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人羊水来源c-kit+与c-kit-间充质干细胞生物学特征及体外心肌诱导分化能力的比较
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作者 白静 王一茹 +3 位作者 刘丽凤 陈杰 苏绍萍 王禹 《中华老年多器官疾病杂志》 2012年第4期294-300,共7页
目的比较人羊水来源c-kit+与c-kit-间充质干细胞的生物学特征及体外心肌分化能力。方法通过常规产前诊断或自愿引产,以羊膜腔穿刺术获取14份孕中期羊水(15~31周),通过流式细胞仪分选c-kit+间充质干细胞,比较c—kit+干细胞与c-k... 目的比较人羊水来源c-kit+与c-kit-间充质干细胞的生物学特征及体外心肌分化能力。方法通过常规产前诊断或自愿引产,以羊膜腔穿刺术获取14份孕中期羊水(15~31周),通过流式细胞仪分选c-kit+间充质干细胞,比较c—kit+干细胞与c-kit-干细胞的细胞形态及生长曲线。流式细胞仪及免疫细胞化学分析对两种细胞进行表型鉴定,比较其体外向成骨、成脂及心肌样细胞诱导分化能力。RT-PCR和Westonblot检测相关基因及蛋白的表达。结果14份羊水标本中,有5份标本可以分选到c—kit+羊水干细胞,分布在孕16-22周,分选的细胞数量占贴壁细胞的(3.30±1.24)%。羊水干细胞以成纤维状为主,可以稳定传代,体外培养可增殖到50代以上。经过c—kit分选后,细胞呈均匀一致的长纤维状,排列规律。C-kit+及c-kit-羊水干细胞具有相似的生长曲线。两种细胞均具有间充质干细胞特征,表达间充质干细胞标记(CD29,CD44,CD73,CD90,CDl05),不表达造血细胞系标记(CD34,CD45),表达I类人类组织相容性抗原(HLA—ABC),不表达II类人类组织相容性抗原(HLA—DR)。Oct-4及SSEA-4胚胎干细胞标记在c-kit+干细胞的表达比率明显高于c.kit-干细胞。两种细胞在体外均可以向成脂细胞、成骨细胞分化。成脂细胞诱导后,可以看到细胞内脂滴聚集,油红0染色阳性。成骨细胞诱导后,可以看到钙盐沉积,VonKossa染色阳性。两种细胞分别与新生乳鼠心肌共培养,体外向心肌细胞诱导,c—kit+羊水干细胞可以检测到GATA-4,α-actin,Cx43和cTnT基因及蛋白的表达。而c-kit-干细胞在诱导后只表达GATA-4的基因及蛋白。结论羊水来源c—kit+及c—kit-干细胞均表达间充质干细胞表型特征,体外可以向成脂、成骨细胞分化。然而,c—kit+干细胞的心肌样细胞分化能力明显强于c—kit-干细胞,可能与c—kit+干细胞具有某些胚胎干细胞特征有关。 展开更多
关键词 c—kit 羊水 间充质干细胞 心肌 细胞分化
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