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高糖通过miR-125b对小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的调控作用
被引量：
3
1
作者
沈鑫
刘洋
+3 位作者
陈泓宇
张洁
程庆砾
杨光
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第4期847-857,共11页
目的:以小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7为研究对象,体外探讨高糖微环境对小鼠巨噬细胞极化的影响,并阐明miR-125b的调控作用。方法:RAW264.7细胞分为正常对照(NG)组、正糖抑制(NG+miR-125b inhibitor)组、高糖刺激(HG)组和高糖抑制(HG+miR-...
目的:以小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7为研究对象,体外探讨高糖微环境对小鼠巨噬细胞极化的影响,并阐明miR-125b的调控作用。方法:RAW264.7细胞分为正常对照(NG)组、正糖抑制(NG+miR-125b inhibitor)组、高糖刺激(HG)组和高糖抑制(HG+miR-125b inhibitor)组,进行相应的干预处理。各组细胞体外培养72 h后留取细胞及上清,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中M1/M2极化相关因子mRNA和miR-125b表达水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞上清中M1/M2极化相关细胞因子水平,流式细胞术检测M1/M2极化表面标记物CD86(M1标记)和CD206(M2标记)阳性表达率。通过miR-125b inhibitor沉默细胞中miR-125b的表达,进一步采用RT-qPCR和Western blotting法检测各组细胞中M1/M2极化相关因子干扰素调节因子4(IRF4)、干扰素调节因子5(IRF5)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)mRNA及蛋白水平表达。结果:高糖处理72 h后,与NG组比较,HG组细胞中白细胞介素10(IL-10)mRNA表达水平和细胞上清中IL-10水平明显降低(P<0.01),白细胞介素1β(IL-1β)和Toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平明显升高(P<0.01),细胞上清中IL-1β、IL-12和IL-6水平明显升高(P<0.01)。与NG组比较,HG组细胞中CD86阳性表达率明显升高(P<0.05),CD206阳性表达率明显降低(P<0.05),miR-125b表达水平明显升高(P<0.01)。采用miR-125b inhibitor沉默miR-125b表达后,分别与NG和HG组比较,NG+miR-125b inhibitor组和HG+miR-125b inhibitor组细胞中miR-125b表达水平均明显降低(P<0.01),细胞中IL-10 mRNA表达水平和细胞上清中IL-10水平升高(P<0.01),细胞中IL-1β和TLR4 mRNA表达水平及细胞上清中IL-12、IL-6和IL-1β水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞中CD86阳性表达率降低(P<0.05或P<0.01),CD206阳性表达率升高(P<0.01)。与NG组比较,HG组细胞中IRF4和PPAR mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),IRF5 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01);沉默miR-125b表达后,与NG组比较,NG+miR-125b inhibitor组细胞中IRF4和PPAR mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),IRF5 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与HG组比较,HG+miR-125b inhibitor组细胞中IR4和PPAR mRNA及蛋白水平明显降低(P<0.01),IRF5 mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。结论:高糖刺激可以诱导巨噬细胞向促炎M1表型极化,同时miR-125b表达水平明显升高,沉默miR-125b表达可部分逆转高糖刺激诱导的巨噬细胞向促炎M1表型的极化,该过程可能是通过上调IRF4和PPAR及下调IRF5实现的。
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关键词
糖尿病
高糖
微炎症
巨噬细胞
miR-125b
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职称材料
题名
高糖通过miR-125b对小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的调控作用
被引量：
3
1
作者
沈鑫
刘洋
陈泓宇
张洁
程庆砾
杨光
机构
解放军总医院第二医学中心肾脏病科国家老年医学研究中心
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第4期847-857,共11页
基金
国家自然科学基金青年基金项目(81600655)
北京市科技局自然科学基金青年基金项目(7214253)
解放军总医院二中心保健课题项目(NLBJ-2019006,ZXBJ2001)。
文摘
目的:以小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7为研究对象,体外探讨高糖微环境对小鼠巨噬细胞极化的影响,并阐明miR-125b的调控作用。方法:RAW264.7细胞分为正常对照(NG)组、正糖抑制(NG+miR-125b inhibitor)组、高糖刺激(HG)组和高糖抑制(HG+miR-125b inhibitor)组,进行相应的干预处理。各组细胞体外培养72 h后留取细胞及上清,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中M1/M2极化相关因子mRNA和miR-125b表达水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞上清中M1/M2极化相关细胞因子水平,流式细胞术检测M1/M2极化表面标记物CD86(M1标记)和CD206(M2标记)阳性表达率。通过miR-125b inhibitor沉默细胞中miR-125b的表达,进一步采用RT-qPCR和Western blotting法检测各组细胞中M1/M2极化相关因子干扰素调节因子4(IRF4)、干扰素调节因子5(IRF5)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)mRNA及蛋白水平表达。结果:高糖处理72 h后,与NG组比较,HG组细胞中白细胞介素10(IL-10)mRNA表达水平和细胞上清中IL-10水平明显降低(P<0.01),白细胞介素1β(IL-1β)和Toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平明显升高(P<0.01),细胞上清中IL-1β、IL-12和IL-6水平明显升高(P<0.01)。与NG组比较,HG组细胞中CD86阳性表达率明显升高(P<0.05),CD206阳性表达率明显降低(P<0.05),miR-125b表达水平明显升高(P<0.01)。采用miR-125b inhibitor沉默miR-125b表达后,分别与NG和HG组比较,NG+miR-125b inhibitor组和HG+miR-125b inhibitor组细胞中miR-125b表达水平均明显降低(P<0.01),细胞中IL-10 mRNA表达水平和细胞上清中IL-10水平升高(P<0.01),细胞中IL-1β和TLR4 mRNA表达水平及细胞上清中IL-12、IL-6和IL-1β水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞中CD86阳性表达率降低(P<0.05或P<0.01),CD206阳性表达率升高(P<0.01)。与NG组比较,HG组细胞中IRF4和PPAR mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),IRF5 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01);沉默miR-125b表达后,与NG组比较,NG+miR-125b inhibitor组细胞中IRF4和PPAR mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),IRF5 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与HG组比较,HG+miR-125b inhibitor组细胞中IR4和PPAR mRNA及蛋白水平明显降低(P<0.01),IRF5 mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。结论:高糖刺激可以诱导巨噬细胞向促炎M1表型极化,同时miR-125b表达水平明显升高,沉默miR-125b表达可部分逆转高糖刺激诱导的巨噬细胞向促炎M1表型的极化,该过程可能是通过上调IRF4和PPAR及下调IRF5实现的。
关键词
糖尿病
高糖
微炎症
巨噬细胞
miR-125b
Keywords
Diabetes mellitus
High glucose
Microinflammation
Macrophages
miR-125b
分类号
R587.1 [医药卫生—内分泌]
Q813 [生物学—生物工程]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
高糖通过miR-125b对小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的调控作用
沈鑫
刘洋
陈泓宇
张洁
程庆砾
杨光
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022
3
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