目的应用蛋白质组学结合液相色谱和质谱技术,鉴定和定量分析大鼠肝脏细胞色素P450(cytochromeP450,CYP450)酶系蛋白的表达情况。方法取SD大鼠16只分为正常组和天麻组,给药7天后,取肝脏组织提取蛋白,应用同位素标记相对和绝对定量(isobar...目的应用蛋白质组学结合液相色谱和质谱技术,鉴定和定量分析大鼠肝脏细胞色素P450(cytochromeP450,CYP450)酶系蛋白的表达情况。方法取SD大鼠16只分为正常组和天麻组,给药7天后,取肝脏组织提取蛋白,应用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tag for relative and absolute quantitation,iTRAQ)试剂标记后进行质谱鉴定,使用蛋白质组学定量软件对二级质谱数据进行分析。通过注释、可视化和综合发现数据库(the database for annotation,visualizationand integrated discovery,DAVID)对靶点进行基因本体论和通路富集分析。采用相互作用分析核心靶点,酶联免疫吸附试验法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清和肝脏中核心靶点的表达情况,基于分子对接分析天麻化学成分与核心靶点的结合情况。结果与正常组比较,天麻可以上调10个CYP450酶系蛋白的表达(Cyp11a1,Cyp11b1,Cyp21a1,Cyp2b2,Cyp2b15,Cyp8b1,Cyp17a1,Cyp4a2,Cyp2b1,Cyp2c13),下调Cyp7a1和Cyp51a1酶系蛋白的表达(P<0.05)。这些蛋白主要参与类固醇激素生物合成、花生四烯酸代谢等(P<0.01)。相互作用分析结果发现Cyp17a1和Cyp7a1为核心靶点。ELISA检测结果发现,与正常组相比,天麻组大鼠肝脏中CYP17A1活性显著升高(P<0.05),CYP7A1活性显著降低(P<0.05)。分子对接分析发现天麻醚苷、枸橼酸、4-(4′-羟苄氧基)苄基甲醚、胡萝卜苷与CYP17A1有较好的结合,天麻素、天麻醚苷、4-(4′-羟苄氧基)苄基甲醚、胡萝卜苷与CYP7A1有较好的结合。结论本研究进一步了解天麻及其化学成分对CYP450酶系的影响,为扩大天麻制品的临床应用提供依据。展开更多
文摘目的应用蛋白质组学结合液相色谱和质谱技术,鉴定和定量分析大鼠肝脏细胞色素P450(cytochromeP450,CYP450)酶系蛋白的表达情况。方法取SD大鼠16只分为正常组和天麻组,给药7天后,取肝脏组织提取蛋白,应用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tag for relative and absolute quantitation,iTRAQ)试剂标记后进行质谱鉴定,使用蛋白质组学定量软件对二级质谱数据进行分析。通过注释、可视化和综合发现数据库(the database for annotation,visualizationand integrated discovery,DAVID)对靶点进行基因本体论和通路富集分析。采用相互作用分析核心靶点,酶联免疫吸附试验法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清和肝脏中核心靶点的表达情况,基于分子对接分析天麻化学成分与核心靶点的结合情况。结果与正常组比较,天麻可以上调10个CYP450酶系蛋白的表达(Cyp11a1,Cyp11b1,Cyp21a1,Cyp2b2,Cyp2b15,Cyp8b1,Cyp17a1,Cyp4a2,Cyp2b1,Cyp2c13),下调Cyp7a1和Cyp51a1酶系蛋白的表达(P<0.05)。这些蛋白主要参与类固醇激素生物合成、花生四烯酸代谢等(P<0.01)。相互作用分析结果发现Cyp17a1和Cyp7a1为核心靶点。ELISA检测结果发现,与正常组相比,天麻组大鼠肝脏中CYP17A1活性显著升高(P<0.05),CYP7A1活性显著降低(P<0.05)。分子对接分析发现天麻醚苷、枸橼酸、4-(4′-羟苄氧基)苄基甲醚、胡萝卜苷与CYP17A1有较好的结合,天麻素、天麻醚苷、4-(4′-羟苄氧基)苄基甲醚、胡萝卜苷与CYP7A1有较好的结合。结论本研究进一步了解天麻及其化学成分对CYP450酶系的影响,为扩大天麻制品的临床应用提供依据。
