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SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合结构域编码基因的体外转录及其在293T细胞中的表达
1
作者
周雪
高磊
+3 位作者
张瑾宬
袁思凌
操蓉
刘丽娜
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第3期123-129,共7页
为获得能表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的体外转录mRNA,将设计、优化并合成的RBD基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-RBD;重组质粒转染哺乳动物细胞293T后,We...
为获得能表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的体外转录mRNA,将设计、优化并合成的RBD基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-RBD;重组质粒转染哺乳动物细胞293T后,Western blot检测重组蛋白RBD的表达;以表达RBD的重组质粒为模板,PCR扩增包含T7启动子的RBD基因片段作为体外转录模板,之后利用T7转录试剂盒体外转录获得修饰的RBD mRNA,添加多聚腺苷酸尾后使用RNA纯化试剂盒进行纯化,纯化后的RBD mRNA转染至293T细胞中,利用Western blot进行目的蛋白表达鉴定。结果显示,编码RBD的重组质粒构建成功并能在293T细胞中表达外源蛋白,体外转录获得修饰的RBD mRNA能在哺乳动物细胞中翻译,表达的RBD蛋白能与抗RBD的单克隆抗体反应,具有免疫反应原性,为SARS-CoV-2 RBD mRNA疫苗的研制奠定了基础。
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关键词
严重急性呼吸综合征冠状病毒2
刺突蛋白
受体结合结构域
体外转录
真核表达
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职称材料
前列腺干细胞抗原及其单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达与检测
被引量：
3
2
作者
尚国富
刘江丽
+4 位作者
于欢
唐开义
曾柱
胡祖权
王赟
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2020年第12期1968-1971,共4页
扩增前列腺干细胞抗原(PSCA)及其特异单链抗体PaFv的编码基因,分别克隆到pET-32a和pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌感受态细胞。融合蛋白TrxA-PSCA和PaFv-AP诱导表达后,SDS-PAGE和Westernblot分析其表达情况,碱性磷酸酶(AP)显色反应和ELISA...
扩增前列腺干细胞抗原(PSCA)及其特异单链抗体PaFv的编码基因,分别克隆到pET-32a和pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌感受态细胞。融合蛋白TrxA-PSCA和PaFv-AP诱导表达后,SDS-PAGE和Westernblot分析其表达情况,碱性磷酸酶(AP)显色反应和ELISA检测蛋白的活性。结果显示构建的原核表达体系成功实现TrxA-PSCA和PaFv-AP融合蛋白的可溶性表达,而且PaFv-AP具有与PSCA抗原结合的抗体活性以及AP活性。
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关键词
前列腺干细胞抗原
单链抗体
碱性磷酸酶
原核表达
免疫学检测
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职称材料
题名
SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合结构域编码基因的体外转录及其在293T细胞中的表达
1
作者
周雪
高磊
张瑾宬
袁思凌
操蓉
刘丽娜
机构
贵州医科大学基础医学院生物与工程学院
贵州
医科
大学
生物与
医学
工程
重点实验室
贵州
医科
大学
环境污染与疾病监控教育部重点实验室
出处
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第3期123-129,共7页
基金
贵州省科技计划项目(黔科合支撑[2020]4Y217)
国家级大学生创新创业训练计划项目(202110660008)
贵州省大学生创新创业训练计划项目(S202010660060)。
文摘
为获得能表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的体外转录mRNA,将设计、优化并合成的RBD基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-RBD;重组质粒转染哺乳动物细胞293T后,Western blot检测重组蛋白RBD的表达;以表达RBD的重组质粒为模板,PCR扩增包含T7启动子的RBD基因片段作为体外转录模板,之后利用T7转录试剂盒体外转录获得修饰的RBD mRNA,添加多聚腺苷酸尾后使用RNA纯化试剂盒进行纯化,纯化后的RBD mRNA转染至293T细胞中,利用Western blot进行目的蛋白表达鉴定。结果显示,编码RBD的重组质粒构建成功并能在293T细胞中表达外源蛋白,体外转录获得修饰的RBD mRNA能在哺乳动物细胞中翻译,表达的RBD蛋白能与抗RBD的单克隆抗体反应,具有免疫反应原性,为SARS-CoV-2 RBD mRNA疫苗的研制奠定了基础。
关键词
严重急性呼吸综合征冠状病毒2
刺突蛋白
受体结合结构域
体外转录
真核表达
Keywords
SARS-COV-2
spike protein
receptor-binding domain
in vitro transcription
eukaryotic expression
分类号
S859.797 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
前列腺干细胞抗原及其单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达与检测
被引量：
3
2
作者
尚国富
刘江丽
于欢
唐开义
曾柱
胡祖权
王赟
机构
贵州
医科
大学
生物与
医学
工程
重点实验室/
贵州
省免疫细胞与抗体
工程
研究中心
贵州
医科
大学
基础
医学院
/
生物与
工程
学院
贵州
医科
大学
环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2020年第12期1968-1971,共4页
基金
国家自然科学基金(编号:31660258)
贵州省科学技术基金(编号:黔科合支撑[2019]2787号、黔科合基础[2018]1412、黔科合平台人才[2016]5676)
国家级大学生创新创业训练项目(编号:201810660020)。
文摘
扩增前列腺干细胞抗原(PSCA)及其特异单链抗体PaFv的编码基因,分别克隆到pET-32a和pDAP2/S载体中,转化大肠杆菌感受态细胞。融合蛋白TrxA-PSCA和PaFv-AP诱导表达后,SDS-PAGE和Westernblot分析其表达情况,碱性磷酸酶(AP)显色反应和ELISA检测蛋白的活性。结果显示构建的原核表达体系成功实现TrxA-PSCA和PaFv-AP融合蛋白的可溶性表达,而且PaFv-AP具有与PSCA抗原结合的抗体活性以及AP活性。
关键词
前列腺干细胞抗原
单链抗体
碱性磷酸酶
原核表达
免疫学检测
Keywords
prostate stem cell antigen
single-chain variable fragment antibody
alkaline phosphatase
prokaryotic expression
immunological detection
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合结构域编码基因的体外转录及其在293T细胞中的表达
周雪
高磊
张瑾宬
袁思凌
操蓉
刘丽娜
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
前列腺干细胞抗原及其单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达与检测
尚国富
刘江丽
于欢
唐开义
曾柱
胡祖权
王赟
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2020
3
在线阅读
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职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
统计分析
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