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不同载体表达的家蝇β-葡萄糖苷酶生物学活性比较
被引量：
2
1
作者
张姝
胡蓉
+5 位作者
黄健
吴建伟
国果
付萍
修江帆
尚小丽
《环境昆虫学报》
CSCD
北大核心
2018年第4期908-916,共9页
克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因,建立两种原核表达体系和一种真核表达体系,分别检测表达产物的活性,比较不同表达体系对其表达水平及重组蛋白酶学性质的影响,为进一步研究和利用家蝇BG酶奠定基础。本研究根据BG...
克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因,建立两种原核表达体系和一种真核表达体系,分别检测表达产物的活性,比较不同表达体系对其表达水平及重组蛋白酶学性质的影响,为进一步研究和利用家蝇BG酶奠定基础。本研究根据BG酶基因的cDNA序列设计引物扩增BG酶基因成熟肽的基因片段,分别采用表达载体pET-28a(+)和pEGX-4T-1构建原核表达体系并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。在65 kDa附近均出现特异性蛋白条带,进行Western Blotting鉴定证实重组质粒在其宿主菌E.coli BL21(DE3)中成功表达,命名为MDBG-1蛋白和MDBG-2蛋白。同时选用真核表达载体pPICZa A构建酵母分泌型表达体系在酵母细胞GS115中获得稳定的表达,将其命名为MDBG-3蛋白。采用七叶苷平板法和DNS法对三种表达体系所重组表达的蛋白进行酶活性鉴定和检测,显示3种表达体系所表达的融合蛋白均具有BG酶活性,其酶活力有所不同,且真核表达体系所表达的蛋白酶活性最高。本研究对家蝇β-葡萄糖苷酶基因表达的重组蛋白特性进行初步研究,为发现新的有效纤维素酶体系提供基础数据。
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关键词
家蝇
Β-葡萄糖苷酶
异源性表达
酶活性
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职称材料
家蝇β-葡萄糖苷酶基因的克隆及重组表达
被引量：
5
2
作者
张姝
胡蓉
+5 位作者
黄健
吴建伟
国果
付萍
修江帆
尚小丽
《环境昆虫学报》
CSCD
北大核心
2017年第4期930-939,共10页
克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因并建立原核表达体系,检测其表达产物的活性,了解家蝇内源性BG酶特点,为进一步解释家蝇极强环境适应能力和发现新的种群控制措施提供分子生物学基础。以草地贪夜蛾等结构信息相对...
克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因并建立原核表达体系,检测其表达产物的活性,了解家蝇内源性BG酶特点,为进一步解释家蝇极强环境适应能力和发现新的种群控制措施提供分子生物学基础。以草地贪夜蛾等结构信息相对完整且研究较为透彻的6种代表性昆虫的BG酶基因序列为参照对象,利用同源克隆结合RACE-PCR的方法,从家蝇cDNA中克隆得到BG酶基因的全长cDNA序列并对其进行生物信息学分析。分别采用原核表达载体pET-28a(+)构建原核表达体系并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达BG酶基因的融合蛋白。采用七叶苷平板显色法和DNS法检测表达体系融合蛋白的酶活性,并对其性质进行初步的分析。家蝇体内克隆得到了长度为1933 bp的家蝇BG酶基因全长cDNA序列,推导其为562个氨基酸残基组成的蛋白多肽。重组原核质粒经诱导表达后,在65 kDa附近均出现特异性蛋白条带,证实重组质粒成功表达。重组表达的家蝇BG酶兼具内切β-1,4-葡聚糖酶、外切β-1,4-葡聚糖酶和BG的酶活性。家蝇BG酶是一种新的多功能纤维素酶,是昆虫纤维素酶研究的重要补充。
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关键词
家蝇
Β-葡萄糖苷酶
克隆
异源性表达
酶活性
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职称材料
题名
不同载体表达的家蝇β-葡萄糖苷酶生物学活性比较
被引量：
2
1
作者
张姝
胡蓉
黄健
吴建伟
国果
付萍
修江帆
尚小丽
机构
贵州医科大学临床基础检验学教研室
贵州
医科
大学
人体寄生虫
学
教研室
出处
《环境昆虫学报》
CSCD
北大核心
2018年第4期908-916,共9页
基金
贵州省教育厅培育项目[(2009)0137]
国家科技支撑计划课题(2011BAC06B12)
+1 种基金
国家自然科学基金(30960343)
国家教育部博士点专项基金[(2008)220]
文摘
克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因,建立两种原核表达体系和一种真核表达体系,分别检测表达产物的活性,比较不同表达体系对其表达水平及重组蛋白酶学性质的影响,为进一步研究和利用家蝇BG酶奠定基础。本研究根据BG酶基因的cDNA序列设计引物扩增BG酶基因成熟肽的基因片段,分别采用表达载体pET-28a(+)和pEGX-4T-1构建原核表达体系并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。在65 kDa附近均出现特异性蛋白条带,进行Western Blotting鉴定证实重组质粒在其宿主菌E.coli BL21(DE3)中成功表达,命名为MDBG-1蛋白和MDBG-2蛋白。同时选用真核表达载体pPICZa A构建酵母分泌型表达体系在酵母细胞GS115中获得稳定的表达,将其命名为MDBG-3蛋白。采用七叶苷平板法和DNS法对三种表达体系所重组表达的蛋白进行酶活性鉴定和检测,显示3种表达体系所表达的融合蛋白均具有BG酶活性,其酶活力有所不同,且真核表达体系所表达的蛋白酶活性最高。本研究对家蝇β-葡萄糖苷酶基因表达的重组蛋白特性进行初步研究,为发现新的有效纤维素酶体系提供基础数据。
关键词
家蝇
Β-葡萄糖苷酶
异源性表达
酶活性
Keywords
Musca domestica
β-glucosidase
heterogenous express
enzymatic activity
分类号
Q963 [生物学—昆虫学]
S433 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
家蝇β-葡萄糖苷酶基因的克隆及重组表达
被引量：
5
2
作者
张姝
胡蓉
黄健
吴建伟
国果
付萍
修江帆
尚小丽
机构
贵州医科大学临床基础检验学教研室
贵州
医科
大学
人体寄生虫
学
教研室
出处
《环境昆虫学报》
CSCD
北大核心
2017年第4期930-939,共10页
基金
贵州省教育厅培育项目[(2009)0137]
国家科技支撑计划课题(2011BAC06B12)
+1 种基金
国家自然科学基金(30960343)
国家教育部博士点专项基金[(2008)220]
文摘
克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因并建立原核表达体系,检测其表达产物的活性,了解家蝇内源性BG酶特点,为进一步解释家蝇极强环境适应能力和发现新的种群控制措施提供分子生物学基础。以草地贪夜蛾等结构信息相对完整且研究较为透彻的6种代表性昆虫的BG酶基因序列为参照对象,利用同源克隆结合RACE-PCR的方法,从家蝇cDNA中克隆得到BG酶基因的全长cDNA序列并对其进行生物信息学分析。分别采用原核表达载体pET-28a(+)构建原核表达体系并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达BG酶基因的融合蛋白。采用七叶苷平板显色法和DNS法检测表达体系融合蛋白的酶活性,并对其性质进行初步的分析。家蝇体内克隆得到了长度为1933 bp的家蝇BG酶基因全长cDNA序列,推导其为562个氨基酸残基组成的蛋白多肽。重组原核质粒经诱导表达后,在65 kDa附近均出现特异性蛋白条带,证实重组质粒成功表达。重组表达的家蝇BG酶兼具内切β-1,4-葡聚糖酶、外切β-1,4-葡聚糖酶和BG的酶活性。家蝇BG酶是一种新的多功能纤维素酶,是昆虫纤维素酶研究的重要补充。
关键词
家蝇
Β-葡萄糖苷酶
克隆
异源性表达
酶活性
Keywords
Musca domestica
β-glucosidase
clone
heterogenous express
enzymatic activity
分类号
Q963 [生物学—昆虫学]
S433.89 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
不同载体表达的家蝇β-葡萄糖苷酶生物学活性比较
张姝
胡蓉
黄健
吴建伟
国果
付萍
修江帆
尚小丽
《环境昆虫学报》
CSCD
北大核心
2018
2
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职称材料
2
家蝇β-葡萄糖苷酶基因的克隆及重组表达
张姝
胡蓉
黄健
吴建伟
国果
付萍
修江帆
尚小丽
《环境昆虫学报》
CSCD
北大核心
2017
5
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