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题名小鼠精子蛋白Sp17的克隆、表达及其免疫原性研究
被引量：3
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作者
张巧玉
梁志清
李玉艳
李晋涛
史常旭
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机构
第三军医大学西南医院妇产科
解放军总医院第二临床部妇产科
第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所
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出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第24期2281-2284,共4页
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基金
国家自然科学基金(30000183)~~
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文摘
目的获得鼠精子蛋白Sp17基因,构建重组表达载体并实现其在大肠杆菌中的高效表达,为制备免疫性避孕疫苗奠定基础。方法提取BALB/c小鼠睾丸组织总RNA,通过RT-PCR扩增Sp17基因全长cDNA序列,并将其克隆至pMD 18-T质粒载体中,再经HindⅢ/XhoⅠ双酶切将Sp17基因片段亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot对表达产物进行初步鉴定,并检测重组蛋白Sp17免疫小鼠后血清特异抗体滴度。结果获得了小鼠Sp17的全长cDNA,成功构建了重组原核表达载体pET/Sp17,在IPTG的诱导下实现了目的蛋白在大肠杆菌中的高效表达,免疫后小鼠血清中检测到特异性抗体。结论小鼠精子蛋白Sp17基因序列已被克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效、正确的表达,重组蛋白Sp17能够诱导产生特异性免疫反应,具有一定程度的免疫原性。
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关键词
小鼠
精子蛋白
克隆
原核表达
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Keywords
mouse
Sp17 protein
cloning
prokaryotic expression
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分类号
R321.1
[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R341
[医药卫生—基础医学]
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