工厂化生产香肠肠衣腐烂黑斑中嗜盐细菌的分离鉴定及其特征特性 被引量：3

1

作者 牟丽丽 涂云华 +5 位作者 Syren de Hoog 刘涛华 吕倩 王颜颜 陈燕 康颖倩 《贵州农业科学》 CAS 2016年第1期93-97,共5页

为工厂化生产的相关食品及农产品储存过程中微生物的鉴定及抑菌对策提供理论依据,采用高盐察氏液体培养基（Czapek Dox Broth）梯度盐浓度培养法,CDA（Czapek Dox Agar）及TSA（Trypticase Soy Agar）固体培养基进行分离纯化,16SrRNA基... 为工厂化生产的相关食品及农产品储存过程中微生物的鉴定及抑菌对策提供理论依据,采用高盐察氏液体培养基（Czapek Dox Broth）梯度盐浓度培养法,CDA（Czapek Dox Agar）及TSA（Trypticase Soy Agar）固体培养基进行分离纯化,16SrRNA基因测序,邻接法构建16SrRNA序列的系统发育树等方法,对工厂生产香肠肠衣腐烂黑斑中嗜盐细菌进行分离鉴定,研究其特征特性。结果表明：25%~30%盐浓度固体培养基中分离到3株嗜盐细菌（Gyfl1,Gyfl2,Gyfl3）,经分子学分析鉴定Gyfl1为Halomonas variabilis,Gyfl2为Chromohalobacter israelensis,Gyfl3为Chromohalobacter canadensis;经药敏试验,庆大霉素、卡那霉素、利福平、红霉素和新霉素等常见抗生素均能抑制嗜盐菌株Gyfl1、Gyfl2和Gyfl3,而利福平抑菌效果更明显。 展开更多

关键词 嗜盐细菌 香肠肠衣 系统发育树 抗生素敏感

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贵阳市结核分枝杆菌链霉素和乙胺丁醇耐药相关基因突变的检测与分析 被引量：7

2

作者 孙荣 欧维正 +4 位作者 王燕 蒙俊 秦万 毕雅坤 陈峥宏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期760-764,共5页

目的了解贵阳市及周边地区结核分枝杆菌链霉素和乙胺丁醇耐药相关基因rpsl、rrs和embB的突变特征。方法对39株结核分枝杆菌临床分离株(乙胺丁醇和链霉素均耐药菌株19株,均敏感菌株20株)的rpsl、rrs和embB基因片段进行PCR扩增和测序,以H3... 目的了解贵阳市及周边地区结核分枝杆菌链霉素和乙胺丁醇耐药相关基因rpsl、rrs和embB的突变特征。方法对39株结核分枝杆菌临床分离株(乙胺丁醇和链霉素均耐药菌株19株,均敏感菌株20株)的rpsl、rrs和embB基因片段进行PCR扩增和测序,以H37Rv菌株序列为参考,比较耐药菌株和敏感菌株的突变特征。结果 19株耐药菌株中有14株检出rpsl基因突变,突变率为73.7%(14/19),其中12株为AAG43AGG突变,1株为AAG43AAT突变,1株为AAG88AGG突变;20株敏感菌株中有1株发生rpsl基因AAG43AGG突变,突变率为5.0%;耐药菌株和敏感菌株均未检测出rrs基因突变。19株耐药菌株中有16株检出embB基因突变,突变率为84.2%(16/19),突变包括6株ATG306GTG突变,ATG306ATA、ATG306ATT和ATG306ATC突变各1株;GGC406GCC和GGC406AGC突变各3株,1株CAG497CGG突变;20株敏感菌株未检测出突变。结论贵阳地区结核分枝杆菌菌株链霉素和乙胺丁醇耐药相关基因突变具有多样性;优势突变分别为rpsl43和embB306位点突变。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 链霉素 乙胺丁醇 耐药性 基因突变

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几类主要病原需氧放线菌菌属的SecA1基因分析研究 被引量：3

3

作者 牟丽丽 涂云华 +3 位作者 明春艳 夏茂宁 孟俞辰 康颖倩 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期349-355,共7页

目的了解几类主要病原需氧放线菌不同菌属间SecA1基因碱基突变特点,为病原需氧放线菌的实验室诊断,分类及致病性提供一定的实验室理论数据。方法以162株需氧放线菌为实验研究对象,通过分子生物学方法对需氧放线菌SecA1基因扩增测序,及收... 目的了解几类主要病原需氧放线菌不同菌属间SecA1基因碱基突变特点,为病原需氧放线菌的实验室诊断,分类及致病性提供一定的实验室理论数据。方法以162株需氧放线菌为实验研究对象,通过分子生物学方法对需氧放线菌SecA1基因扩增测序,及收集NCBI数据库中已发表的需氧放线菌SecA1基因,运用多序列对比及DNAStar软件对需氧放线菌SecA1序列进行特异性基序分析及SecA1蛋白的二级结构和表位特性预测。结果需氧放线菌不同菌属间SecA1序列在300～350bp区域有着特异性差异,经预测该区域编码的SecA1蛋白二级结构属间大致相同,而蛋白质柔性区域、亲水性及表面可及性等性质在属间存在差异,其中以Mycobacteria菌属的差异较为明显。结论需氧放线菌SecA1基因不同菌属间具有特异性的碱基突变,这种突变导致属间SecA1蛋白部分性质有差异,与各菌属致病性可能存在着一定的相关性。 展开更多

关键词 需氧放线菌 SecA1基因 碱基突变 SecA1蛋白

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分子信标探针技术用于PCR检测诺卡氏菌SecA1基因 被引量：1

4

作者 王颜颜 夏茂宁 +4 位作者 明春艳 黄劲 刘涛华 周兵 康颖倩 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期508-512,共5页

目的将诺卡氏菌属细菌的一段特异性DNA设计成分子信标探针,用于该细菌的PCR检测。方法将诺卡氏菌属细菌、戈登氏菌属细菌及红球菌属细菌菌株分别接种于脑心浸液琼脂培养基分离培养,观察其生长情况,提取菌株DNA作为扩增模板;设计诺卡氏... 目的将诺卡氏菌属细菌的一段特异性DNA设计成分子信标探针,用于该细菌的PCR检测。方法将诺卡氏菌属细菌、戈登氏菌属细菌及红球菌属细菌菌株分别接种于脑心浸液琼脂培养基分离培养,观察其生长情况,提取菌株DNA作为扩增模板;设计诺卡氏菌属细菌基于secA1基因的特异性分子信标探针,在实时荧光定量PCR反应译体系中加入分子信标探针,PCR产物进行荧光信号检测。结果诺卡氏菌secA1基因经实时荧光定量PCR扩增后可产生阳性荧光信号,红球菌属细菌及戈登氏菌属细菌的secA1基因、阴性对照实验组及空白对照组经实时荧光定量PCR扩增后不产生荧光信号,为阴性。结论 secA1作为看家基因,是用来进行种水平的鉴定及系统进化研究非常理想的靶分子,而分子信标探针技术可以准确、快速、灵敏的进行诺卡氏菌secA1基因检测。 展开更多

关键词 诺卡氏菌属 SecA1基因 分子信标探针 实时荧光定量PCR

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猪胆汁体外诱导培养物和胆囊中鼠伤寒沙门菌L型的检测

5

作者 孙亮亮 王和 《贵州农业科学》 CAS 2015年第8期181-184,共4页

为了解鼠伤寒沙门菌L型在猪胆囊内的携带情况,将鼠伤寒沙门菌接种于猪胆汁内进行体外培养,采用非高渗分离培养法分离胆汁培养物内的细菌L型,用二重PCR和核苷酸序列测定检测细菌L型分离物的invA和STM4495基因,建立猪胆囊内鼠伤寒沙门菌L... 为了解鼠伤寒沙门菌L型在猪胆囊内的携带情况,将鼠伤寒沙门菌接种于猪胆汁内进行体外培养,采用非高渗分离培养法分离胆汁培养物内的细菌L型,用二重PCR和核苷酸序列测定检测细菌L型分离物的invA和STM4495基因,建立猪胆囊内鼠伤寒沙门菌L型的检测方法,并对488份猪胆囊标本进行细菌L型的检测。结果表明:在1h至60d的猪胆汁诱导培养物内能够检出细菌L型,其与鼠伤寒沙门菌invA和STM4495基因的核苷酸序列的符合率均为99%;猪胆囊标本中细菌L型的阳性率为51.43%,二重PCR鉴定沙门菌invA基因的阳性率为2.66%,其中鼠伤寒沙门菌STM4495基因的阳性率为1.02%。 展开更多

关键词 胆汁 鼠伤寒沙门菌 细菌L型 胆囊

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松油烯-4-醇对人黑色素瘤WM35细胞增殖及凋亡的影响 被引量：5

6

作者 涂云华 李明娥 +6 位作者 康颖倩 周英 叶振源 薛月萃 荣冬芸 昝雪娟 曹煜 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第10期1584-1587,共4页

目的:研究松油烯-4-醇(T4O)对WM35细胞增殖及凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:不同浓度T4O体外作用WM35细胞。CCK-8测抑制率;AO/EB染色后倒置显微镜观察细胞形态;比色法测Caspase-3酶活性;流式细胞术测凋亡及周期;JC-1测线粒体膜电位(... 目的:研究松油烯-4-醇(T4O)对WM35细胞增殖及凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:不同浓度T4O体外作用WM35细胞。CCK-8测抑制率;AO/EB染色后倒置显微镜观察细胞形态;比色法测Caspase-3酶活性;流式细胞术测凋亡及周期;JC-1测线粒体膜电位(MMP);蛋白印迹测Bax及Bcl-2表达。结果:T4O以时间-剂量依赖性方式抑制WM35细胞增殖。T4O诱导WM35细胞凋亡,呈剂量依赖性,随药物浓度增加,Caspase-3酶活性逐渐增强,MMP逐渐降低,Bax/Bcl-2比值升高,周期阻滞在G2/M期。结论:T4O对WM35细胞有抑制增殖及促凋亡作用,其机制是通过线粒体途径使凋亡相关蛋白Bax表达上调、Bcl-2下调,激活凋亡途径关键酶Caspase-3,使细胞周期阻滞在G2/M期。 展开更多

关键词 松油烯-4-醇 WM35细胞 凋亡 流式细胞术 蛋白印迹

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重组甲型流感病毒NS2蛋白抑制感染小鼠肺组织干扰素的产生 被引量：3

7

作者 朱颜鑫 牟秋菊 +4 位作者 赵兵兵 罗红 智妍 兰露莎 江滟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1615-1619,共5页

目的用大肠杆菌表达获得甲型流感病毒(IAV)非结构蛋白2(NS2),并观察NS2蛋白对小鼠肺组织γ干扰素(IFN-γ)产生的影响。方法构建p ET22b(+)/NS2原核表达质粒并转化大肠杆菌Rosetta-gami(2),通过诱导表达、纯化获得NS2。将40只BALB/c小鼠... 目的用大肠杆菌表达获得甲型流感病毒(IAV)非结构蛋白2(NS2),并观察NS2蛋白对小鼠肺组织γ干扰素(IFN-γ)产生的影响。方法构建p ET22b(+)/NS2原核表达质粒并转化大肠杆菌Rosetta-gami(2),通过诱导表达、纯化获得NS2。将40只BALB/c小鼠,随机分8组,分别为正常对照组、200μg/kg NS2联合病毒组、200μg/kg NS2联合RNA组、100μg/kg灭活病毒、0.2×半数致死量(LD50)病毒组、50μg/kg病毒RNA组、200μg/kg NS2组和100μg/kg NS2组,各组滴鼻给予小鼠处理。通过反转录PCR、Western blot法分别检测肺组织IFN-γ的mRNA和蛋白表达。结果在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下表达并纯化获得重组NS2;将NS2或/和IAV滴鼻给小鼠后,反转录PCR和Western blot法检测表明NS2联合病毒组的小鼠肺组织IFN-γmRNA和蛋白水平较病毒组均降低。结论 NS2抑制IAV所诱导的小鼠肺组织IFN-γmRNA和蛋白的水平。 展开更多

关键词 甲型流感病毒 非结构蛋白 Γ干扰素

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姜黄挥发油对人恶性黑色素瘤细胞株A375细胞增殖及凋亡的影响 被引量：4

8

作者 荣冬芸 涂云华 +5 位作者 昝雪娟 薛月翠 叶振源 康颖倩 周英 曹煜 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第11期1177-1181,共5页

目的姜黄挥发油（ tumienc volatile oil,TV0 ） 对多种肿瘤细胞具有抑制作用,能显著减少肿瘤数目,缩小瘤体体积.文中研究TV0 对人表皮黑色素瘤A3 7 5细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法观察不同浓度TV0在体外对A375细胞的作用... 目的姜黄挥发油（ tumienc volatile oil,TV0 ） 对多种肿瘤细胞具有抑制作用,能显著减少肿瘤数目,缩小瘤体体积.文中研究TV0 对人表皮黑色素瘤A3 7 5细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法观察不同浓度TV0在体外对A375细胞的作用,CCK8 法测不同浓度TVO（2.5-160mg/ L）在不同时间段（24、48、7211）对人375细胞的增殖抑制率;根据CCK8 结果选取有效最低药物浓度进行实验.吉姆萨染色,倒置显微镜观察细胞凋亡形态;D N A片段化检测细胞凋亡;流式细胞术测细胞凋亡率; Western blot检测Caspase-3及BIRC7 蛋白表达.结果 CCK-8检测显示TV0 浓度为0 - 160mg/L ,抑制率达0 - 4 0 %,并呈时间依赖关系;TV0 诱导A375细胞凋亡,吉姆萨染色下可见药物诱导后细胞增殖变慢,贴壁性降低,细胞间隙增大,形态变得不规则,有核固缩、核碎裂及核溶解,提取DNA凝胶电泳药物作48 h 后,可见凋亡典型的DNA梯状条带,并随药物浓度增加细胞核碎裂越明显;浓度为2.5、5、10mg/ L 的TVO,A3 7 5凋亡率分别为12.7%、13.6%、15.4%,死亡率仅为 0.1% ;与 0mg/L TV0 作用 48 h 后 Caspase-3 表达量（0.412±0.060）比较,2.5、5、1 0 mg/L TV0 作用后表达量（1.021 土0.02、1.238±0.07、1.484±0.09）逐渐增加（P 〈0.05）;与 0 mg/L TV0 作用 4 8 h 后 BIRC7 蛋白表达量（1.538± 0.060）比较,2.5、5、10mg/L TVO作用表达量（1.298±0.02、1.136±0.07、0.54 1±0.09）逐渐下降（P 〈0.05）. 结论TVO对人恶性黑色素瘤细胞株A375细胞有抑制增殖作用,同时有促其凋亡作用,具有抗肿瘤细胞功效,可能与通过下调细胞凋亡抑制蛋白BIRC7表达,激活细胞凋亡途径关键酶Caspase-3,进而抑制肿瘤细胞分化、增殖与促进凋亡有关. 展开更多

关键词 姜黄挥发油 A375细胞 凋亡 BIRC7 CASPASE-3

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不同来源白念珠菌感染小鼠前后胞外水解酶活力差异 被引量：2

9

作者 夏茂宁 邱文 +6 位作者 牛雪可 王梅竹 赵亮 张金娟 田敏 廖万清 康颖倩 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期613-618,634,共7页

目的了解白念珠菌进入小鼠宿主前后其分泌胞外水解酶能力是否改变。方法挑选分泌型天冬氨酸蛋白酶、磷脂酶、脂肪酶活力无差异的艾滋病、外阴阴道念珠病病患来源和健康人来源白念珠菌,尾静脉注射感染小鼠,分离发病死亡小鼠肾脏菌株,比... 目的了解白念珠菌进入小鼠宿主前后其分泌胞外水解酶能力是否改变。方法挑选分泌型天冬氨酸蛋白酶、磷脂酶、脂肪酶活力无差异的艾滋病、外阴阴道念珠病病患来源和健康人来源白念珠菌,尾静脉注射感染小鼠,分离发病死亡小鼠肾脏菌株,比较感染小鼠前后菌株胞外水解酶活力差异。结果不同来源菌株感染的小鼠28d内死亡速率差异显著(χ2=82.5,P<0.05),从高到低依次为艾滋病、外阴阴道念珠病、健康人来源组;各来源菌株感染小鼠后肾脏分离株分泌型天冬氨酸蛋白酶表达水平皆高于感染小鼠前(F=7.89,P<0.05),不同来源区别显著(F=4.96,P<0.05),从高到低依次为艾滋病、外阴阴道念珠病、健康人来源;感染小鼠前均未曾测得磷脂酶活力的各来源菌株中,在感染小鼠后仅艾滋病、外阴阴道念珠病来源组小鼠肾脏分离株可测得磷脂酶活力,但艾滋病、外阴阴道念珠病来源两组间感染小鼠后肾脏分离株磷脂酶活力无显著差异(F=2.54,P>0.05);各来源白念珠菌感染小鼠前后均未测得脂肪酶活力。结论在宿主体内白念珠菌表达天冬氨酸蛋白酶、磷脂酶能力相较于体外有增强;在不同宿主环境状态下,白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶和磷脂酶的潜在表达能力有差异,即宿主免疫状态越弱时,白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶、磷脂酶潜在表达能力越强。 展开更多

关键词 白念珠菌 分泌型天冬氨酸蛋白酶 磷脂酶 脂肪酶 小鼠模型

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大肠杆菌fliC基因失活突变株的构建及其特征 被引量：2

10

作者 赵行行 程玉梅 +3 位作者 陈娴 崔古贞 齐晓岚 洪伟 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期27-32,56,共7页

构建编码大肠杆菌鞭毛蛋白基因(fliC)失活突变株,并探究其生物被膜形成改变后在应激状态下的生物学特征。使用Thermotargetron靶向基因失活系统,构建fliC基因失活突变株(ΔfliC420s),测定ΔfliC420s与野生型菌株的生长速率、运动能力、... 构建编码大肠杆菌鞭毛蛋白基因(fliC)失活突变株,并探究其生物被膜形成改变后在应激状态下的生物学特征。使用Thermotargetron靶向基因失活系统,构建fliC基因失活突变株(ΔfliC420s),测定ΔfliC420s与野生型菌株的生长速率、运动能力、生物被膜形成能力、自溶速率、pH敏感性及对抗生素耐受性的变化。ΔfliC420s相比野生型菌株,生长速率未受影响,在半固体培养基中运动能力缺失,生物被膜形成能力明显降低,菌体自溶速率加快,pH敏感性增强,以及对D-环丝氨酸、红霉素、诺氟沙星的耐受性降低。大肠杆菌fliC基因在细菌生物被膜形成和对外界压力的抵抗中具有重要作用。 展开更多

关键词 大肠杆菌 fliC基因 生物被膜 基因失活 Thermotargetron

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猕猴桃果肉内生菌株鉴定及其抑菌活性分析 被引量：3

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作者 陈帮丹 魏洪 +3 位作者 黄亚励 冯丽 李俞亭 王芳胜 《江苏农业科学》 2018年第12期71-75,共5页

采用PDA和LB培养基培养新鲜的猕猴桃果肉内生菌,用平板对峙法筛选出具有抑菌活性的内生菌株,用平板倾注法测定筛选出的内生菌不同浓度发酵液对标准菌株和临床菌株的抑菌活性,并基于形态特征、生理生化特性、电镜扫描结果、16S rDNA基因... 采用PDA和LB培养基培养新鲜的猕猴桃果肉内生菌,用平板对峙法筛选出具有抑菌活性的内生菌株,用平板倾注法测定筛选出的内生菌不同浓度发酵液对标准菌株和临床菌株的抑菌活性,并基于形态特征、生理生化特性、电镜扫描结果、16S rDNA基因序列同源性分析、N-J法系统发育树鉴定菌株。结果表明,从猕猴桃果肉中分离获得3株内生细菌,并初筛出1株抑菌活性较为明显的菌株,被鉴定为粪肠碱杆菌,能够抑制标准菌株大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌及临床菌株中革兰氏阴性菌株大肠埃希氏菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷柏菌的生长,对革兰氏阳性菌株金黄色葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、肺炎链球菌的生长无作用。 展开更多

关键词 猕猴桃 果肉 内生菌 抑菌活性 粪肠碱杆菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希氏菌

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六盘水市六枝特区牛场辣椒品质分析

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作者 高忠蓉 魏洪 +2 位作者 迟茜文 熊力 安文 《现代农业科技》 2020年第2期51-53,共3页

为了测定牛场辣椒单椒重、果型指数等感官形态和辣椒碱、辣椒红色素含量,分析牛场辣椒的品质,本试验随机抽取牛场鲜辣椒与干辣椒各50个,用分光光度法检测辣椒碱和辣椒红色素含量,用蒽酮比色法检测可溶性糖含量,用灼烧重量法检测灰分含... 为了测定牛场辣椒单椒重、果型指数等感官形态和辣椒碱、辣椒红色素含量,分析牛场辣椒的品质,本试验随机抽取牛场鲜辣椒与干辣椒各50个,用分光光度法检测辣椒碱和辣椒红色素含量,用蒽酮比色法检测可溶性糖含量,用灼烧重量法检测灰分含量。结果表明,牛场鲜椒中叶绿素与类胡萝卜素的含量分别为1.314 mg/L及4.530 mg/L;牛场干辣椒中辣椒红色素的含量为170.271 mg/kg,辣椒碱含量为1.652%,可溶性糖含量差异极显著(P<0.01)。牛场辣椒的辣椒碱、辣椒红色素、可溶性糖含量等理化性状明显优于贵州地区其他牛角椒,是具有独特地方特色的牛角辣椒品系。 展开更多

关键词 牛场辣椒 感官形态 理化性状 辣椒碱

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