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人GST-Cdc25C融合蛋白的原核表达、纯化及功能初步检测
被引量：
5
1
作者
范忠义
徐小洁
+5 位作者
曹佳
康磊
韩白玉
蒋凯
叶棋浓
杜楠
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期251-254,共4页
目的:构建人Cdc25C基因原核表达载体,获得纯化的GST-Cdc25C融合蛋白,并对其功能进行初步检测。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增Cdc25C基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重组质粒转化大肠杆菌Ros-sate表达后,用GST-Sepharose 4B珠...
目的:构建人Cdc25C基因原核表达载体,获得纯化的GST-Cdc25C融合蛋白,并对其功能进行初步检测。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增Cdc25C基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重组质粒转化大肠杆菌Ros-sate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot方法检测融合蛋白表达,通过GSTpull-down技术检测纯化蛋白与已知结合蛋白Chk2的相互作用。结果:构建得到Cdc25C基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;在Rossate菌中诱导表达出相对分子质量(Mr)约为80 000的目的蛋白,经SDS-PAGE和Western blot检测,融合蛋白成功表达,并纯化得到GST-Cdc25C融合蛋白,GST pull-down检测证实GST-Cdc25C蛋白可以和已知相互作用蛋白Chk2相互作用。结论:成功克隆Cdc25C基因,并获得了活性良好的GST-Cdc25C蛋白,为进一步研究细胞周期蛋白调控机制奠定了实验基础。
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关键词
人Cdc25C基因
原核表达
纯化
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职称材料
题名
人GST-Cdc25C融合蛋白的原核表达、纯化及功能初步检测
被引量：
5
1
作者
范忠义
徐小洁
曹佳
康磊
韩白玉
蒋凯
叶棋浓
杜楠
机构
解放军总医院军医进修学院第一附属医院肿瘤科
军事医学科
学院
生物工程研究所
北京大学
第一
医院
核医学科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期251-254,共4页
基金
卫生部医药卫生科技发展基金资助项目(W2011BX055)
国家自然科学基金资助项目(31100604)
+1 种基金
国家自然科学基金资助项目(81101065)
高等学校博士学科点新教师专项科研基金资助项目(20110001120043)
文摘
目的:构建人Cdc25C基因原核表达载体,获得纯化的GST-Cdc25C融合蛋白,并对其功能进行初步检测。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增Cdc25C基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重组质粒转化大肠杆菌Ros-sate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot方法检测融合蛋白表达,通过GSTpull-down技术检测纯化蛋白与已知结合蛋白Chk2的相互作用。结果:构建得到Cdc25C基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;在Rossate菌中诱导表达出相对分子质量(Mr)约为80 000的目的蛋白,经SDS-PAGE和Western blot检测,融合蛋白成功表达,并纯化得到GST-Cdc25C融合蛋白,GST pull-down检测证实GST-Cdc25C蛋白可以和已知相互作用蛋白Chk2相互作用。结论:成功克隆Cdc25C基因,并获得了活性良好的GST-Cdc25C蛋白,为进一步研究细胞周期蛋白调控机制奠定了实验基础。
关键词
人Cdc25C基因
原核表达
纯化
Keywords
GST-Cdc25C
prokaryotic expression
purification
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人GST-Cdc25C融合蛋白的原核表达、纯化及功能初步检测
范忠义
徐小洁
曹佳
康磊
韩白玉
蒋凯
叶棋浓
杜楠
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
5
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