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基于高分辨率熔解曲线技术的CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变快速检测研究
被引量：
1
1
作者
陈黎
卢茜
+2 位作者
杨红兰
张鹏
何志旭
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第10期90-96,共7页
旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果...
旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果已知的CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆进行检测,根据熔解温度与熔解曲线的差异区分野生型、纯合突变型及杂合突变型,以验证HRM方法的可行性和准确性。结果表明,优化的HRM检测方法能够鉴别野生型、纯合突变型及杂合突变型小鼠胚胎干细胞。应用建立的HRM方法分析30个CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆,结果显示,14个单克隆为杂合突变型、2个单克隆为纯合突变型、14个单克隆为野生型,与测序结果一致,准确率为100%。本研究建立的高分辨率熔解曲线法能对CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变进行快速筛选,是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。
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关键词
高分辨率熔解曲线
CRISPR/Cas9
细胞基因突变
检测
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职称材料
采用等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条检测登革热病毒
被引量：
4
2
作者
赵锦
夏海雄
+4 位作者
刘雨杰
Ravinder Pal
范安然
何志旭
曾令文
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期405-412,共8页
目的:探讨等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条用于登革热病毒(DENV)快速检测的可行性。方法:采用磁珠富集法提取病毒总RNA,并逆转录为cDNA用于等温链置换扩增检测体系;等温链置换扩增用于检测DENV,琼脂糖凝胶电泳用于分析等温链置...
目的:探讨等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条用于登革热病毒(DENV)快速检测的可行性。方法:采用磁珠富集法提取病毒总RNA,并逆转录为cDNA用于等温链置换扩增检测体系;等温链置换扩增用于检测DENV,琼脂糖凝胶电泳用于分析等温链置换扩增产物及其检测的敏感度;采用柠檬酸三钠还原法制备用于试纸条的纳米金颗粒;利用核酸碱基互补配对原理设计纳米金测流层析试纸条的检测线与控制线,建立DENV的检测体系。结果:等温链置换扩增的敏感度为10 fmol/L。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的敏感度也为10 fmol/L,取其检测样品浓度的对数值进行线性分析,检测浓度范围为10～10^(12)fmol/L,符合线性回归方程,线性相关系数(R^2)为0. 98。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的特异性较高,与其他对照组无交叉。结论:建立了基于等温链置换扩增反应的纳米金试纸条用于DENV的检测方法,检测结果肉眼可见,敏感度高,可用于DENV的快速检测。
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关键词
登革热/诊断
DNA引物
序列分析
核酸扩增技术
纳米技术
金/诊断应用
生物技术
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职称材料
题名
基于高分辨率熔解曲线技术的CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变快速检测研究
被引量：
1
1
作者
陈黎
卢茜
杨红兰
张鹏
何志旭
机构
贵州
医科
大学
基础
医学院
免疫
学
教研室
组织
工程
与干细胞
实验
中心
中国
医学
科
学院
成体
干细胞
转化研究重点
实验
室
遵义
医科
大学
附属医院儿科
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第10期90-96,共7页
基金
国家自然科学基金项目(32000601,81871313)
贵州医科大学博士启动基金(院博合J字[2018]016号)
贵州医科大学学术新苗计划(黔科合平台人才[2018]5779-74)。
文摘
旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果已知的CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆进行检测,根据熔解温度与熔解曲线的差异区分野生型、纯合突变型及杂合突变型,以验证HRM方法的可行性和准确性。结果表明,优化的HRM检测方法能够鉴别野生型、纯合突变型及杂合突变型小鼠胚胎干细胞。应用建立的HRM方法分析30个CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆,结果显示,14个单克隆为杂合突变型、2个单克隆为纯合突变型、14个单克隆为野生型,与测序结果一致,准确率为100%。本研究建立的高分辨率熔解曲线法能对CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变进行快速筛选,是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。
关键词
高分辨率熔解曲线
CRISPR/Cas9
细胞基因突变
检测
Keywords
high-resolution melting
CRISPR/Cas9
gene mutation in cells
detection
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
采用等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条检测登革热病毒
被引量：
4
2
作者
赵锦
夏海雄
刘雨杰
Ravinder Pal
范安然
何志旭
曾令文
机构
贵州医科大学基础医学院免疫教研室组织工程与干细胞实验中心
贵州
医科
大学
海外教育
学院
中国科
学院
广州生物与医药健康研究院
干细胞
与分子诊断室
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期405-412,共8页
基金
广东省科技计划(2014B020212011).
文摘
目的:探讨等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条用于登革热病毒(DENV)快速检测的可行性。方法:采用磁珠富集法提取病毒总RNA,并逆转录为cDNA用于等温链置换扩增检测体系;等温链置换扩增用于检测DENV,琼脂糖凝胶电泳用于分析等温链置换扩增产物及其检测的敏感度;采用柠檬酸三钠还原法制备用于试纸条的纳米金颗粒;利用核酸碱基互补配对原理设计纳米金测流层析试纸条的检测线与控制线,建立DENV的检测体系。结果:等温链置换扩增的敏感度为10 fmol/L。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的敏感度也为10 fmol/L,取其检测样品浓度的对数值进行线性分析,检测浓度范围为10～10^(12)fmol/L,符合线性回归方程,线性相关系数(R^2)为0. 98。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的特异性较高,与其他对照组无交叉。结论:建立了基于等温链置换扩增反应的纳米金试纸条用于DENV的检测方法,检测结果肉眼可见,敏感度高,可用于DENV的快速检测。
关键词
登革热/诊断
DNA引物
序列分析
核酸扩增技术
纳米技术
金/诊断应用
生物技术
Keywords
Dengue/diagnosis
DNA primers
Sequence analysis
Nucleic acid amplification techniques
Nanotechnology
Gold/diagnostic use
Biotechnology
分类号
R446.9 [医药卫生—诊断学]
R373.3 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于高分辨率熔解曲线技术的CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变快速检测研究
陈黎
卢茜
杨红兰
张鹏
何志旭
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
采用等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条检测登革热病毒
赵锦
夏海雄
刘雨杰
Ravinder Pal
范安然
何志旭
曾令文
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018
4
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职称材料
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