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重组腺病毒介导的血管内皮生长因子165在大鼠骨髓基质细胞中的表达
被引量：
1
1
作者
高全文
柳春明
+1 位作者
宋慧锋
柴家科
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期192-195,共4页
目的利用AdEasy腺病毒载体系统构建携带血管内皮生长因子165(VEGF165)的重组腺病毒(Ad-VEGF165),并观察Ad-VEGF165转染大鼠骨髓基质细胞(bMSCs)后VEGF165的表达情况。方法将PCR获取的VEGF165目的基因插入到pAdTrack-CMV中,构建腺病毒穿...
目的利用AdEasy腺病毒载体系统构建携带血管内皮生长因子165(VEGF165)的重组腺病毒(Ad-VEGF165),并观察Ad-VEGF165转染大鼠骨髓基质细胞(bMSCs)后VEGF165的表达情况。方法将PCR获取的VEGF165目的基因插入到pAdTrack-CMV中,构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-VEGF165,经PmeI酶切线性化后,采用电穿孔法转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183大肠杆菌感受态细胞中,挑选同源重组菌落。提取质粒并用PacI酶切鉴定。线性化重组质粒pAdEasy-VEGF165转染293T细胞,包装成重组腺病毒颗粒,并扩增收集重组腺病毒,测定病毒滴度。体外培养大鼠骨髓基质细胞,Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞,转染后在荧光显微镜下观察。转染的骨髓基质细胞采用RT-PCR和ELISA法检测VEGF165的表达水平。结果经酶切鉴定,基因测序及绿色荧光观察证实成功构建了携带VEGF165基因的重组腺病毒,并扩增出109pfu/ml的高滴度重组腺病毒。Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞后,RT-PCR证明转染的骨髓基质细胞内有VEGF165mRNA表达。ELISA检测发现转染组上清液中VEGF165蛋白分泌量明显高于对照组(P<0.01)。结论pAdEasy-VEGF165转染对骨髓基质细胞的增殖能力无明显影响,而且骨髓基质细胞能够表达并分泌VEGF165,为研究骨组织工程血管化局部基因治疗奠定了基础。
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关键词
腺病毒科
血管内皮生长因子类
骨髓基质细胞
基因疗法
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职称材料
过表达CC趋化因子受体7的C3H10 T1/2细胞具有更强的免疫抑制效应
2
作者
张颖杰
郭希民
+5 位作者
钱志勇
刘志佳
高钰
周林
李红
韩岩
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期873-878,共6页
目的研究过表达CC趋化因子受体7(CCR7)的C3H10 T1/2小鼠间充质干细胞系在小鼠皮肤移植模型中,是否具有比原始C3H10 T1/2细胞更强的免疫抑制作用。方法培养扩增稳定的小鼠C3H10 T1/2细胞,并利用慢病毒工具导入EGFP-CCR7基因;以C57BL/6小...
目的研究过表达CC趋化因子受体7(CCR7)的C3H10 T1/2小鼠间充质干细胞系在小鼠皮肤移植模型中,是否具有比原始C3H10 T1/2细胞更强的免疫抑制作用。方法培养扩增稳定的小鼠C3H10 T1/2细胞,并利用慢病毒工具导入EGFP-CCR7基因;以C57BL/6小鼠为供体获取皮片,以BALB/c小鼠为受体建立小鼠同种异系皮肤移植模型;实验动物分4组:CCR7+C3H10 T1/2细胞组、C3H10 T1/2组、同种异系对照组和同系对照组(受者小鼠移植同系小鼠皮片),分别于移植模型成功当天,经尾静脉注射1×106C3H10 T1/2细胞、1×106CCR7+C3H10 T1/2细胞、等体积生理盐水(对照组);观察皮片移植后的存活情况,并于皮片移植第12天,测定小鼠脾淋巴细胞中Th17细胞与调节性T细胞(Treg)的比例,HE染色观察皮片病理变化。结果受者小鼠皮片移植后12 d,外观、组织病理形态观察以及流式细胞术检测结果表明,CCR7+C3H10 T1/2细胞与C3H10 T1/2细胞的皮片存活情况均优于同种异系对照组;CCR7+C3H10 T1/2细胞皮片移植后存活情况优于C3H10 T1/2细胞组,且移植免疫反应程度轻于C3H10 T1/2细胞组。结论 CCR7+C3H10 T1/2细胞相对于正常的C3H10 T1/2细胞,拥有更好的免疫抑制效应,可有效的降低移植免疫炎性反应,改善移植物的生存状态。
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关键词
C3H10
T1/2细胞系
间充质干细胞
CC趋化因子受体7(CCR7)
皮肤移植
免疫耐受
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职称材料
题名
重组腺病毒介导的血管内皮生长因子165在大鼠骨髓基质细胞中的表达
被引量：
1
1
作者
高全文
柳春明
宋慧锋
柴家科
机构
解放军总医院
第一附属
医院
烧伤
整形
科
解放军总医院整形外科
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期192-195,共4页
文摘
目的利用AdEasy腺病毒载体系统构建携带血管内皮生长因子165(VEGF165)的重组腺病毒(Ad-VEGF165),并观察Ad-VEGF165转染大鼠骨髓基质细胞(bMSCs)后VEGF165的表达情况。方法将PCR获取的VEGF165目的基因插入到pAdTrack-CMV中,构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-VEGF165,经PmeI酶切线性化后,采用电穿孔法转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183大肠杆菌感受态细胞中,挑选同源重组菌落。提取质粒并用PacI酶切鉴定。线性化重组质粒pAdEasy-VEGF165转染293T细胞,包装成重组腺病毒颗粒,并扩增收集重组腺病毒,测定病毒滴度。体外培养大鼠骨髓基质细胞,Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞,转染后在荧光显微镜下观察。转染的骨髓基质细胞采用RT-PCR和ELISA法检测VEGF165的表达水平。结果经酶切鉴定,基因测序及绿色荧光观察证实成功构建了携带VEGF165基因的重组腺病毒,并扩增出109pfu/ml的高滴度重组腺病毒。Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞后,RT-PCR证明转染的骨髓基质细胞内有VEGF165mRNA表达。ELISA检测发现转染组上清液中VEGF165蛋白分泌量明显高于对照组(P<0.01)。结论pAdEasy-VEGF165转染对骨髓基质细胞的增殖能力无明显影响,而且骨髓基质细胞能够表达并分泌VEGF165,为研究骨组织工程血管化局部基因治疗奠定了基础。
关键词
腺病毒科
血管内皮生长因子类
骨髓基质细胞
基因疗法
Keywords
adenoviridae
vascular endothelial growth factors
bone marrow stromal ceils
gene therapy
分类号
R349.64 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
过表达CC趋化因子受体7的C3H10 T1/2细胞具有更强的免疫抑制效应
2
作者
张颖杰
郭希民
钱志勇
刘志佳
高钰
周林
李红
韩岩
机构
解放军总医院
整形
修复
外科
军事医学科学院
解放军
第
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期873-878,共6页
文摘
目的研究过表达CC趋化因子受体7(CCR7)的C3H10 T1/2小鼠间充质干细胞系在小鼠皮肤移植模型中,是否具有比原始C3H10 T1/2细胞更强的免疫抑制作用。方法培养扩增稳定的小鼠C3H10 T1/2细胞,并利用慢病毒工具导入EGFP-CCR7基因;以C57BL/6小鼠为供体获取皮片,以BALB/c小鼠为受体建立小鼠同种异系皮肤移植模型;实验动物分4组:CCR7+C3H10 T1/2细胞组、C3H10 T1/2组、同种异系对照组和同系对照组(受者小鼠移植同系小鼠皮片),分别于移植模型成功当天,经尾静脉注射1×106C3H10 T1/2细胞、1×106CCR7+C3H10 T1/2细胞、等体积生理盐水(对照组);观察皮片移植后的存活情况,并于皮片移植第12天,测定小鼠脾淋巴细胞中Th17细胞与调节性T细胞(Treg)的比例,HE染色观察皮片病理变化。结果受者小鼠皮片移植后12 d,外观、组织病理形态观察以及流式细胞术检测结果表明,CCR7+C3H10 T1/2细胞与C3H10 T1/2细胞的皮片存活情况均优于同种异系对照组;CCR7+C3H10 T1/2细胞皮片移植后存活情况优于C3H10 T1/2细胞组,且移植免疫反应程度轻于C3H10 T1/2细胞组。结论 CCR7+C3H10 T1/2细胞相对于正常的C3H10 T1/2细胞,拥有更好的免疫抑制效应,可有效的降低移植免疫炎性反应,改善移植物的生存状态。
关键词
C3H10
T1/2细胞系
间充质干细胞
CC趋化因子受体7(CCR7)
皮肤移植
免疫耐受
Keywords
CSH10 T1/2
mesenchymal stem cell
chemoldne （C-C motif） receptor 7 （CCR7）
skin graft
immune tolerance
分类号
R392.4 [医药卫生—免疫学]
R318.06 [医药卫生—生物医学工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组腺病毒介导的血管内皮生长因子165在大鼠骨髓基质细胞中的表达
高全文
柳春明
宋慧锋
柴家科
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
过表达CC趋化因子受体7的C3H10 T1/2细胞具有更强的免疫抑制效应
张颖杰
郭希民
钱志勇
刘志佳
高钰
周林
李红
韩岩
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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