贵州野生春兰遗传多样性的RAPD分析 被引量：15

1

作者 季祥彪 王国鼎 +3 位作者 乔光 康冀川 宋常美 文晓鹏 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期297-302,共6页

采用RAPD标记对贵州及周边分布的野生春兰遗传多样性进行分析。结果表明：筛选的48个引物共扩增了324条600～2000bp带,其中201条（62.0%）显示多态性,RAPD标记可以有效地用于春兰野生资源遗传多样性评价;原产于贵州不同居群间样品的遗... 采用RAPD标记对贵州及周边分布的野生春兰遗传多样性进行分析。结果表明：筛选的48个引物共扩增了324条600～2000bp带,其中201条（62.0%）显示多态性,RAPD标记可以有效地用于春兰野生资源遗传多样性评价;原产于贵州不同居群间样品的遗传差异性较大,多态性百分率为36.8%（荔波样品）～69.8%（黎平样品）,高于60%的样品占全部贵州样品的1/3,分布于全省5个地州市;聚类分析显示,样品的聚类具有很强的地域性,特别是贵州样品表现更为明显,来自川西的样品和黔北、黔东北的样品具有很高的同源性。 展开更多

关键词 春兰 野生资源 遗传多样性 RAPD

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贵州12种兰属植物资源形态学和RAPD标记的比较分析 被引量：8

2

作者 季祥彪 王国鼎 +2 位作者 康继川 乔光 文晓鹏 《种子》 CSCD 北大核心 2008年第2期56-60,共5页

采用35个形态学形状和272个RAPD标记,对贵州12种兰属植物的亲缘关系进行研究。结果表明,引物S 13,S 26及S139扩增的谱带多、清晰、多态性明显,它们单独及结合使用,能有效地将所有供试种类区分开来。尽管这两种标记系统进行亲缘关系分析... 采用35个形态学形状和272个RAPD标记,对贵州12种兰属植物的亲缘关系进行研究。结果表明,引物S 13,S 26及S139扩增的谱带多、清晰、多态性明显,它们单独及结合使用,能有效地将所有供试种类区分开来。尽管这两种标记系统进行亲缘关系分析时,存在一定的差异性,但仍具有很大的同一性,经相关性检测,二者呈极显著相关。形态学形状分析显示,莲瓣兰及春剑与菅草兰的亲缘关系高度同源,这一结果得到RAPD分析的有力支持。因此,莲瓣兰及春剑应为菅草兰的变种,而不应归为新种。 展开更多

关键词 兰属 亲缘关系 形态学 RAPD Mantel检测

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转基因作物标记蛋白潜在致敏性的生物信息学预测 被引量：4

3

作者 赵杰宏 韩洁 赵德刚 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 2010年第3期76-79,共4页

转基因作物表达的标记蛋白带来潜在致敏性顾虑。根据FAO/WHO决策方案,使用SDAP、Farrp和NCBI三大数据库对GUS、NptII和OPH的潜在致敏性进行评估。在线Blast或Fasta发现,OPH、GUS和NptII全序列或连续80aa的匹配性皆不存在致敏性可能。连... 转基因作物表达的标记蛋白带来潜在致敏性顾虑。根据FAO/WHO决策方案,使用SDAP、Farrp和NCBI三大数据库对GUS、NptII和OPH的潜在致敏性进行评估。在线Blast或Fasta发现,OPH、GUS和NptII全序列或连续80aa的匹配性皆不存在致敏性可能。连续6aa比对中,OPH有2个片段与大豆、小麦和橡胶树的前纤维蛋白或德国蟑螂过敏原相关蛋白存在序列一致;GUS有1个片段与埃及伊蚊唾液腺过敏原存在序列一致;NptII有1个片段与摇蚊血红蛋白过敏原存在序列一致,但匹配的6aa序列皆未在各蛋白抗原性决定部位,是假阳性结果。初步证明转基因植物表达的GUS、NptII和OPH不具有潜在的致敏性风险。 展开更多

关键词 遗传转化 标记蛋白 致敏性 生物信息学

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贵州地方猪品种雌激素受体基因内含子1多态性 被引量：3

4

作者 冉雪琴 刘金娟 王嘉福 《山地农业生物学报》 2009年第3期230-234,共5页

为了探索雌激素受体(estrogen receptor,ESR)基因与贵州地方猪品种繁殖性状之间的关系,采用SSCP和RFLP方法,以大约克、外三元杂交猪和梅山猪为对照,对贵州地方猪品种香猪、糯谷猪和柯乐猪ESRα基因进行了多态性分析,共检测到AA、AB和BB ... 为了探索雌激素受体(estrogen receptor,ESR)基因与贵州地方猪品种繁殖性状之间的关系,采用SSCP和RFLP方法,以大约克、外三元杂交猪和梅山猪为对照,对贵州地方猪品种香猪、糯谷猪和柯乐猪ESRα基因进行了多态性分析,共检测到AA、AB和BB 3种基因型,测序结果证实,B等位基因产生的原因是:121 bp扩增片段中第54和57位碱基均突变为C,获得了1个Pvu Ⅱ酶切位点,使AA基因型多出一条带;A等位基因在国外猪品种中占优势,国内猪品种以B等位基因为主,香猪的BB基因型频率最高(79.4%),糯谷猪和柯乐猪均较低(30%、29.8%)。说明贵州地方猪品种的杂合度较高,应加强选育,B等位基因可能与低繁殖率相关。 展开更多

关键词 ESR基因 多态性 SSCP RFLP 猪品种 贵州

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贵州香猪生长激素cDNA的克隆及原核表达

5

作者 李景 冉雪琴 王嘉福 《贵州畜牧兽医》 2007年第6期1-3,共3页

应用RT-PCR技术从香猪垂体mRNA中扩增出完整的生长激素(growth hormone,GH)cDNA片段,将其克隆入载体质粒pTYB11中,构建了重组质粒pTYB11-xGH,经过IPTG诱导,在大肠杆菌ER2566中获得表达,并确定了最佳表达条件。通过亲合柱层析,得到了完... 应用RT-PCR技术从香猪垂体mRNA中扩增出完整的生长激素(growth hormone,GH)cDNA片段,将其克隆入载体质粒pTYB11中,构建了重组质粒pTYB11-xGH,经过IPTG诱导,在大肠杆菌ER2566中获得表达,并确定了最佳表达条件。通过亲合柱层析,得到了完整的香猪生长激素,为香猪GH的结构、功能及其分子水平的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 生长激素 定点突变 蛋白表达

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转基因表达有机磷水解酶(OPH)提高黄瓜降解蝇毒磷能力的初步研究 被引量：3

6

作者 赵杰宏 韩洁 赵德刚 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第1期182-186,共5页

为快速提高黄瓜降解有机磷农药残留的能力，选取能广泛降解有机磷农药的有机磷水解酶（OPH）为表达蛋白，构建CaMV35S启动子驱动有机磷水解酶基因（opd）的植物表达载体pSOP，经双酶切证明重组载体含有插入位置和方向皆正确的目的片段... 为快速提高黄瓜降解有机磷农药残留的能力，选取能广泛降解有机磷农药的有机磷水解酶（OPH）为表达蛋白，构建CaMV35S启动子驱动有机磷水解酶基因（opd）的植物表达载体pSOP，经双酶切证明重组载体含有插入位置和方向皆正确的目的片段。通过农杆菌介导遗传转化黄瓜子叶节，诱导和筛选出9株抗性苗，获得3株GUS染色和PCR阳性转化苗。酶活性分析表明，转基因黄瓜降解蝇毒磷能力是对照（非转基因株）的4．7～9．7倍，最高达到7．8μmol／（mg·min），有助于加快降解黄瓜中的有机磷农药残留，为食品安全研究提供借鉴。 展开更多

关键词 生物修复 遗传转化 有机磷水解酶(OPH) 农药残留

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运用MTT比色法检测印楝素对果蝇S2细胞的毒力作用 被引量：2

7

作者 徐霖 杨明飞 +1 位作者 冉雪琴 王嘉福 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期72-75,共4页

采用MTT(四甲基偶氮唑蓝,methylthiazolyl-tetrazolium)法测定不同质量浓度印楝素(0.01,0.1,0.5,1.0,2.0 mg.L-1)作用不同时间(24,48,72,96 h)对果蝇S2细胞的抑制率.结果表明,印楝素低质量浓度处理时,对果蝇S2细胞有促进生长的作用,表... 采用MTT(四甲基偶氮唑蓝,methylthiazolyl-tetrazolium)法测定不同质量浓度印楝素(0.01,0.1,0.5,1.0,2.0 mg.L-1)作用不同时间(24,48,72,96 h)对果蝇S2细胞的抑制率.结果表明,印楝素低质量浓度处理时,对果蝇S2细胞有促进生长的作用,表现为低质量浓度促进效应;在质量浓度为0.1～2 mg.L-1处理剂量范围内,表现为明显的时间依赖性,随时间延长,抑制率增加.0.5 mg.L-1处理48 h抑制率达54%,为最佳作用条件. 展开更多

关键词 印楝素 果蝇S2细胞 细胞活性 MTT比色法

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转基因表达OPH提高番茄果实降解有机磷农药能力的研究 被引量：2

8

作者 赵杰宏 赵德刚 韩洁 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期213-216,225,共5页

拟通过基因工程提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。构建了E8启动子基因驱动有机磷降解基因(OPD)的植物表达载体pSE8OP,经农杆菌介导遗传转化番茄子叶后,进行GUS染色、PCR和Southern blotting分析。证明OPD基因已整合进转基因植株... 拟通过基因工程提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。构建了E8启动子基因驱动有机磷降解基因(OPD)的植物表达载体pSE8OP,经农杆菌介导遗传转化番茄子叶后,进行GUS染色、PCR和Southern blotting分析。证明OPD基因已整合进转基因植株基因组中,为1个拷贝。HPLC比较分析发现,转基因番茄果实能显著提高降解毒死蜱和对硫磷的能力,大大减少了番茄中的农药残留。 展开更多

关键词 遗传转化 有机磷水解酶(OPH)农药残留 毒死蜱 对硫磷

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应用促卵泡激素基因SINE标记测定大约克猪纯合度 被引量：1

9

作者 李升 赵星艳 +3 位作者 张兆强 王三铭 王嘉福 冉雪琴 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2010年第5期140-142,共3页

为了使猪种引进有便捷、准确的检测手段,采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法,检测了120头大约克种猪的纯合度。结果表明:受检母猪FSHβ基因的BB纯合基因型频率为82.5%,AB杂合基因型频率为17.5%,未检测到AA纯合基因... 为了使猪种引进有便捷、准确的检测手段,采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法,检测了120头大约克种猪的纯合度。结果表明:受检母猪FSHβ基因的BB纯合基因型频率为82.5%,AB杂合基因型频率为17.5%,未检测到AA纯合基因型,经计算B等位基因的频率明显高于A等位基因频率。表明,该批次大约克猪存在一定比例的内二元或内三元杂交猪,应加强管理,严格控制再引种的纯度。该检测方法适用于区分国内地方猪品种和欧洲猪品种的纯合度,为引种种猪的纯合度检测提供准确的鉴定手段,有良好的应用前景。 展开更多

关键词 大约克猪 FSHΒ基因 分子标记 SINE

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番茄果实特异性表达有机磷水解酶的农药降解活性分析 被引量：1

10

作者 赵杰宏 赵德刚 韩洁 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2010年第5期77-80,共4页

为研究番茄果实中表达有机磷水解酶(OPH)降解有机磷农药的活性,经农杆菌介导,将携带表达元件E8-OPD的植物表达载体pSE8OP遗传转化番茄子叶,通过抗性筛选和分子检测,获得6株GUS染色和PCR扩增阳性的转基因番茄植株。酶活分析发现,酶促反... 为研究番茄果实中表达有机磷水解酶(OPH)降解有机磷农药的活性,经农杆菌介导,将携带表达元件E8-OPD的植物表达载体pSE8OP遗传转化番茄子叶,通过抗性筛选和分子检测,获得6株GUS染色和PCR扩增阳性的转基因番茄植株。酶活分析发现,酶促反应最适温度为30℃,稳定性较高。酶的最适保存pH值为9,最适试验pH值为8.0。与1 mmol/L Zn2+条件下酶活相比,Co2+提高了酶活2.1倍,Ca2+、Cu2+、Fe2+、Mg2+、Mn2+、EDTA、SDS、TritonX-100、β-ME和DTT都不同程度地抑制了酶活。检测重组表达OPH降解蝇毒磷、毒死蜱和对硫磷的酶活。表明,降解蝇毒磷的Km最低,为4.04μmol/L。重组表达OPH有助于提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。 展开更多

关键词 遗传转化 有机磷水解酶(OPH) 农药残留 有机磷农药降解基因(OPD)

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印楝素作用分子靶标的研究 被引量：1

11

作者 徐霖 冉雪琴 王嘉福 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期83-86,116,共5页

利用果蝇(Drosophila melanogaster)S2胚胎细胞系在细胞水平研究了印楝素A(Azadirachtin A)的可能分子靶标,运用基因芯片技术检测到印楝素作用后,细胞骨架肌动蛋白(Actin cytoskeleton)以及细胞骨架肌动蛋白相关蛋白因子(Actin-related ... 利用果蝇(Drosophila melanogaster)S2胚胎细胞系在细胞水平研究了印楝素A(Azadirachtin A)的可能分子靶标,运用基因芯片技术检测到印楝素作用后,细胞骨架肌动蛋白(Actin cytoskeleton)以及细胞骨架肌动蛋白相关蛋白因子(Actin-related protein)Act57B,Act42A,Arp14D,Arp53D,Actr13E,Act5C,Act87E均表达下调,调控蛋白因子TSR,CNC均表达上调.在此基础上,运用Western蛋白检测技术检测到药物处理24 h后,处理组的β-actin表达量为对照组的93.42%;药物处理32 h后,处理组的β-actin为对照组的91.46%.研究结果从分子水平进一步验证骨架肌动蛋白极有可能是印楝素的作用靶标蛋白. 展开更多

关键词 印楝素 细胞骨架肌动蛋白 基因芯片 蛋白检测 分子靶标

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猪水肿病PCR快速检测试剂盒的研制

12

作者 李升 冉雪琴 +1 位作者 王嘉福 杨莉 《贵州畜牧兽医》 2009年第3期1-3,共3页

实验在大肠杆菌产生的志贺样毒素2型变异体(Shiga-like toxinⅡe,Stx2e)研究的基础上,设计了一对特异性引物,通过优化,建立了以PCR为基础,高效快速检测猪水肿病的PCR试剂盒。该试剂盒扩增的阳性条带为172bp的特异性DNA片段,最低检出菌... 实验在大肠杆菌产生的志贺样毒素2型变异体(Shiga-like toxinⅡe,Stx2e)研究的基础上,设计了一对特异性引物,通过优化,建立了以PCR为基础,高效快速检测猪水肿病的PCR试剂盒。该试剂盒扩增的阳性条带为172bp的特异性DNA片段,最低检出菌体量为120CFU,在-20℃至少可保存12个月,重复性良好。应用猪水肿病PCR快速检测试剂盒对22份新鲜样本进行了检测,结果显示,其中的5个样本含Stx2e阳性大肠杆菌,PCR检测结果与剖检、细菌学和生化检验结果相一致。 展开更多

关键词 猪水肿病 志贺样毒素 PCR

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山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达与细胞凋亡的相关性 被引量：2

13

作者 关会敏 冉雪琴 +1 位作者 姬志林 王嘉福 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第4期3-7,共5页

以贵州本地分离纯化的山羊痘病毒为试验材料,感染Vero细胞,通过台盼蓝、吖啶橙/溴乙锭荧光染色分析细胞的死亡及凋亡比例;经特异性PCR从山羊痘病毒基因组中分离出山羊痘病毒抗凋亡蛋白样基因,基因长531bp,含有完整的编码框,与绵羊痘病... 以贵州本地分离纯化的山羊痘病毒为试验材料,感染Vero细胞,通过台盼蓝、吖啶橙/溴乙锭荧光染色分析细胞的死亡及凋亡比例;经特异性PCR从山羊痘病毒基因组中分离出山羊痘病毒抗凋亡蛋白样基因,基因长531bp,含有完整的编码框,与绵羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的相似性为97%,因此确定为山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因。进一步研究山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因在Vero细胞中的表达,结果显示,病毒感染Vero细胞24h时没有检测到凋亡现象,山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的mRNA水平最高;感染48h时,Vero细胞的凋亡率上升到13%,山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达量随之下降。结果表明,山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达量与Vero细胞的凋亡呈负相关,有助于病毒在细胞内的生存和侵染等过程。 展开更多

关键词 山羊痘病毒 抗凋亡蛋白基因 基因表达

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