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TDP-43对氧糖剥夺诱导的小鼠HL-1心房肌细胞凋亡的影响及其机制
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作者 岳娇 龚美婷 +4 位作者 徐伍 王鹏 袁木 谭言飞 裴海峰 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1305-1313,共9页
目的探讨TARDNA结合蛋白43(TDP-43)对氧糖剥夺(OGD)诱导小鼠HL-1心房肌细胞凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的小鼠HL-1心房肌细胞分为:(1)对照组及不同OGD处理时间(2、4、8、16h)组,采用CCK-8法检测细胞活力,Westernblotting检测TDP... 目的探讨TARDNA结合蛋白43(TDP-43)对氧糖剥夺(OGD)诱导小鼠HL-1心房肌细胞凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的小鼠HL-1心房肌细胞分为:(1)对照组及不同OGD处理时间(2、4、8、16h)组,采用CCK-8法检测细胞活力,Westernblotting检测TDP-43蛋白表达水平,以此确定OGD诱导时间点用于后续研究;(2)对照组与OGD组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1染色法检测线粒体膜电位,化学发光法检测三磷酸腺苷(ATP)相对含量,微板法检测丙二醛(MDA)含量,WST-1法检测超氧化物歧化酶(SOD)含量。将转染慢病毒的小鼠HL-1心房肌细胞分为:(1)阴性对照慢病毒干预组(NC-shRNA)、TDP-43敲低慢病毒干预组(TDP-43-shRNA1、TDP-43-shRNA2、TDP-43-shRNA3),Westernblotting检测TDP-43蛋白表达水平,选择慢病毒敲低效率最高的TDP-43-shRNA用于后续试验;(2)NC-shRNA组、TDP-43-shRNA组、OGD+NC-shRNA组、OGD+TDP-43-shRNA组,在常氧条件和OGD条件下,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,MitoTracker染色法检测线粒体形态,JC-1染色法检测线粒体膜电位,化学发光法检测ATP含量,流式细胞术检测活性氧(ROS)荧光强度,微板法检测MDA含量,WST-1法检测SOD含量。结果CCK-8法检测结果显示,随OGD时间的延长,小鼠HL-1心房肌细胞的活力逐渐下降;Westernblotting检测结果显示,TDP-43蛋白表达水平逐渐升高,两者均呈现较强的时间依赖性。与对照组比较,在OGD16h时小鼠HL-1心房肌细胞活力最低(P<0.05)、TDP-43蛋白表达量最高(P<0.05),据此后续实验选择OGD16h为诱导时间点。与对照组比较,OGD组细胞凋亡率、线粒体膜电位荧光强度比值、MDA含量升高,ATP相对含量、SOD含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Westernblotting检测结果显示,与NC-shRNA组比较,TDP-43-shRNA2组TDP-43蛋白表达水平降低最为明显(P<0.05),敲低效率最高,因此选择TDP-43-shRNA2进行后续实验。流式细胞术检测结果显示,在常氧条件下,与NC-shRNA组比较,TDP-43-shRNA组细胞凋亡率无明显变化(P>0.05);在OGD条件下,与OGD+NC-shRNA组比较,OGD+TDP-43-shRNA组细胞凋亡率降低(P<0.05)。MitoTracker染色结果显示,与NC-shRNA组比较,TDP-43-shRNA组线粒体形态完整,无明显变化;OGD+NC-shRNA组线粒体数量增多,多数为碎片状,分布散乱;与OGD+NC-shRNA组比较,OGD+TDP-43-shRNA组线粒体形态有所恢复。在常氧条件下,与NC-shRNA组比较,TDP-43-shRNA组线粒体膜电位荧光强度比值、ATP相对含量、ROS荧光强度、MDA含量、SOD含量均无明显变化(P>0.05);但在OGD条件下,与OGD+NC-shRNA组比较,OGD+TDP-43-shRNA组细胞线粒体膜电位荧光强度比值、ROS荧光强度、MDA含量降低,ATP相对含量、SOD含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TDP-43通过调控心肌细胞凋亡加重OGD诱导的线粒体功能障碍,因此,敲低TDP-43的表达有望成为缺血性心肌病的潜在治疗策略。 展开更多
关键词 TARDNA结合蛋白43 氧糖剥夺 细胞凋亡 氧化应激
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GSDMD介导的细胞焦亡对小鼠骨骼肌肌肉萎缩的影响及机制研究 被引量:7
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作者 李玫 李霜 +4 位作者 胡健 林正霄 张桂蓉 刘莎 李福祥 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第15期1486-1492,共7页
目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下小鼠骨骼肌肌管中肌肉萎缩和GSDMD介导的细胞焦亡发生情况,以期为进一步阐明ICU获得性衰弱(ICU-acquired weakness,ICU-AW)的发病机制提供线索。方法将C2C12小鼠骨骼肌成肌细胞诱导分化形... 目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下小鼠骨骼肌肌管中肌肉萎缩和GSDMD介导的细胞焦亡发生情况,以期为进一步阐明ICU获得性衰弱(ICU-acquired weakness,ICU-AW)的发病机制提供线索。方法将C2C12小鼠骨骼肌成肌细胞诱导分化形成肌管。分别设置:Control组,加无菌PBS溶液;LPS组,LPS处理浓度梯度为1、10、100μg/mL;LPS+ATP组,以LPS组相同浓度梯度干预肌管后均添加ATP(5 mmol/L)。并分别在LPS干预6 h和12 h这两个时间点检测肌管内外发生的变化。光镜下观察肌管形态学变化,采用Western blot法检测各组肌管中肌管形成标志蛋白MHC、Myogenin、HDAC1和细胞焦亡标志蛋白GSDMD的表达,采用荧光定量PCR检测各组肌管中萎缩基因Atrogin-1、MuRF-1 mR NA和细胞焦亡相关炎性因子IL-18 mR NA表达,采用ELISA检测肌管培养上清IL-18浓度。结果 (1)光镜可见分化第5天肌管形成。(2)RT-qPCR检测结果显示:LPS干预12 h后LPS/LPS+ATP各组肌管中萎缩基因Atrogin-1和MuRF-1 mR NA的表达均显著上调(P <0.05),与细胞焦亡相关的炎性因子IL-18 mR NA在肌管中的表达趋势相同(P <0.05)。(3)ELISA检测结果显示:LPS干预12h后各组肌管培养液上清中IL-18浓度显著高于对照组(P <0.05)。(4)Western blot法检测结果显示:各组干预的肌管中肌管形成标志蛋白MHC、Myogenin、HDAC1均能稳定表达;LPS/LPS+ATP处理后肌管GSDMD蛋白表达量较对照组显著增加(P <0.05)。结论在LPS刺激下小鼠骨骼肌肌管中可发生细胞焦亡,并与肌管萎缩相关。 展开更多
关键词 ICU获得性衰弱 危重症肌病 肌肉萎缩 肌管 脂多糖 细胞焦亡
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核转录因子TDP-43的病理作用及在疾病诊疗中的应用研究进展 被引量:1
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作者 岳娇 李琴 +7 位作者 杨兵 安豫 唐晓峰 陈颖梅 卢柯吉 王鹏 李公任 裴海峰 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1026-1033,共8页
核转录因子TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)是一种普遍表达且在进化上高度保守的DNA/RNA结合蛋白。在生理状态下,TDP-43主要定位于细胞核、细胞质(含量不超过30%)时可发挥生理学作用,如参与mRNA的转录、剪接、翻译、转运以及维持mRNA的稳定性... 核转录因子TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)是一种普遍表达且在进化上高度保守的DNA/RNA结合蛋白。在生理状态下,TDP-43主要定位于细胞核、细胞质(含量不超过30%)时可发挥生理学作用,如参与mRNA的转录、剪接、翻译、转运以及维持mRNA的稳定性等,若错误定位于线粒体则发挥相应的病理作用。近年来的研究发现,除了在神经退行性疾病中发挥作用外,TDP-43还在肿瘤、男性不育和骨性关节炎(OA)等其他疾病的病理进程中起重要作用。因此,TDP-43的基因表达、亚细胞器转位、功能以及与疾病的关系越来越受到关注。本文对TDP-43的病理作用及其在疾病诊疗中的应用研究进展进行综述,以期为相关疾病的诊断及治疗提供更多帮助。 展开更多
关键词 TAR DNA结合蛋白43 亚细胞定位 神经退行性疾病 病理学
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DDX3的病理生理学作用
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作者 徐伍 徐瑞 +2 位作者 张信琴 林加龙 裴海峰 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期104-112,共9页
DEAD-box RNA解旋酶3(DEAD-box RNA helicase 3,DDX3),亦称DEAD-box RNA解旋酶3 X连锁(DEAD-box RNA helicase 3 X-linked,DDX3X),是一种高度保守并依赖ATP的RNA解旋酶,广泛分布于真核生物中,主要定位在细胞核和细胞质发挥生理作用,与RN... DEAD-box RNA解旋酶3(DEAD-box RNA helicase 3,DDX3),亦称DEAD-box RNA解旋酶3 X连锁(DEAD-box RNA helicase 3 X-linked,DDX3X),是一种高度保守并依赖ATP的RNA解旋酶,广泛分布于真核生物中,主要定位在细胞核和细胞质发挥生理作用,与RNA剪接和衰变、mRNA输出、转录、翻译相关,进一步参与细胞周期的进展、先天免疫反应、细胞凋亡、癌症发生与抑制、病毒的复制周期等多种重要的细胞生理过程.长期以来,DDX3的基因表达,调控及其功能以及它与疾病的关系一直被关注,尤其是与病毒和癌症的关系更为热点研究.因此,本文主要探讨、总结DDX3的病理生理学作用. 展开更多
关键词 DEAD-box RNA解旋酶3 DEAD-box RNA解旋酶3 X连锁 RNA 肿瘤 病毒
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