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新型全人源LAG-3单克隆抗体LBL-007联合PD-1抗体通过NF-κB信号通路抑制肿瘤细胞增殖和侵袭迁移
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作者 周慧男 刘剑飞 +2 位作者 吴成林 钦可为 周丽君 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第5期398-405,共8页
目的探究新型全人源淋巴细胞激活基因3(LAG-3)单克隆抗体LBL-007与程序性死亡蛋白1(PD-1)抗体对肿瘤细胞侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法将活化的人淋巴细胞系Jurkat细胞与肿瘤细胞系A549、MGC803细胞共培养,并加入同型对照抗体人源... 目的探究新型全人源淋巴细胞激活基因3(LAG-3)单克隆抗体LBL-007与程序性死亡蛋白1(PD-1)抗体对肿瘤细胞侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法将活化的人淋巴细胞系Jurkat细胞与肿瘤细胞系A549、MGC803细胞共培养,并加入同型对照抗体人源IgG、LBL-007、抗PD-1抗体BE0188以及核因子κB(NF-κB)信号通路激动剂肿瘤坏死因子α(TNF-α)进行干预。通过克隆形成实验检测各组肿瘤细胞增殖能力;Transwell^(TM)实验检测共培养后肿瘤细胞侵袭能力;划痕愈合实验检测肿瘤细胞迁移能力;Western blot法检测肿瘤细胞NF-κB信号通路相关蛋白κB抑制因子激酶α(IKKα)、磷酸化的IKKα(p-IKKα)、核因子κB亚基(p65)、磷酸化的核因子κB亚基(p-p65)、人核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化的IκBα(p-IκBα)和基质金属蛋白酶9(MMP9)、MMP2表达水平。结果与对照组和IgG同型对照组相比,LBL-007和BE0188显著降低共培养体系中肿瘤细胞增殖和侵袭迁移能力以及p-IKKα、p-p65、p-IKBα蛋白磷酸化水平和MMP9、MMP2表达水平,联合使用能增强抑制效果。NF-κB信号通路激动剂TNF-α处理可逆转LBL-007和BE0188对肿瘤细胞NF-κB信号通路和细胞的增殖和侵袭迁移能力的抑制作用。结论LBL-007和抗PD-1抗体通过阻断NF-κB信号通路联合抑制A549和MGC803肿瘤细胞侵袭迁移和增殖能力。 展开更多
关键词 免疫检查点 淋巴细胞激活基因3(LAG-3) 核因子κB(NF-κB) 侵袭迁移
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创伤弧菌经呼吸道感染小鼠早期靶器官损伤及炎性因子谱分析 被引量:1
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作者 张磊 刘剑飞 +1 位作者 马慧 周丽君 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1378-1386,共9页
目的观察创伤弧菌(V.vulnificus)经呼吸道感染小鼠模型早期靶器官损伤情况及炎性因子谱的变化,为相关防治策略的制订提供参考。方法24只8~10周龄健康雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组、低浓度感染组、中浓度感染组和高浓度感染组,每组6只... 目的观察创伤弧菌(V.vulnificus)经呼吸道感染小鼠模型早期靶器官损伤情况及炎性因子谱的变化,为相关防治策略的制订提供参考。方法24只8~10周龄健康雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组、低浓度感染组、中浓度感染组和高浓度感染组,每组6只。采用滴鼻法建立低、中、高浓度V.vulnificus感染小鼠模型。观察感染早期(0~12h)小鼠的生存、排便情况,毛发色泽,咳喘和精神状态等指标;取小鼠不同系统的重要器官进行HE染色观察病理表现,采用免疫组化染色法检测靶器官中白细胞介素(IL)-6、IL-10、γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化,采用小鼠炎性多因子检测试剂盒结合流式细胞术检测血清中致炎-抑炎因子谱的变化情况。结果V.vulnificus经呼吸道感染12h内即可引起小鼠生存、排便、毛发、呼吸道和精神状态改变。HE染色结果显示,不同浓度感染组小鼠回肠、肺、肝和脾均出现炎性细胞浸润、细胞坏死等损伤表现,且高浓度感染组损伤表现更严重。免疫组化染色结果显示,中、高浓度感染组小鼠回肠、肺、肝和脾中IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α的阳性表达率均明显高于对照组(P<0.05)。高通量多因子检测结合流式细胞术结果显示,与对照组比较,低、中、高浓度感染组TNF-α、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1表达水平明显增高(P<0.05),IL-27表达水平明显降低(P<0.05),中、高浓度感染组IL-1β、IL-6、IL-17A、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达水平明显增高(P<0.05),高浓度感染组IL-1α、IL-23、IL-12p70、IFN-γ表达水平明显增高(P<0.05)。结论经呼吸道感染V.vulnificus早期小鼠病情进展迅速,肺、肠、肝和脾是主要靶器官,同时血清中多种炎性因子分泌增多,可引起机体严重的炎性反应。 展开更多
关键词 创伤弧菌 炎性因子 呼吸道 感染 动物模型
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抗淋巴细胞激活基因3(LAG-3)全人源抗体的制备 被引量:4
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作者 陈秀秀 于晓杰 +3 位作者 刘剑飞 吴成林 钦可为 周丽君 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期451-456,共6页
目的淋巴细胞激活基因3(LAG-3)是一个极具潜力的肿瘤治疗靶点。本研究旨在从大容量全人源噬菌体抗体库中筛选抗LAG-3的单链抗体(scFv),将其转化为完整的全人源抗体。方法从全人源噬菌体抗体库,筛选抗LAG-3全人源噬菌体scFv,ELISA鉴定噬... 目的淋巴细胞激活基因3(LAG-3)是一个极具潜力的肿瘤治疗靶点。本研究旨在从大容量全人源噬菌体抗体库中筛选抗LAG-3的单链抗体(scFv),将其转化为完整的全人源抗体。方法从全人源噬菌体抗体库,筛选抗LAG-3全人源噬菌体scFv,ELISA鉴定噬菌体scFv的特异性,采用表面等离子共振技术(SPR)测定其亲和力,再通过真核表达系统获得抗LAG-3全人源完整抗体。结果通过3轮筛选富集,获得了4个具有特异结合活性的scFv。亲和力测定最高的达到3.48×10-10。再通过构建完整的抗LAG-3全人源抗体表达载体,经真核细胞表达、纯化后,获得了3株特异性抗LAG-3全人源抗体。结论利用大容量全人源噬菌体抗体库,成功筛选并表达出3种高亲和力和特异性的抗LAG-3全人源抗体。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 淋巴细胞激活基因3(LAG-3) 人源抗体
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抗体治疗疼痛的研究进展 被引量:4
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作者 张常建 陈秀秀 周丽君 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期130-133,共4页
疼痛严重危害着病人身心健康。目前临床上缓解疼痛的手段以药物治疗为主,然而现有的镇痛药物普遍存在安全性和耐受性问题。因此,探索针对疼痛的新型治疗药物是目前该领域的一个重要方向。近年来,抗体类药物已成为镇痛药物领域中最有活... 疼痛严重危害着病人身心健康。目前临床上缓解疼痛的手段以药物治疗为主,然而现有的镇痛药物普遍存在安全性和耐受性问题。因此,探索针对疼痛的新型治疗药物是目前该领域的一个重要方向。近年来,抗体类药物已成为镇痛药物领域中最有活力和前景的一个分支,许多靶点已被发现并应用于抗体类药物研发。本文就这些靶点及其临床研究现状等进行综述,旨在为针对疼痛的抗体类药物研发及临床治疗提供参考。 展开更多
关键词 疼痛 抗体治疗
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新型全人源LAG3单克隆抗体的体外抗肿瘤作用及其机制初探 被引量:2
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作者 张陈 刘平 +4 位作者 于晓杰 刘剑飞 钦可为 吴成林 周丽君 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期419-425,共7页
目的:构建LAG3+Jurkat细胞与肿瘤细胞的共培养模型,探讨新型全人源LAG3单克隆抗体(LAG3 mAb)的体外抗肿瘤作用及其可能的机制。方法:使用PHA刺激Jurkat细胞模拟TIL,通过ELISA法检测Jurkat细胞的IL-2分泌水平来评估细胞活化程度,通过FCM... 目的:构建LAG3+Jurkat细胞与肿瘤细胞的共培养模型,探讨新型全人源LAG3单克隆抗体(LAG3 mAb)的体外抗肿瘤作用及其可能的机制。方法:使用PHA刺激Jurkat细胞模拟TIL,通过ELISA法检测Jurkat细胞的IL-2分泌水平来评估细胞活化程度,通过FCM、免疫荧光法和WB法检测活化后Jurkat细胞的LAG3表达水平及肿瘤细胞(胃癌HGC-27、MGC-803细胞和NSCLC A549细胞)中LAG3配体MHCⅡ类分子(MHC-Ⅱ)的表达水平。构建活化的LAG3+Jurkat细胞与肿瘤细胞的共培养模型,CCK-8法评估在不同效靶比时LAG3+Jurkat细胞杀伤肿瘤细胞的效率及抗LAG3 mAb对杀伤效率的影响,ELISA法检测共培养体系上清液中细胞因子IL-2、IL-10和TNF-α的分泌水平。结果:2μg/mL PHA刺激48 h对Jurkat细胞无明显毒性(P>0.05),且能够活化Jurkat细胞使其分泌IL-2(P<0.01)并诱导LAG3表达(P<0.01),获得活化的LAG3+Jurkat细胞。MGC-803和A549细胞显著表达MHC-Ⅱ(P<0.01),但HGC-27细胞不表达(P>0.05)。选用效靶比10∶1构建LAG3+Jurkat细胞与肿瘤细胞的共培养模型,抗LAG3 mAb能够有效增强Jurkat细胞对两种MHC-Ⅱ+肿瘤细胞的杀伤作用(均P<0.05),并且MHC-Ⅱ+靶细胞组共培养上清液中细胞因子IL-2、IL-10和TNF-α水平均显著升高(均P<0.01)。结论:成功构建LAG3+Jurkat细胞与肿瘤细胞体外共培养模型,抗LAG3 mAb可能通过阻断LAG3/MHC-Ⅱ相互作用提高LAG3+Jurkat细胞对肿瘤细胞MGC-803和A549的杀伤作用,并且该作用可能与共培养体系中细胞因子IL-2、IL-10和TNF-α分泌水平升高有关。 展开更多
关键词 肿瘤 T细胞 JURKAT细胞 淋巴细胞活化基因3 全人源单克隆抗体 MHCⅡ类分子 细胞因子
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