目的:探讨氧化苦参碱干预砷致肝星状细胞(HSC)活化过程中细胞自噬的变化。方法:本实验使用100 μmol/L亚砷酸钠作用于人胎肝细胞株LO2 24 h,收取培养上清。将染砷LO2细胞培养上清与正常培养液按照1 ∶ 4比例混合,用于培养人肝星状细胞株...目的:探讨氧化苦参碱干预砷致肝星状细胞(HSC)活化过程中细胞自噬的变化。方法:本实验使用100 μmol/L亚砷酸钠作用于人胎肝细胞株LO2 24 h,收取培养上清。将染砷LO2细胞培养上清与正常培养液按照1 ∶ 4比例混合,用于培养人肝星状细胞株LX-2,24 h后采用低(0.25 g/L)和高(1 g/L)剂量氧化苦参碱干预培养24 h;采用全自动生化分析仪检测染砷LO2细胞培养上清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;ELISA检测染砷LO2细胞培养上清中转化生长因子β1(TGF-β1)水平;MTT法检测LX-2细胞活力;Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、自噬相关基因12(Atg12)、自噬相关基因5(Atg5)和微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白表达水平变化;油红O染色光镜下观察LX-2细胞中脂滴。结果:(1)染砷LO2细胞培养上清AST和ALT水平显著增加( P <0.05),此上清加入LX-2细胞培养基中可明显增强LX-2细胞活力( P <0.05),与染砷LO2细胞培养上清共孵育的LX-2细胞内脂滴数量显著减少,且LX-2活化标志蛋白α-SMA表达水平显著上调( P <0.05);(2)与染砷LO2细胞培养上清共孵育可上调LX-2细胞Atg12、Atg5和LC3Ⅱ蛋白表达,较对照组差异具有显著性( P <0.05);(3)低、高剂量氧化苦参碱干预可抑制与染砷LO2细胞培养上清共孵育的LX-2细胞的活力( P <0.05),且使LX-2细胞α-SMA、Atg12、Atg5和LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著下调( P <0.05),高剂量氧化苦参碱干预的LX-2细胞自噬标志蛋白LC3-Ⅱ表达水平降低较低剂量氧化苦参碱干预更为显著( P <0.05);(4)低、高剂量氧化苦参碱干预后LX-2细胞内脂滴数量较染砷LO2细胞培养上清共孵育的LX-2细胞均显著增多。结论:砷致肝纤维化过程中间接活化HSC与砷损伤肝细胞有关,细胞自噬参与这一过程,且HSC可能通过促进其内脂滴降解而促进自身的活化。氧化苦参碱可通过抑制细胞自噬,减少HSC活化实现其减轻肝纤维化的作用。展开更多
文摘目的:探讨氧化苦参碱干预砷致肝星状细胞(HSC)活化过程中细胞自噬的变化。方法:本实验使用100 μmol/L亚砷酸钠作用于人胎肝细胞株LO2 24 h,收取培养上清。将染砷LO2细胞培养上清与正常培养液按照1 ∶ 4比例混合,用于培养人肝星状细胞株LX-2,24 h后采用低(0.25 g/L)和高(1 g/L)剂量氧化苦参碱干预培养24 h;采用全自动生化分析仪检测染砷LO2细胞培养上清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;ELISA检测染砷LO2细胞培养上清中转化生长因子β1(TGF-β1)水平;MTT法检测LX-2细胞活力;Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、自噬相关基因12(Atg12)、自噬相关基因5(Atg5)和微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白表达水平变化;油红O染色光镜下观察LX-2细胞中脂滴。结果:(1)染砷LO2细胞培养上清AST和ALT水平显著增加( P <0.05),此上清加入LX-2细胞培养基中可明显增强LX-2细胞活力( P <0.05),与染砷LO2细胞培养上清共孵育的LX-2细胞内脂滴数量显著减少,且LX-2活化标志蛋白α-SMA表达水平显著上调( P <0.05);(2)与染砷LO2细胞培养上清共孵育可上调LX-2细胞Atg12、Atg5和LC3Ⅱ蛋白表达,较对照组差异具有显著性( P <0.05);(3)低、高剂量氧化苦参碱干预可抑制与染砷LO2细胞培养上清共孵育的LX-2细胞的活力( P <0.05),且使LX-2细胞α-SMA、Atg12、Atg5和LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著下调( P <0.05),高剂量氧化苦参碱干预的LX-2细胞自噬标志蛋白LC3-Ⅱ表达水平降低较低剂量氧化苦参碱干预更为显著( P <0.05);(4)低、高剂量氧化苦参碱干预后LX-2细胞内脂滴数量较染砷LO2细胞培养上清共孵育的LX-2细胞均显著增多。结论:砷致肝纤维化过程中间接活化HSC与砷损伤肝细胞有关,细胞自噬参与这一过程,且HSC可能通过促进其内脂滴降解而促进自身的活化。氧化苦参碱可通过抑制细胞自噬,减少HSC活化实现其减轻肝纤维化的作用。
