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一种同时培养原代神经元和原代星形胶质细胞的实验方法 被引量:4
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作者 薛建锋 魏娜 杨淳 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1479-1482,共4页
目的建立一种简便实用的可同时提取原代神经元和原代星形胶质细胞的培养方法。方法选用出生24 h的SD乳鼠,75%乙醇消毒,断脊法处死。用眼科镊拨开脑膜各层,取出完整大脑。游离海马,剥离血管,木瓜蛋白酶消化,然后吹打、离心、过滤,以合适... 目的建立一种简便实用的可同时提取原代神经元和原代星形胶质细胞的培养方法。方法选用出生24 h的SD乳鼠,75%乙醇消毒,断脊法处死。用眼科镊拨开脑膜各层,取出完整大脑。游离海马,剥离血管,木瓜蛋白酶消化,然后吹打、离心、过滤,以合适密度种植于相应培养皿。4 h后更换培养基,以后每2天半量换液培养。第5天用免疫荧光法鉴定细胞种类,计算神经元纯度;第7天待神经元形成网络后进行后续实验。将剩余大脑皮层进行胶质细胞的提取。用同样方法剥除脑膜、血管,胰酶消化,过滤,差速贴壁。以合适密度种植于培养瓶,用梯度血清法纯化细胞。第7天后,鉴定并计算星形胶质细胞纯度,选5代之内的细胞进行后续实验。结果提取的原代神经元和神经胶质细胞形态良好,杂质少,纯度高,纯度分别为(95±0.62)%和(94±0.73)%,可以用于后续的实验。结论该方法所需试剂和设备简单,提取的细胞纯度高、质量好,是一种方便实用的可以同时进行原代神经元与原代星形胶质细胞培养的方法。 展开更多
关键词 海马 神经元 星形胶质细胞 细胞培养 原代培养
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结直肠癌肿瘤引流淋巴结T细胞的特征及其功能 被引量:3
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作者 唐景玲 杨远 +3 位作者 李晓云 杜航 王新俊 刘艳洁 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期869-876,共8页
目的:探讨结直肠癌(colorectal cancer,CRC)肿瘤引流淋巴结(tumor-draining lymph node,TDLN)中T细胞的免疫学特性及其抗肿瘤作用。方法:收集2018年12月至2021年1月贵州医科大学附属医院收治的33例CRC患者的临床资料和淋巴结标本。采用... 目的:探讨结直肠癌(colorectal cancer,CRC)肿瘤引流淋巴结(tumor-draining lymph node,TDLN)中T细胞的免疫学特性及其抗肿瘤作用。方法:收集2018年12月至2021年1月贵州医科大学附属医院收治的33例CRC患者的临床资料和淋巴结标本。采用染料法示踪,配对采集CRC患者TDLN和非肿瘤引流淋巴结(non-TDLN,NTDLN)。用流式细胞术检测已制备成单细胞悬液的TDLN和NTDLN中免疫细胞亚群和功能表型差异,酶联免疫斑点法比较TDLN和NTDLN中肿瘤反应性T细胞比例,多色免疫荧光组织化学技术分析两种淋巴结中免疫细胞空间分布情况。体外扩增TDLN-T细胞,检测其T细胞亚群和表型变化以及肿瘤免疫反应能力。结果:与NTDLN相比,TDLN中含有更高比例肿瘤反应性T细胞(P<0.05),调节性T(Treg)细胞比例较高(P<0.01),但单核样髓源性抑制细胞比例较低(P<0.05),T细胞活化标志物ICOS、CD28和抑制标志物PD-1、TIGIT比例均显著升高(P<0.05或P<0.01)。Treg细胞和滤泡性T细胞主要分布在淋巴结皮质区和生发中心。TDLN-T细胞扩增后,以CD8^(+)T细胞为主(P<0.01),ICOS、CD28表达升高(P<0.05或P<0.01),肿瘤反应性T细胞比例升高(P<0.01)。结论:CRC的TDLN中T细胞处于免疫激活状态,同时高表达免疫抑制标志物;体外培养可以增加TDLN-T细胞活化水平,并提高抗肿瘤T细胞比例。 展开更多
关键词 结直肠癌 肿瘤引流淋巴结 免疫微环境 T细胞活化 T细胞抑制
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