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前列腺干细胞抗原及其单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达与检测
被引量：
3
1
作者
尚国富
刘江丽
+4 位作者
于欢
唐开义
曾柱
胡祖权
王赟
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2020年第12期1968-1971,共4页
扩增前列腺干细胞抗原(PSCA)及其特异单链抗体PaFv的编码基因,分别克隆到pET-32a和pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌感受态细胞。融合蛋白TrxA-PSCA和PaFv-AP诱导表达后,SDS-PAGE和Westernblot分析其表达情况,碱性磷酸酶(AP)显色反应和ELISA...
扩增前列腺干细胞抗原(PSCA)及其特异单链抗体PaFv的编码基因,分别克隆到pET-32a和pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌感受态细胞。融合蛋白TrxA-PSCA和PaFv-AP诱导表达后,SDS-PAGE和Westernblot分析其表达情况,碱性磷酸酶(AP)显色反应和ELISA检测蛋白的活性。结果显示构建的原核表达体系成功实现TrxA-PSCA和PaFv-AP融合蛋白的可溶性表达,而且PaFv-AP具有与PSCA抗原结合的抗体活性以及AP活性。
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关键词
前列腺干细胞抗原
单链抗体
碱性磷酸酶
原核表达
免疫学检测
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职称材料
体外转录小鼠MAGE-A3 mRNA在NIH/3T3细胞中的表达
2
作者
陈鹤丹
林煊
+7 位作者
谢颖
陈尧
杨君仪
王赟
张世超
胡祖权
曾柱
刘丽娜
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2020年第8期1157-1160,共4页
目的构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得MAGE-A3 mRNA,在哺乳动物细胞NIH/3T3中表达MAGE-A3蛋白。方法通过逆转录PCR从三阴型乳腺癌细胞系4T1中扩增得到MAGE-A3编码基因,插入到载体pcDNA3.1(+)中,成功构建重组表达载体pcDNA3.1...
目的构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得MAGE-A3 mRNA,在哺乳动物细胞NIH/3T3中表达MAGE-A3蛋白。方法通过逆转录PCR从三阴型乳腺癌细胞系4T1中扩增得到MAGE-A3编码基因,插入到载体pcDNA3.1(+)中,成功构建重组表达载体pcDNA3.1-MAGE作为体外转录RNA的模板。利用T7体外转录试剂盒获得MAGE-A3 RNA,添加poly(A)尾后进行mRNA纯化。将纯化后的MAGE-A 3 mRNA转染到NIH/3T3细胞中,Western blot实验检测MAGE-A3蛋白的表达。结果pcDNA3.1-MAGE-A3正确表达和构建。体外转录MAGE-A3 mRNAA(260)/A(280)为1.92,浓度是872.3 ng/μl,长度约为500 bp。转染MAGE-A3 mRNA后,NIH/3T3能表达大小约35 ku的MAGE-A3蛋白。结论成功构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得纯度较高的MAGE-A3 mRNA,该mRNA能在NIH/3T3细胞中表达MAGE-A3蛋白。
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关键词
MAGE-A3
体外转录mRNA
蛋白表达
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职称材料
题名
前列腺干细胞抗原及其单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达与检测
被引量：
3
1
作者
尚国富
刘江丽
于欢
唐开义
曾柱
胡祖权
王赟
机构
贵州医科大学生物与医学工程重点实验室/贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心
贵州
医科
大学
基础
医学
院/
生物与
工程
学院
贵州
医科
大学
环境污染与疾病监控省部共建教育部
重点
实验室
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2020年第12期1968-1971,共4页
基金
国家自然科学基金(编号:31660258)
贵州省科学技术基金(编号:黔科合支撑[2019]2787号、黔科合基础[2018]1412、黔科合平台人才[2016]5676)
国家级大学生创新创业训练项目(编号:201810660020)。
文摘
扩增前列腺干细胞抗原(PSCA)及其特异单链抗体PaFv的编码基因,分别克隆到pET-32a和pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌感受态细胞。融合蛋白TrxA-PSCA和PaFv-AP诱导表达后,SDS-PAGE和Westernblot分析其表达情况,碱性磷酸酶(AP)显色反应和ELISA检测蛋白的活性。结果显示构建的原核表达体系成功实现TrxA-PSCA和PaFv-AP融合蛋白的可溶性表达,而且PaFv-AP具有与PSCA抗原结合的抗体活性以及AP活性。
关键词
前列腺干细胞抗原
单链抗体
碱性磷酸酶
原核表达
免疫学检测
Keywords
prostate stem cell antigen
single-chain variable fragment antibody
alkaline phosphatase
prokaryotic expression
immunological detection
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
体外转录小鼠MAGE-A3 mRNA在NIH/3T3细胞中的表达
2
作者
陈鹤丹
林煊
谢颖
陈尧
杨君仪
王赟
张世超
胡祖权
曾柱
刘丽娜
机构
贵州
医科
大学
生物与
工程
学院
生物
技术教研室
贵州医科大学生物与医学工程重点实验室/贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心
/医药
生物
技术
工程
研究
中心
贵州
医科
大学
基础
医学
院
贵州
医科
大学
环境污染与疾病监控教育部
重点
实验室
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2020年第8期1157-1160,共4页
基金
国家自然科学基金(编号:81760556)
贵州省科技计划项目(编号:黔科合基础[2016]1118)
+4 种基金
贵州省科技合作计划项目(编号:黔科合LH字[2015]7318)
贵州医科大学2018年度学术新苗培养及创新探索专项项目(编号:黔科合平台人才[2018]5779-55)
贵阳市科技计划项目(编号:筑科合同[20161001]40、筑科合同[2017]5-27号)
贵州省卫生健康委科学技术基金项目(编号:gzwjkj2019-1-041)
国家级大学生创新创业训练计划项目(编号:20195200134)。
文摘
目的构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得MAGE-A3 mRNA,在哺乳动物细胞NIH/3T3中表达MAGE-A3蛋白。方法通过逆转录PCR从三阴型乳腺癌细胞系4T1中扩增得到MAGE-A3编码基因,插入到载体pcDNA3.1(+)中,成功构建重组表达载体pcDNA3.1-MAGE作为体外转录RNA的模板。利用T7体外转录试剂盒获得MAGE-A3 RNA,添加poly(A)尾后进行mRNA纯化。将纯化后的MAGE-A 3 mRNA转染到NIH/3T3细胞中,Western blot实验检测MAGE-A3蛋白的表达。结果pcDNA3.1-MAGE-A3正确表达和构建。体外转录MAGE-A3 mRNAA(260)/A(280)为1.92,浓度是872.3 ng/μl,长度约为500 bp。转染MAGE-A3 mRNA后,NIH/3T3能表达大小约35 ku的MAGE-A3蛋白。结论成功构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得纯度较高的MAGE-A3 mRNA,该mRNA能在NIH/3T3细胞中表达MAGE-A3蛋白。
关键词
MAGE-A3
体外转录mRNA
蛋白表达
Keywords
MAGE-A3
in vitro transcribed mRNA
protein expression
分类号
Q812 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
前列腺干细胞抗原及其单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达与检测
尚国富
刘江丽
于欢
唐开义
曾柱
胡祖权
王赟
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2020
3
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职称材料
2
体外转录小鼠MAGE-A3 mRNA在NIH/3T3细胞中的表达
陈鹤丹
林煊
谢颖
陈尧
杨君仪
王赟
张世超
胡祖权
曾柱
刘丽娜
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2020
0
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