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基于液相色谱-串联质谱法测定血清中37种氨基酸含量
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作者 赵云霞 李子樱 +10 位作者 陈欣 张玉鑫 肖伟敏 刘爱平 李美芳 金一宝 杜青平 王奇 苏佳婷 杨国武 方文 《分析测试学报》 北大核心 2025年第11期2313-2322,共10页
建立了一种基于液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)定量分析血清中37种氨基酸的方法。样本经10%磺基水杨酸水溶液沉淀蛋白处理后,使用Phenomenex Kinetex F5(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱分离,以0.02%甲酸水溶液-乙腈作为流动相梯度洗脱,... 建立了一种基于液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)定量分析血清中37种氨基酸的方法。样本经10%磺基水杨酸水溶液沉淀蛋白处理后,使用Phenomenex Kinetex F5(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱分离,以0.02%甲酸水溶液-乙腈作为流动相梯度洗脱,在电喷雾离子源(ESI)正离子和多反应监测(MRM)模式下检测。对检测方法进行方法学验证,结果表明,37种氨基酸在检出限至1000 ng/mL范围内线性良好,相关系数均大于0.999,保留时间为4.60~9.16 min,检出限为0.2~10.0 ng/mL,定量下限为0.5~20.0 ng/mL,不同加标浓度的平均回收率为83.2%~118%,相对标准偏差为0.90%~9.4%。应用该方法检测49例血清样本,鹅肌肽与胱硫醚未检出,同型半胱氨酸的检出率为10.20%,其余34种氨基酸的检出率均大于90%。该方法具有高的准确性、灵敏度和特异性,可用于血清样本中氨基酸的含量测定,为与氨基酸代谢紊乱相关的疾病提供更全面的检测数据。 展开更多
关键词 液相色谱-串联质谱法 氨基酸 血清 磺基水杨酸
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抑制自噬增强盐酸阿霉素诱导的人结直肠癌细胞凋亡 被引量:1
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作者 汤弘婷 吴道秋 +5 位作者 杨瀚林 杨娟 张艺 李梦醒 刘虹麟 李琴山 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期237-243,共7页
目的 探讨盐酸阿霉素(DOX)抑制结直肠癌HT29、 HCT15细胞增殖的可能机制。方法 HT29、 HCT15细胞采用(0、 0.08、 0.16、 0.32、 0.64、 1.28)μmol/L DOX处理24、 48、 72 h,CCK-8法检测细胞增殖活性确定DOX最佳处理浓度和处理时间。将... 目的 探讨盐酸阿霉素(DOX)抑制结直肠癌HT29、 HCT15细胞增殖的可能机制。方法 HT29、 HCT15细胞采用(0、 0.08、 0.16、 0.32、 0.64、 1.28)μmol/L DOX处理24、 48、 72 h,CCK-8法检测细胞增殖活性确定DOX最佳处理浓度和处理时间。将HT29、 HCT15细胞分别设为对照组(只加DMSO处理)和(0.16、 0.32、 0.64、 1.28)μmol/LDOX处理组,Western blot法检测抑制自噬对凋亡的影响时添加3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、 3-MA联合DOX组。集落形成实验检测结直肠癌细胞的集落形成能力,Western blot法检测细胞B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)、 beclin 1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)的蛋白表达。结果 DOX抑制结直肠癌细胞的增殖和集落形成,促进细胞发生凋亡,呈浓度依赖性;DOX促进细胞发生自噬,beclin 1和LC3Ⅱ表达增加,呈浓度依赖性;抑制自噬后可增加DOX对结直肠癌细胞的促凋亡作用。结论 DOX抑制结直肠癌细胞增殖并促进其凋亡且抑制自噬有促凋亡作用。 展开更多
关键词 结直肠癌(CRC) 盐酸阿霉素(DOX) 细胞凋亡 自噬
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褪黑素通过激活自噬抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长和转移
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作者 吴道秋 张艺 +4 位作者 汤弘婷 杨娟 李梦醒 刘虹麟 李琴山 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期278-285,共8页
目的探讨褪黑素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和转移的作用及其机制。方法将MDA-MB-231细胞设置对照组以及1、3、5 mmol/L褪黑素处理组,Western blot检测自噬对细胞生长、转移的影响时,添加3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、3-MA联合褪黑素组。使用... 目的探讨褪黑素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和转移的作用及其机制。方法将MDA-MB-231细胞设置对照组以及1、3、5 mmol/L褪黑素处理组,Western blot检测自噬对细胞生长、转移的影响时,添加3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、3-MA联合褪黑素组。使用不同浓度褪黑素处理MDA-MB-231乳腺癌细胞24、48 h,并加入0.1%无水乙醇的细胞作为对照,CCK-8法检测细胞增殖活性确定最佳处理浓度和时间,筛选出3 mmol/L褪黑素用于后续实验。集落形成实验及划痕实验检测不同浓度褪黑素对乳腺癌细胞集落形成能力和迁移能力的影响;流式细胞术、免疫荧光检测3 mmol/L褪黑素对MDA-MB-231细胞凋亡率和自噬蛋白阳性着色情况;Western blot检测自噬相关蛋白LC3、P62、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl2、Bax,上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、Snai1的水平。结果 CCK-8结果显示,与对照组相比,褪黑素呈浓度及时间依赖性抑制乳腺癌细胞的增殖(P<0.05);集落形成实验显示,3个浓度褪黑素处理组的集落数低于对照组;褪黑素作用24 h后明显抑制乳腺癌细胞划痕愈合速度(P<0.01),并诱导细胞凋亡率增加(P<0.01);且与对照组相比,褪黑素组的促凋亡蛋白Bax表达增加(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl2表达下调(P<0.05),Bcl2/Bax的比值逐渐减低(P<0.01);转录因子Snail减少,上皮细胞标志蛋白E-cadherin增加;单独使用褪黑素能够诱导细胞内自噬标记蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1表达增加,P62表达减少(P<0.05)以及Beclin1蛋白阳性着色增强,P62蛋白阳性着色减弱;3-MA+褪黑素组中自噬相关蛋白Beclin1(P<0.001)、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(P<0.05)以及凋亡蛋白Bax(P<0.01)、上皮细胞标志蛋白E-cadherin(P<0.001)明显低于褪黑素组,抗凋亡蛋白Bcl2(P<0.05)、转录因子Snail以及Bcl2/Bax的比值(P<0.01)高于褪黑素组。结论褪黑素可通过诱导MDA-MB-231乳腺癌细胞发生自噬,抑制乳腺癌细胞增殖、转移并促进其凋亡,而减少自噬,可减弱褪黑素对乳腺癌细胞生长和转移的抑制作用。 展开更多
关键词 褪黑素 乳腺癌 生长 转移
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