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转杜仲几丁质酶基因EuCHIT1烟草对真菌抗性增强的研究
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作者 曹瑞 董旋 +2 位作者 刘雅心 赵懿琛 赵德刚 《种子》 北大核心 2024年第3期26-33,共8页
本研究从杜仲中分离并克隆了杜仲几丁质酶基因EuCHIT1,全长为1402 bp,包括序列长度为969 bp的开放阅读框,编码322个氨基酸。为验证EuCHIT1的抗菌能力,构建植物过表达载体pSH-35S-EuCHIT1后对烟草进行遗传转化获得转基因植株并开展了相... 本研究从杜仲中分离并克隆了杜仲几丁质酶基因EuCHIT1,全长为1402 bp,包括序列长度为969 bp的开放阅读框,编码322个氨基酸。为验证EuCHIT1的抗菌能力,构建植物过表达载体pSH-35S-EuCHIT1后对烟草进行遗传转化获得转基因植株并开展了相关实验。结果表明,转基因烟草的几丁质酶含量显著高于野生型烟草,且添加了烟草粗蛋白EuCHIT1的培养基对尖孢镰刀菌的生长有着明显的抑制作用,同时,EuCHIT1基因显著增加了烟草叶片中过氧化氢酶(CAT)的活性。此外,为转EuCHIT1基因烟草对真菌病害的抗性机理进行研究,分析了转基因植株和野生型中水杨酸途径的关键基因PR-1a,与茉莉酸途径的关键基因COI1在接种灰霉菌之后的表达量。结果表明,转基因植株的COI1与PR-1a在接种病原菌前的表达量均显著高于野生型植株。但接种病原菌后,COI1的表达受到抑制,而PR-1a基因在接种病原菌后的最大表达量是野生型烟草的33.8倍。说明EuCHIT1基因的过表达增强了烟草对真菌的抗性,提高烟草的CAT活性及植株中病程相关蛋白基因的表达,从而增强植株对灰霉菌的抑制作用,提高植株的抗真菌病害能力。 展开更多
关键词 几丁质酶 灰霉菌 尖孢镰刀菌 病程相关蛋白
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