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过表达miR-34a脂肪干细胞外泌体调控增生性瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的研究 被引量:11
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作者 肖向阳 郑德义 +1 位作者 王宝云 李自力 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第6期887-893,共7页
目的探讨脂肪干细胞(ADSCs)过表达miR-34a后释放的外泌体对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)增殖及凋亡的影响。方法从人脂肪组织中分离原代ADSCs,流式细胞术鉴定其表面标记分子,茜素红和碱性磷酸酶染色观察其成骨分化能力;采用miR-34a过表... 目的探讨脂肪干细胞(ADSCs)过表达miR-34a后释放的外泌体对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)增殖及凋亡的影响。方法从人脂肪组织中分离原代ADSCs,流式细胞术鉴定其表面标记分子,茜素红和碱性磷酸酶染色观察其成骨分化能力;采用miR-34a过表达慢病毒感染ADSCs,获得miR-34a过表达的ADSCs(ADSCs/miR-34a)和阴性对照的ADSCs(ADSCs/miR-NC),然后提取各组细胞上清液中的外泌体,获得ADSCs外泌体(ExoADSCs)、miR-34a过表达的ADSCs外泌体(ExoADSCs/miR-34a)和阴性对照的ADSCs外泌体(ExoADSCs/miR-NC),利用透射电镜观察外泌体形态,Western blot检测外泌体表面标志蛋白CD81和CD63;再将得到的外泌体分别与HSF共培养,分为对照组(HSF+PBS)、ExoADSCs处理组(HSF+ExoADSCs)、ExoADSCs/miR-NC处理组(HSF+ExoADSCs/miR-NC)和ExoADSCs/miR-34a处理组(HSF+ExoADSCs/miR-34a)。采用qRT-PCR法检测各组ADSCs及外泌体中miR-34a的表达水平;MTT法检测各组HSF细胞的增殖能力;流式细胞术检测各组HSF细胞的凋亡水平。Western blot法检测各组HSF细胞凋亡相关蛋白(cleaved-Caspase-3、Bax和Bcl-2)、纤维化相关蛋白(COLⅠ、COLⅢ)及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白(TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3)的表达水平。结果成功分离得到ADSCs,并具有成骨分化能力;透射电镜可见直径在50~100 nm呈双层膜结构的圆形或椭圆形囊泡状小体,Western blot显示外泌体标志性蛋白CD81和CD63阳性表达;miR-34a过表达可增加ADSCs及其外泌体中miR-34a表达水平;与ExoADSCs处理组和ExoADSCs/miR-NC处理组比较,ExoADSCs/miR-34a干预可抑制HSF增殖(P <0. 05),提高其凋亡率(P <0. 05),并上调cleavedCaspase-3和Bax蛋白表达水平(P <0. 05),并下调Bcl-2、COLⅠ、COLⅢ、p-Smad2、p-Smad3和TGF-β1等蛋白表达水平(P <0. 05)。结论过表达miR-34a的ADSCs外泌体可能通过下调TGF-β/Smad信号通路抑制HSF细胞增殖,促进其凋亡。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 外泌体 MIR-34A 人增生性瘢痕成纤维细胞 增殖凋亡
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环磷酰胺对大鼠吸入性损伤肺组织中细胞因子的影响 被引量:1
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作者 罗志军 马士辉 +4 位作者 程代薇 王达利 王和庚 陈杏绮 伍晓云 《实用医学杂志》 CAS 2008年第16期2772-2773,共2页
目的:探讨吸入性损伤后,早期给予注射低剂量环磷酰胺(cyclophosphamide,CY)对大鼠肺组织中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素2(interleukin-2,IL-2)细胞因子水平的影响。方法:选用90只雄性Wister大鼠,随机分为3组... 目的:探讨吸入性损伤后,早期给予注射低剂量环磷酰胺(cyclophosphamide,CY)对大鼠肺组织中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素2(interleukin-2,IL-2)细胞因子水平的影响。方法:选用90只雄性Wister大鼠,随机分为3组,10只为空白组,40只为对照组,40只为处理组,将后两组大鼠制成吸入性损伤模型。其中空白组不予任何处理,处理组于伤后1h腹腔注射CY2mg/kg,对照组则注射相同剂量的等渗生理盐水。伤后分别于2、6、12、24h取大鼠肺组织制成匀浆,用酶联免疫吸附(ELISA)法测定TNF-α、IL-2的含量。结果:与空白组比较,吸入性损伤后2种细胞因子含量均明显升高(P<0.05);伤后2、6、12、24h,处理组TNF-α、IL-2均低于对照组(P<0.05)。结论:低剂量CY可降低大鼠吸入性损伤后肺组织中TNF-α、IL-2的水平,从而改善肺损伤的程度,有望成为一种治疗吸入性损伤的新手段。 展开更多
关键词 烧伤 吸入性 环磷酰胺 肿瘤坏死因子Α 白细胞介素2 肺组织
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冬虫夏草复方制剂对小鼠免疫排斥功能的影响
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作者 罗志军 程代薇 +2 位作者 连丽虹 陈杏绮 王和庚 《实用医学杂志》 CAS 2007年第15期2313-2315,共3页
目的:通过检测复方冬虫夏草制剂(复方CS)对小鼠混合淋巴细胞培养(MLC)白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素10(IL-10)表达的影响,观察复方CS对小鼠免疫排斥反应的作用。方法:用同种异体的小鼠脾淋巴细胞作MLC,培养3d后,加入复方CS,设立未加药... 目的:通过检测复方冬虫夏草制剂(复方CS)对小鼠混合淋巴细胞培养(MLC)白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素10(IL-10)表达的影响,观察复方CS对小鼠免疫排斥反应的作用。方法:用同种异体的小鼠脾淋巴细胞作MLC,培养3d后,加入复方CS,设立未加药物组和环孢素A(CsA)组为对照,6d后用流式细胞仪检测IL-2、IL-10的表达,并进行方差分析。结果:复方CS组中IL-2的表达明显低于未加药物组(P<0.01),而IL-10的表达则显著升高(P<0.01)。复方CS组IL-2的表达高于CsA组(P<0.05),而IL-10的表达则较之为低(P<0.05)。结论:复方CS有较好的免疫抑制作用,但较CsA弱。复方CS中昆明山海棠的使用量可低于单味药以减轻毒副作用。 展开更多
关键词 移植物排斥 冬虫夏草 昆明山海棠 混合淋巴细胞培养 流式细胞术
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肾缺血再灌注通过促凋亡途径加重糖尿病小鼠肾损伤 被引量:6
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作者 韩庆玲 郑德义 +3 位作者 李伟人 王志伟 杜娇 王毅 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第12期1834-1837,共4页
目的通过检测凋亡相关蛋白在糖尿病小鼠肾缺血再灌注(I/R)损伤中的表达变化,探讨肾I/R加重糖尿病肾损伤的可能机制。方法 28只健康清洁级雄性C57BL/6J小鼠,随机分为4组:正常血糖假手术组(Sham组)(n=6),糖尿病假手术组(DM+Sham组)(n=6),... 目的通过检测凋亡相关蛋白在糖尿病小鼠肾缺血再灌注(I/R)损伤中的表达变化,探讨肾I/R加重糖尿病肾损伤的可能机制。方法 28只健康清洁级雄性C57BL/6J小鼠,随机分为4组:正常血糖假手术组(Sham组)(n=6),糖尿病假手术组(DM+Sham组)(n=6),正常血糖肾缺血组(I/R组)(n=8),糖尿病肾缺血组(DM+I/R组)(n=8)。通过连续5 d腹腔注射链脲佐菌素(55 mg/kg)的方法制备1型糖尿病模型,4周后,通过开腹用无创微动脉夹夹闭双侧肾动静脉30 min,然后松开动脉夹再灌注12 h建立肾缺血再灌注损伤小鼠模型。常规生化检测血肌酐、尿素氮反应肾功能情况。Western blot方法检测肾组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达变化。结果糖尿病小鼠空腹血糖明显高于正常血糖小鼠(P <0. 05),而糖尿病小鼠空腹体重明显低于正常血糖小鼠(P <0. 05)。I/R组和DM+Sham组小鼠血清肌酐、尿素氮高于Sham组(P <0. 05),DM+I/R组小鼠血清肌酐、尿素氮高于DM+Sham组和I/R组(P <0. 05)。与Sham组比较,Bax和Caspase-3蛋白表达在I/R组和DM+Sham组小鼠肾组织中升高(P <0. 05),Bcl-2蛋白表达降低(P <0. 05);与DM+Sham和I/R组比较,DM+I/R组小鼠肾组织中Bax和Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0. 05),Bcl-2蛋白表达明显降低(P <0. 05)。结论肾缺血再灌注损伤导致糖尿病小鼠肾组织促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2降低,肾缺血再灌注通过促凋亡途径加重糖尿病肾损伤。 展开更多
关键词 凋亡 糖尿病 缺血再灌注 肾损伤
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