性,经农杆菌介导,将携带表达元件E8-OPD的植物表达载体pSE8OP遗传转化番茄子叶,通过抗性筛选和分子检测,获得6株GUS染色和PCR扩增阳性的转基因番茄植株。酶活分析发现,酶促反应最适温度为30℃,稳定性较高。酶的最适保存pH值为9,最适试验pH值为8.0。与1 mmol/L Zn2+条件下酶活相比,Co2+提高了酶活2.1倍,Ca2+、Cu2+、Fe2+、Mg2+、Mn2+、EDTA、SDS、TritonX-100、β-ME和DTT都不同程度地抑制了酶活。检测重组表达OPH降解蝇毒磷、毒死蜱和对硫磷的酶活。表明,降解蝇毒磷的Km最低,为4.04μmol/L。重组表达OPH有助于提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。 展开更多

关键词 遗传转化 有机磷水解酶(OPH) 农药残留 有机磷农药降解基因(OPD)

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内生真菌gyzy-20生产高三尖杉酯碱的成分分析及条件优化 被引量：1

11

作者 韩洁 赵杰宏 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第34期19291-19293,共3页

[目的]为充分发掘篦子三尖杉(Cephalotaxus oliveriMast)内生真菌的应用价值。[方法]采用HPLC对内生真菌菌株gyzy-20的发酵提取组分进行鉴定,并采用正交试验进一步优化生产工艺。[结果]菌株gyzy-20的代谢产物中有高三尖杉酯碱生成,提取... [目的]为充分发掘篦子三尖杉(Cephalotaxus oliveriMast)内生真菌的应用价值。[方法]采用HPLC对内生真菌菌株gyzy-20的发酵提取组分进行鉴定,并采用正交试验进一步优化生产工艺。[结果]菌株gyzy-20的代谢产物中有高三尖杉酯碱生成,提取时间对高三尖杉酯碱含量的影响较大。优化的生产工艺为:碳源为葡萄糖,发酵10 d后超声5 min,添加2倍体积二氯甲烷萃取3 h,优化后的发酵和提取方法可提高高三尖杉酯碱的含量1.5倍以上,达到0.26μg/ml。[结论]该研究可为利用微生物发酵生产HHT提供可能。 展开更多

关键词 内生真菌 高三尖杉酯碱 液相色谱 发酵条件 优化

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