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烟草内生细菌多样性研究 被引量:5
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作者 王茂胜 汪汉成 +4 位作者 马莹 郭亚利 胡向丹 黄鸿 蒋选利 《广东农业科学》 CAS 2015年第23期59-64,共6页
为了揭示烟草内生细菌多样性,选择K326、云85和红花大金元3个烤烟品种进行内生细菌的分离和16S r DNA序列分析鉴定,获得不同品种烟草内生细菌的多样性特征。结果显示,27株内生细菌分别属于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(33%)、蕈状芽... 为了揭示烟草内生细菌多样性,选择K326、云85和红花大金元3个烤烟品种进行内生细菌的分离和16S r DNA序列分析鉴定,获得不同品种烟草内生细菌的多样性特征。结果显示,27株内生细菌分别属于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(33%)、蕈状芽孢杆菌Bacillus mycoides(4%)、芽孢杆菌属Bacillus sp.(11%)、肠杆菌属Enterobacter sp.(4%)、寡养单胞菌Stenotrophomonas sp.(4%)、热带根瘤菌Rhizobium tropici(4%)、假单胞菌属Pseudomonas sp.(4%)、土地芽孢杆菌属Terribacillus sp.(4%),芽孢杆菌属Bacillus sp.为优势细菌类群。3个品种的Shannon index(H′)以K326最高、为2.02,其次是云85、为1.48,红花大金元最低、为1.3。 展开更多
关键词 烟草 内生细菌 多样性 16S RDNA
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普通烟草八氢番茄红素脱氢酶基因的原核表达及表达谱分析 被引量:5
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作者 钟晓武 付强 +4 位作者 邹颉 林世峰 郭玉双 赵杰宏 任学良 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期838-843,共6页
基于NCBI数据库中本氏烟(Nicotiana benthamiana)的烟草八氢番茄红素脱氢酶PDS基因(ABE99707)的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以烟草栽培品种红花大金元叶片总RNA为模板,通过PCR方法获得了烟草NtPDS基因的cDNA片段。序列分析表明,... 基于NCBI数据库中本氏烟(Nicotiana benthamiana)的烟草八氢番茄红素脱氢酶PDS基因(ABE99707)的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以烟草栽培品种红花大金元叶片总RNA为模板,通过PCR方法获得了烟草NtPDS基因的cDNA片段。序列分析表明,该基因编码区为1749 bp,编码582个氨基酸,推测该蛋白等电点为7.53,理论分子量为65.04 kD。通过构建融合表达载体pET-32a-NtPDS,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在37℃下经1 mmol/L IPTG诱导4 h表达后,产生了以可溶性蛋白形式存在的NtPDS融合蛋白,并通过Western blotting验证融合蛋白获得表达。利用半定量RT-PCR技术进行组织表达模式分析发现,该基因在烟草的叶片、花和茎中均有表达,在根中没有表达。该结果为进一步研究烟草八氢番茄红素脱氢酶NtPDS的活性和生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 烟草 八氢番茄红素脱氢酶 原核表达 表达谱
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不同烟草赤星病抗性烤烟品种成熟期叶片氮代谢的差异 被引量:3
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作者 杨志晓 郭玉双 +5 位作者 刘红峰 杨冬梅 赵二卫 王志红 史跃伟 王轶 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第5期459-465,共7页
以抗赤星病的净叶黄和感赤星病的NC89、长脖黄的不同烤烟品种为材料,采用盆栽试验分析成熟期不同抗性烤烟品种叶片的氮转运差异.结果表明:随着叶片的成熟,3个品种质外体NH+4的浓度均逐步增大,长脖黄、NC89质外体NH+4的浓度显著大于净叶... 以抗赤星病的净叶黄和感赤星病的NC89、长脖黄的不同烤烟品种为材料,采用盆栽试验分析成熟期不同抗性烤烟品种叶片的氮转运差异.结果表明:随着叶片的成熟,3个品种质外体NH+4的浓度均逐步增大,长脖黄、NC89质外体NH+4的浓度显著大于净叶黄;3个品种的谷氨酰胺合成酶(GS)活性均急剧下降,净叶黄的GS活性极显著大于NC89和长脖黄;3个品种的总氮含量和叶片组织NH+4浓度明显下降,长脖黄、NC89具有较高的氨气补偿点,极显著高于净叶黄.可见:不同赤星病抗性烤烟品种成熟期叶片的氮运转能力具有明显差异,抗病品种叶片的氮素再利用能力大于感病品种;感病品种以叶片质外体氨挥发形式损失的氮素多于抗病品种. 展开更多
关键词 烤烟 质外体 氮运转 烟草赤星病
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烟草植物螯合肽合成酶PCS1基因的电子克隆和序列分析 被引量:1
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作者 付强 钟晓武 +5 位作者 邹颉 林世锋 郭玉双 赵杰宏 王轶 任学良 《江苏农业科学》 北大核心 2014年第6期34-37,共4页
为了研究烟草中重金属镉的代谢转运基因,以马铃薯的植物螯合肽合成酶phytochelatin synthases 1(PCS1)基因的全长cDNA序列(GenBank登录号:AJ548472.1)为信息探针,通过电子克隆的方法从烟草栽培品种中克隆到1个植物螯合肽合成酶基因(NtPC... 为了研究烟草中重金属镉的代谢转运基因,以马铃薯的植物螯合肽合成酶phytochelatin synthases 1(PCS1)基因的全长cDNA序列(GenBank登录号:AJ548472.1)为信息探针,通过电子克隆的方法从烟草栽培品种中克隆到1个植物螯合肽合成酶基因(NtPCS1),并对其进行了序列分析。序列分析结果:NtPCS1包含完整的开放读码框,编码531个氨基酸,含有2个保守域Phytochelatin_C和Phytochelatin;通过同源比对和进化分析发现,NtPCS1氨基酸序列与番茄PCS1的序列一致性达到85%,与已报道的树烟草NgPCS相比,在N端多出30个氨基酸。以上结果表明NtPCS1是栽培烟草中新发现的金属镉代谢转运基因。 展开更多
关键词 栽培烟草 植物螯合肽合成酶 镉转运
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烟草蛋白酶体α2型亚单位的克隆和序列分析
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作者 付强 邹颉 +2 位作者 余婧 赵杰宏 任学良 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第9期39-41,共3页
为研究烟草识别病毒并将其降解为蛋白酶体基因,以拟南芥的蛋白酶体α2型亚单位基因全长c DNA序列(Gen Bank登录号:AF043520.1)为信息探针,用电子克隆的方法从烟草栽培品种中克隆到1个蛋白酶体基因Nt PAB1,并对其进行序列分析。结果表明,... 为研究烟草识别病毒并将其降解为蛋白酶体基因,以拟南芥的蛋白酶体α2型亚单位基因全长c DNA序列(Gen Bank登录号:AF043520.1)为信息探针,用电子克隆的方法从烟草栽培品种中克隆到1个蛋白酶体基因Nt PAB1,并对其进行序列分析。结果表明,Nt PAB1包含完整的开放读码框,编码219个氨基酸,含有1个保守域proteasome_alpha_type_2;通过同源比对和进化分析发现,Nt PAB1氨基酸序列与葡萄PAB1的序列一致性达到98%。以上结果表明,Nt PAB1是栽培烟草中未报道的编码蛋白酶体基因。 展开更多
关键词 栽培烟草 蛋白酶体α2型亚单位 蛋白降解 克隆 序列分析
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拟松材线虫类毒液过敏原蛋白基因Bm-vap-1的克隆与分析
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作者 李莉 余婧 +7 位作者 王仁刚 杨春元 林世锋 朱秀 叶子 李国红 陈越男 吴沙沙 《福建农林大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第5期599-608,共10页
【目的】克隆拟松材线虫类毒液过敏原蛋白(VAP)基因Bm-vap-1,并进行表达特性分析,为深入研究Bm-vap-1基因在拟松材线虫与寄主互作过程中的作用提供参考。【方法】以拟松材线虫体前端特异cDNA文库构建和测序获得的VAP基因片段为基础,通过... 【目的】克隆拟松材线虫类毒液过敏原蛋白(VAP)基因Bm-vap-1,并进行表达特性分析,为深入研究Bm-vap-1基因在拟松材线虫与寄主互作过程中的作用提供参考。【方法】以拟松材线虫体前端特异cDNA文库构建和测序获得的VAP基因片段为基础,通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到该基因的全长cDNA序列,将其命名为Bm-vap-1。利用生物信息学软件预测Bm-VAP-1蛋白的理化性质、信号肽和跨膜区,并通过生物数据库对其同源性和保守结构域进行分析。然后利用实时荧光定量PCR检测该基因在拟松材线虫不同虫态中的表达水平,并利用原位杂交技术进行转录组表达定位。【结果】Bm-vap-1基因开放阅读框序列长度为621 bp,编码206个氨基酸,GenBank登录号为GU451046。编码蛋白质的分子质量为22.49 ku,理论等电点为4.61,与松材线虫、豆伞滑刃线虫和冲绳伞滑刃线虫VAP同源蛋白的序列一致性较高,含有1个典型且保守的CAP结构域,存在信号肽,无跨膜结构域,属于分泌型蛋白。实时荧光定量PCR结果显示,Bm-vap-1基因在拟松材线虫各个虫态中均有表达,但在成虫中的表达量较高。原位杂交结果表明,Bm-vap-1基因在拟松材线虫的食道腺特异表达。【结论】成功克隆了拟松材线虫Bm-vap-1基因,初步推测其编码蛋白在线虫食道腺合成,且在线虫寄生过程中分泌到体外发挥作用。 展开更多
关键词 拟松材线虫 类毒液过敏原蛋白 生物信息学 表达水平 原位杂交
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豆伞滑刃线虫类转甲状腺素基因(Bd-TTL-1)的克隆与表达定位分析 被引量:1
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作者 林世锋 王仁刚 +4 位作者 杨志晓 王自力 李莉 朱秀 陈越男 《南方农业学报》 北大核心 2025年第3期816-826,共11页
[目的]克隆豆伞滑刃线虫(Bursaphelenchus doui)类转甲状腺素(Transthyretin-like,TTL)基因Bd-TTL-1并进行表达特性分析,为进一步研究该基因的生物学功能打下基础。[方法]以植物寄生线虫豆伞滑刃线虫为试验材料,以其体前端cDNA为试验方... [目的]克隆豆伞滑刃线虫(Bursaphelenchus doui)类转甲状腺素(Transthyretin-like,TTL)基因Bd-TTL-1并进行表达特性分析,为进一步研究该基因的生物学功能打下基础。[方法]以植物寄生线虫豆伞滑刃线虫为试验材料,以其体前端cDNA为试验方,体后端cDNA为驱动方,利用固相消减杂交方法构建豆伞滑刃线虫体前端特异cDNA文库。利用反向Northern杂交和测序筛选文库,结合RACE技术获得Bd-TTL-1基因全长序列,并利用生物信息学软件及数据库对Bd-TTL-1蛋白的理化性质、信号肽、跨膜区、同源性和保守结构域进行预测分析。利用实时荧光定量PCR和原位杂交分别进行基因发育模式和表达定位分析。[结果]成功构建1个豆伞滑刃线虫体前端特异cDNA文库。通过反向Northern杂交、测序与RACE技术相结合的方法克隆获得豆伞滑刃线虫TTL全长基因Bd-TTL-1,GenBank登录号PQ276066。Bd-TTL-1基因DNA编码区全长497 bp,包括2个外显子和1个内含子;cDNA编码区全长435 bp,编码144个氨基酸。预测Bd-TTL-1蛋白的相对分子量为15.86 kD,理论等电点为9.37;Bd-TTL-1蛋白含有1个典型且保守的TTL蛋白结构域,存在信号肽但无跨膜结构域,属于分泌性蛋白。实时荧光定量PCR结果显示,Bd-TTL-1基因在豆伞滑刃线虫各发育阶段均有表达,但在虫卵期表达微弱,显著低于其他发育阶段(P<0.05)。原位杂交结果显示,Bd-TTL-1基因在豆伞滑刃线虫的食道腺特异表达。[结论]豆伞滑刃线虫Bd-TTL-1蛋白的氨基酸序列含有1个TTL蛋白保守结构域,是一种具有信号肽但无跨膜结构域的分泌性蛋白;Bd-TTL-1基因在豆伞滑刃线虫食道腺中特异表达,初步推测编码蛋白在寄生过程中通过口针释放到体外发挥作用。 展开更多
关键词 豆伞滑刃线虫 类转甲状腺素 生物信息学 表达分析 原位杂交
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豆伞滑刃线虫类毒液过敏原蛋白基因Bd-VAP-1的克隆及原位杂交分析
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作者 林世锋 王仁刚 +4 位作者 林英超 王自力 李莉 李国红 吴沙沙 《福建农业学报》 北大核心 2025年第6期602-609,共8页
【目的】克隆豆伞滑刃线虫(Bursaphelenchus doui)类毒液过敏原蛋白(venom allergen-like protein,VAP)基因Bd-VAP-1,并进行表达特性分析,为深入研究Bd-VAP-1基因在豆伞滑刃线虫与寄主互作过程中的作用提供参考。【方法】以包括食道腺... 【目的】克隆豆伞滑刃线虫(Bursaphelenchus doui)类毒液过敏原蛋白(venom allergen-like protein,VAP)基因Bd-VAP-1,并进行表达特性分析,为深入研究Bd-VAP-1基因在豆伞滑刃线虫与寄主互作过程中的作用提供参考。【方法】以包括食道腺、分泌孔和头感器在内的豆伞滑刃线虫体前端材料作为测验组,以包括肠道在内的豆伞滑刃线虫体后端材料作为驱动组,选择固相消减杂交策略构建豆伞滑刃线虫体前端特异表达cDNA文库。通过反向Northern杂交鉴定和测序获得差异表达基因序列,结合c DNA末端快速克隆(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得目的基因全长序列,并利用生物信息学方法进行序列特征分析;最后利用原位杂交技术进行基因表达定位。【结果】成功构建1个豆伞滑刃线虫体前端特异表达cDNA文库,并利用反向Northern印迹杂交、测序和RACE等技术,从豆伞滑刃线虫中分离鉴定出1个类毒液过敏原蛋白(VAP)基因,命名为Bd-VAP-1,GenBank登录号为GU451047。Bd-VAP-1基因开放阅读框全长为644 bp,包括2个外显子和1个内含子;编码区全长为609bp,编码202个氨基酸。预测蛋白质的相对分子量为22.32 kDa,理论等电点为4.86,与松材线虫和拟松材线虫VAP同源蛋白的序列一致性较高,含有1个典型且保守的CAP结构域,存在信号肽但无跨膜结构域,属于分泌型蛋白。原位杂交结果表明,Bd-VAP-1基因在豆伞滑刃线虫体前端的食道腺特异表达。【结论】成功克隆了豆伞滑刃线虫Bd-VAP-1基因,初步推测其编码蛋白在线虫食道腺合成,并在线虫与宿主互作过程中分泌到体外发挥作用。 展开更多
关键词 豆伞滑刃线虫 特异cDNA文库 类毒液过敏原蛋白 生物信息学 原位杂交
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酚酸对烟苗根系生长及叶片光合特性的影响 被引量:6
9
作者 王茂胜 李明 +3 位作者 杨秀祥 汪汉成 邱忠智 蒋选利 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期14-18,共5页
为了解酚酸类他感物质对烟苗生长发育的影响,研究了苯甲酸、对羟基苯甲酸和水杨酸对烟苗根系发育、气体交换特征、叶绿素荧光参数及叶绿素含量的影响。结果表明,3种酚酸随着浓度的增加,烟苗叶片叶绿素含量(SPAD值)均呈先增加后降低趋势;... 为了解酚酸类他感物质对烟苗生长发育的影响,研究了苯甲酸、对羟基苯甲酸和水杨酸对烟苗根系发育、气体交换特征、叶绿素荧光参数及叶绿素含量的影响。结果表明,3种酚酸随着浓度的增加,烟苗叶片叶绿素含量(SPAD值)均呈先增加后降低趋势;3种酚酸能够显著抑制烟苗根系发育,随着浓度增加,根尖数、总根长和总根表面积呈先升后降或直接降低的趋势;3种酚酸能够降低净光合速率(Pn),苯甲酸差异不显著;3种酚酸对叶绿素荧光参数均有影响,随着浓度的增加,Fv/Fm有降低趋势,但差异不显著,qp和ФPSII呈显著下降趋势,NPQ呈显著升高趋势。本试验证明了3种酚酸对烟苗根系发育、光合作用有抑制作用。 展开更多
关键词 烤烟 根系提取物 自毒作用 化感作用 酚酸
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