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牛源多杀性巴氏杆菌与支原体双重PCR 检测方法的建立
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作者 冯明祥 姜玲玲 +3 位作者 周景瑞 冉江 余波 李蓉蓉 《上海畜牧兽医通讯》 2024年第2期17-23,共7页
为建立一种快速、准确、简便的多杀性巴氏杆菌与牛支原体双重PCR检测方法,参照GenBank中多杀性巴氏杆菌kmt1基因序列和牛支原体oppD/F基因序列设计2对引物,以2种病原的单重PCR的扩增体系和条件为基础,对双重PCR的退火温度、引物用量、... 为建立一种快速、准确、简便的多杀性巴氏杆菌与牛支原体双重PCR检测方法,参照GenBank中多杀性巴氏杆菌kmt1基因序列和牛支原体oppD/F基因序列设计2对引物,以2种病原的单重PCR的扩增体系和条件为基础,对双重PCR的退火温度、引物用量、模板用量进行优化,分析所建立的双重PCR方法的特异性、敏感性和重复性,并将其应用于屠宰场273份疑似多杀性巴氏杆菌、牛支原体感染牛的肺脏组织样品验证。结果表明:所建立的双重PCR检测方法对多杀性巴氏杆菌和牛支原体具有特异性;双重PCR体系混合质粒的最低检测质量浓度为1.25×10-6 ng/μL,敏感性高;间隔2周的2次检测结果一致,重复性好;273份屠宰场样品的双重PCR检测结果与单重PCR检测结果符合率为100%。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 牛支原体 双重PCR 检测
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牛支原体病PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:5
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作者 吴位珩 徐景峨 +9 位作者 余波 张涛 余国富 杨莉 冯明祥 孙启跃 刘镜 黄波 杨茂生 姜玲玲 《贵州农业科学》 CAS 2019年第5期66-69,共4页
为快速确诊肉牛牛支原体病,根据牛支原体 OPPD/F 基因序列设计1对引物,通过反应条件的优化,建立牛支原体PCR诊断方法。结果表明:该方法可从牛肺、鼻拭子临床样本和其临床样本的培养物中直接检测到牛支原体病病原核酸,该方法可检测的病... 为快速确诊肉牛牛支原体病,根据牛支原体 OPPD/F 基因序列设计1对引物,通过反应条件的优化,建立牛支原体PCR诊断方法。结果表明:该方法可从牛肺、鼻拭子临床样本和其临床样本的培养物中直接检测到牛支原体病病原核酸,该方法可检测的病原核酸最小浓度约为1×10^-7 μg,整个检测过程仅需3.5 h。该方法具有快速、灵敏性高、特异性强等特点,对牛支原体感染的诊断、防治与预后评估具有重要意义。 展开更多
关键词 牛支原体 OPPD/F 基因 PCR
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肉牛支原体病原分离鉴定及药物敏感性试验 被引量:5
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作者 杨莉 姜玲玲 +9 位作者 张涛 吴位珩 徐景峨 余波 刘镜 杨茂生 孙启跃 冯明祥 刘和 邹茂华 《中国牛业科学》 2020年第4期1-6,共6页
[目的]为调查贵州省肉牛运输综合征主要病因牛支原体,研究无菌采集疑似牛支原体鼻拭子和病死牛肺,进行牛支原体液体培养和固体培养,[方法]采用形态学观察和生化试验鉴定该分离株,进行了组织病理切片观察,用特异性检测牛支原体的PCR方法... [目的]为调查贵州省肉牛运输综合征主要病因牛支原体,研究无菌采集疑似牛支原体鼻拭子和病死牛肺,进行牛支原体液体培养和固体培养,[方法]采用形态学观察和生化试验鉴定该分离株,进行了组织病理切片观察,用特异性检测牛支原体的PCR方法进行检测,并对阳性样本进行药敏试验。[结果]结果显示,从采集到的163份疑似样本中,检测出60份牛支原体阳性样本,且成功分离到18株牛支原体,PCR检测和同源性结果表明扩增片段为牛支原体的特异性条带,同源性的比对结果为93.02%~100%。分离株菌落呈典型的“煎蛋样”。组织切片结果可见患病牛肺间质动脉血管充血、肺间质水肿变宽,呈灰白色;肺间质纤维增生,有实质性病变;肺泡上皮细胞变性坏死;肺泡内有大量粘液。因并发或继发其他病原菌感染,其他器官组织也发生了病理变化。分离株牛支原体既不分解葡萄糖、甘露醇、尿素酶、明胶,也不水解精氨酸,酚红葡萄糖肉汤呈阳性反应,七叶苷生化反应为阳性。药敏试验表明:氟苯尼考、诺氟沙星、新霉素、头孢派酮、氧氟沙星高度敏感。[结论]研究结果证实了引起贵州省肉牛运输综合征主要病因是牛支原体,这为贵州省牛支原体病的防治提供了科学依据。 展开更多
关键词 牛支原体 分离 鉴定 药敏试验
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山羊痘病毒P32基因真核表达质粒的构建及其诱导体液免疫应答效果
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作者 龙福 文明 +1 位作者 陈光燕 王华平 《贵州畜牧兽医》 2015年第5期4-8,共5页
为探索山羊对山羊痘病毒P32基因免疫的应答效果,本研究从p MD-18T-P32中获取P32基因,插入真核表达质粒PVAX1,经PCR和酶切鉴定后,将PVAX1-P32肌肉注射小鼠,于不同时间段采集小鼠组织样本,检测分析重组质粒的分布动态和重组情况,并免疫注... 为探索山羊对山羊痘病毒P32基因免疫的应答效果,本研究从p MD-18T-P32中获取P32基因,插入真核表达质粒PVAX1,经PCR和酶切鉴定后,将PVAX1-P32肌肉注射小鼠,于不同时间段采集小鼠组织样本,检测分析重组质粒的分布动态和重组情况,并免疫注射山羊,于不同时间段采集山羊血清样本,检测分析重组质粒诱导山羊的体液免疫应答效果。结果显示:经PCR扩增与双酶切,PVAX1-P32均可得到与预期大小相一致的目的片段(969 bp);注射小鼠后7~45 d,在小鼠腿肌、心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、十二指肠中均可检测到目的基因,且未发现P32基因与宿主基因组整合现象;注射山羊15 d后,诱导山羊产生较高水平的总Ig G,低于弱毒疫苗组,但差异不显著(P〉0.05);也能诱导山羊产生较高的抗P32-Ig G含量,高于弱毒疫苗组,差异显著(P〈0.05)。结果表明:本研究成功构建了山羊痘病毒P32基因的重组真核表达质粒PVAX1-P32,能较长时间存在宿主组织器官内,可诱导山羊产生较好的体液免疫应答。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 P32基因 真核表达质粒 构建 体液免疫应答
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鹅的饲养管理与疫病防控技术
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作者 冯明祥 李干洲 《中国畜禽种业》 2015年第10期138-139,共2页
近年来,随着人们日益增长的物质文化生活水平的提高,越来越多的人喜欢食用鹅肉和鹅副产品,使得鹅的价格居高不下,在一般情况下,市场价格高达40元/kg。鹅绒毛保暖性强,在国内市场一直是抢手货,国际市场每吨达4.5万美元。鹅肥肝营... 近年来,随着人们日益增长的物质文化生活水平的提高,越来越多的人喜欢食用鹅肉和鹅副产品,使得鹅的价格居高不下,在一般情况下,市场价格高达40元/kg。鹅绒毛保暖性强,在国内市场一直是抢手货,国际市场每吨达4.5万美元。鹅肥肝营养价格很高,在欧美发达国家极为畅销,市场缺口大、出口前景好,所以养鹅市场前景十分看好。 展开更多
关键词 鹅肉 防控技术 饲养管理 市场价格 疫病 欧美发达国家 物质文化 国内市场
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牛的引种隔离技术 被引量:1
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作者 李平 刘苹 《当代畜禽养殖业》 2020年第4期48-49,共2页
为了贯彻实施大扶贫战略和推动产业发展,贵州省关岭自治县县委、县政府于2016年2月出台了"关岭牛"三年振兴计划,决定把"关岭牛"养殖发展打造成全县助农脱贫致富的主导产业,使养牛业成为农户脱贫的经济支柱产业。本... 为了贯彻实施大扶贫战略和推动产业发展,贵州省关岭自治县县委、县政府于2016年2月出台了"关岭牛"三年振兴计划,决定把"关岭牛"养殖发展打造成全县助农脱贫致富的主导产业,使养牛业成为农户脱贫的经济支柱产业。本文重点探讨和分析了牛引种隔离技术及其在具体操作过程中的注意事项,希望能够为我国养牛业的可持续发展提供帮助。 展开更多
关键词 引种 隔离 技术
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鸭瘟和鸭病毒性肝炎鉴别诊断
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作者 冯明祥 《中国畜禽种业》 2016年第9期156-157,共2页
鸭瘟和鸭病毒性肝炎一直是困扰养殖户的重大问题,发病死亡率高,给养殖鸭业带来很大的威胁,通过鉴别作出合理防治,降低损失,增加养殖效益。
关键词 鸭瘟 鸭病毒性肝炎 鉴别诊断
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