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缺氧条件下SNAⅡ激活基质金属蛋白酶对脉络膜新生血管生成的促进作用
被引量：
10
1
作者
孙嘉星
窦国睿
+6 位作者
常天芳
李曼红
杨子岩
晏贤春
刘瑗
韩骅
王雨生
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期16-22,共7页
目的探讨缺氧环境下活化的血管内皮细胞是否可诱导SNAI1表达上调，进而通过SNAI1-基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9途径参与CNV生成。方法选取SPF级6～8周龄雄性C57小鼠16只并分为对照组和模型组，采用视网膜激光光凝法诱导小鼠CNV模型。...
目的探讨缺氧环境下活化的血管内皮细胞是否可诱导SNAI1表达上调，进而通过SNAI1-基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9途径参与CNV生成。方法选取SPF级6～8周龄雄性C57小鼠16只并分为对照组和模型组，采用视网膜激光光凝法诱导小鼠CNV模型。于造模后7 d摘取小鼠眼球以制备视网膜色素上皮（RPE）－脉络膜－巩膜复合体铺片和冰冻切片，采用Isolectin B4免疫荧光染色技术检测脉络膜铺片中CNV形成情况，并观察CNV组织附近血管内皮细胞中SNAI1、MMP2和MMP9的表达及定位；采用实时荧光定量PCR法检测CNV组织中SNAI1、MMP2和MMP9 mRNA的表达变化。将培养的恒河猴脉络膜/视网膜内皮（RF/6A）细胞分为常氧组和缺氧组，分别在含体积分数5%CO2培养箱或含体积分数94%N2、5%CO2和体积分数1%O2培养箱中孵育24 h，分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot技术测定各组细胞中SNAI1、MMP2和MMP9在转录水平和蛋白水平的表达变化。用小干扰SNAI1（siSNAI1）转染RF/6A细胞，采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测细胞中MMP2和MMP9在转录和蛋白水平的表达变化，并采用Transwell小室法检测血管内皮细胞的迁移数目。结果造模后7 d小鼠脉络膜铺片中可见CD31阳性和SNAI1阳性荧光染色细胞及双阳性细胞；模型组小鼠RPE－脉络膜－巩膜复合体中SNAI1 mRNA和MMP2 mRNA相对表达量分别为1.291±0.060和1.610±0.424，均明显高于对照组的0.759±0.074和0.772±0.080，差异均有统计学意义（P＝0.001、0.044），模型组小鼠RPE－脉络膜－巩膜复合体中MMP9 mRNA升高，但与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05），且MMP2 mRNA表达量高于MMP9 mRNA，差异有统计学意义（P〈0.01）。缺氧组RF/6A细胞中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、SNAI1和MMP2 mRNA及其蛋白的相对表达量均明显高于常氧组，差异均有统计学意义（均P〈0.05），各组间MMP9 mRNA相对表达量的差异无统计学意义（P〉0.05）。缺氧＋siSNAI1组RF/6A细胞中MMP2 mRNA相对表达量为0.217±0.036，明显低于单纯缺氧组的0.818±0.105；缺氧＋siSNAI1组RF/6A细胞中MMP2蛋白相对表达量为0.236±0.009，明显低于单纯缺氧组的1.043±0.120，差异均有统计学意义（P＝0.002、0.003）。siSNAI1组血管内皮细胞迁移数目为（254.60±71.31）/视野，明显少于正常对照组的（534.10±96.21）/视野，差异有统计学意义（P＝0.029）。结论CNV局部的缺氧环境可能通过上调血管内皮细胞中SNAI1的表达而激活MMP2，促进血管内皮细胞迁移，从而参与CNV生成；缺氧条件下SNAI1的下调可抑制上述过程。
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关键词
脉络膜新生血管
基质金属蛋白酶
小干扰RNA
转录因子SNAⅡ
血管内皮细胞
动物模型
缺氧
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职称材料
题名
缺氧条件下SNAⅡ激活基质金属蛋白酶对脉络膜新生血管生成的促进作用
被引量：
10
1
作者
孙嘉星
窦国睿
常天芳
李曼红
杨子岩
晏贤春
刘瑗
韩骅
王雨生
机构
解放军空军
军医大学
西京医院眼科全军眼科研究所
解放军空军军医大学基础医学院遗传与发育生物学教研室肿瘤生物学国家重点实验室
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期16-22,共7页
基金
国家自然科学基金项目（81770936、81670863）
高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金项目（201481）
陕西省青年科技新星计划项目（2016KJXX-19）
文摘
目的探讨缺氧环境下活化的血管内皮细胞是否可诱导SNAI1表达上调，进而通过SNAI1-基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9途径参与CNV生成。方法选取SPF级6～8周龄雄性C57小鼠16只并分为对照组和模型组，采用视网膜激光光凝法诱导小鼠CNV模型。于造模后7 d摘取小鼠眼球以制备视网膜色素上皮（RPE）－脉络膜－巩膜复合体铺片和冰冻切片，采用Isolectin B4免疫荧光染色技术检测脉络膜铺片中CNV形成情况，并观察CNV组织附近血管内皮细胞中SNAI1、MMP2和MMP9的表达及定位；采用实时荧光定量PCR法检测CNV组织中SNAI1、MMP2和MMP9 mRNA的表达变化。将培养的恒河猴脉络膜/视网膜内皮（RF/6A）细胞分为常氧组和缺氧组，分别在含体积分数5%CO2培养箱或含体积分数94%N2、5%CO2和体积分数1%O2培养箱中孵育24 h，分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot技术测定各组细胞中SNAI1、MMP2和MMP9在转录水平和蛋白水平的表达变化。用小干扰SNAI1（siSNAI1）转染RF/6A细胞，采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测细胞中MMP2和MMP9在转录和蛋白水平的表达变化，并采用Transwell小室法检测血管内皮细胞的迁移数目。结果造模后7 d小鼠脉络膜铺片中可见CD31阳性和SNAI1阳性荧光染色细胞及双阳性细胞；模型组小鼠RPE－脉络膜－巩膜复合体中SNAI1 mRNA和MMP2 mRNA相对表达量分别为1.291±0.060和1.610±0.424，均明显高于对照组的0.759±0.074和0.772±0.080，差异均有统计学意义（P＝0.001、0.044），模型组小鼠RPE－脉络膜－巩膜复合体中MMP9 mRNA升高，但与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05），且MMP2 mRNA表达量高于MMP9 mRNA，差异有统计学意义（P〈0.01）。缺氧组RF/6A细胞中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、SNAI1和MMP2 mRNA及其蛋白的相对表达量均明显高于常氧组，差异均有统计学意义（均P〈0.05），各组间MMP9 mRNA相对表达量的差异无统计学意义（P〉0.05）。缺氧＋siSNAI1组RF/6A细胞中MMP2 mRNA相对表达量为0.217±0.036，明显低于单纯缺氧组的0.818±0.105；缺氧＋siSNAI1组RF/6A细胞中MMP2蛋白相对表达量为0.236±0.009，明显低于单纯缺氧组的1.043±0.120，差异均有统计学意义（P＝0.002、0.003）。siSNAI1组血管内皮细胞迁移数目为（254.60±71.31）/视野，明显少于正常对照组的（534.10±96.21）/视野，差异有统计学意义（P＝0.029）。结论CNV局部的缺氧环境可能通过上调血管内皮细胞中SNAI1的表达而激活MMP2，促进血管内皮细胞迁移，从而参与CNV生成；缺氧条件下SNAI1的下调可抑制上述过程。
关键词
脉络膜新生血管
基质金属蛋白酶
小干扰RNA
转录因子SNAⅡ
血管内皮细胞
动物模型
缺氧
Keywords
Choroidal neovascularization
Matrix metalloproteinase
Small interfering RNA
Transcriptional factor SNAI1
Vascular endothelial cells
Disease model, C57 mice
Hypoxia
分类号
R77 [医药卫生—眼科]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
缺氧条件下SNAⅡ激活基质金属蛋白酶对脉络膜新生血管生成的促进作用
孙嘉星
窦国睿
常天芳
李曼红
杨子岩
晏贤春
刘瑗
韩骅
王雨生
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
10
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