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高脚鸡、矮脚鸡和百宜黑鸡GH基因多态性及生物信息学分析 被引量:5
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作者 杨红 张勇 +4 位作者 田启培 韦世文 何琦 杨隆 王芳芳 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第11期38-41,共4页
以高脚鸡、矮脚鸡和百宜黑鸡为研究对象,构建品种DNA池,PCR扩增生长激素(GH)基因所有外显子和部分内含子序列,采用直接测序法对3个鸡种的GH基因进行多态性检测,利用生物信息学软件预测不同多态性位点对GH基因m RNA二级结构的影响,旨在... 以高脚鸡、矮脚鸡和百宜黑鸡为研究对象,构建品种DNA池,PCR扩增生长激素(GH)基因所有外显子和部分内含子序列,采用直接测序法对3个鸡种的GH基因进行多态性检测,利用生物信息学软件预测不同多态性位点对GH基因m RNA二级结构的影响,旨在通过对贵州胫长差异较大的高脚鸡、矮脚鸡和百宜黑鸡GH基因的多态性及其生物信息学进行分析,研究GH基因对不同鸡种胫骨发育的影响。结果表明:在高脚鸡、矮脚鸡和百宜黑鸡3个鸡种GH基因中共检测到8个SNPs位点,其中A1133G、G1166A位于第2内含子区,C2027G、C2030T位于第4外显子区,G2152A位于第4内含子区,G3347A位于第5外显子区,T3416C和C3436T位于3'非编码区。生物信息学分析显示位于外显子区的3个SNPs均为同义突变,对GH基因的m RNA二级结构有一定影响。 展开更多
关键词 DNA池 GH基因 胫骨长度 SNPS 高脚鸡 矮脚鸡 百宜黑鸡
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猪体细胞克隆技术研究进展 被引量:4
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作者 华再东 魏庆信 +2 位作者 郑新民 乔宪凤 许厚强 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第7期1309-1312,共4页
克隆不仅可以保护濒危动物,而且与干细胞工程技术结合应用于克隆性治疗,具有重大的科学意义和应用价值。体细胞克隆猪因其在人类器官移植方面具有巨大的应用潜力,已成为当今研究的热点,但是体细胞核移植技术仍存在许多问题,其中最主要... 克隆不仅可以保护濒危动物,而且与干细胞工程技术结合应用于克隆性治疗,具有重大的科学意义和应用价值。体细胞克隆猪因其在人类器官移植方面具有巨大的应用潜力,已成为当今研究的热点,但是体细胞核移植技术仍存在许多问题,其中最主要的是体细胞核移植的环节多,克隆效率低。对体细胞克隆猪的关键环节,即供核细胞、卵母细胞、显微操作、克隆胚的激活、培养及移植技术进行了简要综述。 展开更多
关键词 克隆 显微操作 激活 重构胚
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关岭牛MyoD I基因启动子真核表达载体的构建及其在小鼠C2C12细胞中的表达 被引量:2
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作者 桓聪聪 许厚强 +5 位作者 陈伟 陈祥 赵佳福 张雯 周迪 夏丹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期719-727,共9页
本研究旨在探究关岭牛4个不同长度的MyoD I启动子的启动活性,初步确定该基因核心启动子位置。采用实时荧光定量PCR技术对关岭牛不同组织中MyoD I基因的相对表达量进行检测。以关岭牛血液DNA为模板,设计5'端加磷的引物,PCR扩增获得4... 本研究旨在探究关岭牛4个不同长度的MyoD I启动子的启动活性,初步确定该基因核心启动子位置。采用实时荧光定量PCR技术对关岭牛不同组织中MyoD I基因的相对表达量进行检测。以关岭牛血液DNA为模板,设计5'端加磷的引物,PCR扩增获得4个不同长度的关岭牛MyoD I启动子,定向精确替换pEGFP-N3载体的CMV启动子区,构建重组真核表达载体pEGFP-N3-MyoD I。利用脂质体法将重组质粒瞬时转染小鼠C2C12细胞,依据小鼠C2C12细胞发光的强弱判断MyoD I启动子的启动活性。结果显示,MyoD I基因在关岭牛肌肉组织中表达量较高;目的片段成功替换pEGFP-N3载体的CMV区;重组质粒能在小鼠C2C12细胞中成功表达,细胞在激发光下发绿色荧光。本研究成功构建了重组真核表达载体pEGFP-N3-MyoD I,4个启动子均具有启动活性,其中P3启动子在小鼠C2C12细胞中表达量最高,初步推断P3启动子为该基因的核心启动子。 展开更多
关键词 MYOD I 真核表达载体 C2C12细胞 启动子 基因表达量
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猪卵母细胞体外成熟的影响因素 被引量:2
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作者 华再东 郑新民 +3 位作者 魏庆信 许厚强 刘西梅 李莉 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期280-284,共5页
通过采集屠宰场废弃猪卵巢,体外分离和培养猪卵母细胞,探讨基础培养基、激素、卵泡直径大小及卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:改良TCM199(mTCM199)较NCSU-23培养猪卵母细胞成熟率显著提高(P〈0.05);基础培... 通过采集屠宰场废弃猪卵巢,体外分离和培养猪卵母细胞,探讨基础培养基、激素、卵泡直径大小及卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:改良TCM199(mTCM199)较NCSU-23培养猪卵母细胞成熟率显著提高(P〈0.05);基础培养基中添加PMSG、hcG和pFF,卵母细胞体外成熟率(80.63%)显著高于仅添加其中一种;从卵泡直径3~6mm和大于6mm卵泡获得的卵丘卵母细胞复合体(COCs),其体外培养成熟率(83.33%和76.43%)极显著高于卵泡直径在3mm以下获得的COCs成熟率(30.94%);根据卵丘细胞层数把COCs分为A、B、C3级,其中A级和B级卵母细胞成熟率差异不显著,但都极显著高于C级卵母细胞的成熟率。 展开更多
关键词 卵母细胞 体外成熟 卵丘卵母细胞复合体
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兴义鸭MEF2A基因的SNPs筛选及其生物信息学分析 被引量:2
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作者 彭邦星 李辉 +3 位作者 张达 易恒洁 赵忠海 廉明政 《广东农业科学》 CAS 2015年第4期86-92,F0002,共8页
为了解鸭MEF2A基因的功能和结构以及其对鸭遗传效应的影响,采用混合DNA池、基因克隆、PCR产物直接测序和生物信息学相结合的方法 ,对兴义鸭的MEF2A基因进行研究。结果并未发现SNP位点,运用生物信息学方法对其蛋白质一级结构和二级结构... 为了解鸭MEF2A基因的功能和结构以及其对鸭遗传效应的影响,采用混合DNA池、基因克隆、PCR产物直接测序和生物信息学相结合的方法 ,对兴义鸭的MEF2A基因进行研究。结果并未发现SNP位点,运用生物信息学方法对其蛋白质一级结构和二级结构进行分析,发现其包含33个α螺旋、20个β折叠、44个无规则卷曲。将获得的鸭的MEF2A蛋白序列与NCBI上提交的家鼠、牛、斑马鱼、猪、鸡的MEF2A序列相比对,结果显示:鸭与鸡、鱼的亲缘关系相近,与家鼠的亲缘关系较远。 展开更多
关键词 兴义鸭 MEF2A基因 SNPS 生物信息学
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猪卵母细胞不同孤雌激活方法的研究 被引量:2
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作者 李莉 郑新民 +3 位作者 华再东 刘西梅 毕延震 肖红卫 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第21期4431-4434,共4页
通过对不同电激活参数的摸索,电激活和化学激活联合的研究,以确定适合于猪卵母细胞孤雌激活的最佳方案。结果表明,体外成熟猪卵母细胞在电场时程60μs,1次直流脉冲的条件下,电场强度1.6kV/cm时其卵裂率(88.68%)和桑葚胚率(81.13%)较其... 通过对不同电激活参数的摸索,电激活和化学激活联合的研究,以确定适合于猪卵母细胞孤雌激活的最佳方案。结果表明,体外成熟猪卵母细胞在电场时程60μs,1次直流脉冲的条件下,电场强度1.6kV/cm时其卵裂率(88.68%)和桑葚胚率(81.13%)较其他各组高。在电场强度为1.6 kV/cm,1次直流脉冲的条件下,脉冲时程20μs时,卵母细胞卵裂率仅为75.38%,桑葚胚率为64.62%;40和80μs时,卵裂率分别是84.62%和77.17%;100μs时,卵母细胞的卵裂率和桑葚胚率都明显下降。在电场强度为1.6kV/cm,电场时程为60μs的条件下,2次电脉冲激活卵母细胞的卵裂率(87.50%)、桑葚胚率(81.25%)和1次电脉冲的卵裂率(88.68%)、桑葚胚率(80.13%)之间无显著性差异(P﹥0.05),但两者均显著高于3次电脉冲的卵裂率(72.50%)和桑葚胚率(70.27%)。成熟卵母细胞经电刺激(ES)后,分别用CB(7.5μg/mL)、CHX(10μg/mL)、6-DMAP(2 mmol/L)、CB(7.5μg/mL)+CHX(10μg/mL)、CB(7.5μg/mL)+6-DMAP(2 mmol/L)各自处理4 h,ES+CB+CHX和ES+CB+6-DMAP组卵裂率显著高于其他3组,但其桑葚胚率差异不显著。结果显示,电场强度为1.6 kV/cm,电场时程60μs,1次脉冲的电刺激对体外成熟的猪卵母细胞(IVM)孤雌激活效果最好;1次或2次电脉冲就足以激活猪卵母细胞,过高脉冲对细胞反而有伤害作用;电激活和化学激活联合应用可提高猪卵母细胞的卵裂率。 展开更多
关键词 卵母细胞 体外培养 孤雌激活
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家兔UCP1第3外显子基因多态性研究
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作者 李维 谢海强 +4 位作者 刘若余 林家栋 李思 杜雪琴 肖超能 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第24期138-141,共4页
为了解兔肉质性状特征,给兔的品种选种选育提供理论依据,选择UCP1基因设计1对引物扩增其第3外显子及第2内含子部分序列,采用DNA池PCR反应,直接测序法快速检测比利时兔、新西兰兔和加利福尼亚兔3个兔品种UCP基因多态性。结果在新西兰兔... 为了解兔肉质性状特征,给兔的品种选种选育提供理论依据,选择UCP1基因设计1对引物扩增其第3外显子及第2内含子部分序列,采用DNA池PCR反应,直接测序法快速检测比利时兔、新西兰兔和加利福尼亚兔3个兔品种UCP基因多态性。结果在新西兰兔中发现1个多态性位点(T387C),多态位点对UCP1基因的RNA结构产生影响,其最小自由能由-917.51 k J/mol变为-927.12 k J/mol,而其他2个品种没有检测到该突变。 展开更多
关键词 UCP1 比利时兔 新西兰兔 加利福尼亚兔 多态性
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3个鸡种NKX2-5基因多态性与胫长的关联性分析
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作者 杨红 张勇 +3 位作者 何琦 李俊 张雄 彭松 《广东农业科学》 CAS 2016年第6期156-162,共7页
以贵州特有鸡种高脚鸡、矮脚鸡和百宜黑鸡为试验对象,利用PCR-SSCP和DNA测序等方法检测了NKX2-5基因T563C、C675T位点在3个试验鸡群中不同基因型与胫长的关联性。T563C与胫长关联分析表明,高脚鸡群体中TT基因型个体胫长显著高于CC型,百... 以贵州特有鸡种高脚鸡、矮脚鸡和百宜黑鸡为试验对象,利用PCR-SSCP和DNA测序等方法检测了NKX2-5基因T563C、C675T位点在3个试验鸡群中不同基因型与胫长的关联性。T563C与胫长关联分析表明,高脚鸡群体中TT基因型个体胫长显著高于CC型,百宜黑鸡群体中TT基因型显著高于CT型,矮脚鸡群体中不同基因型个体间胫长差异不显著;C675T突变位点在3个鸡种中只有CC和CT两种基因型,且各鸡种不同基因型个体间胫长差异不显著。 展开更多
关键词 NKX2-5基因 胫长 SSCP 多态性
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