超抗原SEB在同种异体细胞移植小鼠中诱导的免疫耐受及其特征 被引量：7

1

作者 陈钰 彭虹 +2 位作者 尉承泽 梁峰 孙岩峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期101-103,共3页

目的　　探讨超抗原葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）体内诱导的免疫耐受性及其特征。方法　采用ＭＨＣ不同的两种小鼠进行淋巴细胞移植。用流式细胞术和混合淋巴细胞培养技术，检测受体鼠Ｔ　细胞亚群的变化，供体鼠Ｈ－２Ｋｄ分子在受体鼠... 目的　　探讨超抗原葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）体内诱导的免疫耐受性及其特征。方法　采用ＭＨＣ不同的两种小鼠进行淋巴细胞移植。用流式细胞术和混合淋巴细胞培养技术，检测受体鼠Ｔ　细胞亚群的变化，供体鼠Ｈ－２Ｋｄ分子在受体鼠体内表达的阳性率与免疫应答性。结果（１）注射ＳＥＢ可选择性地降低ＣＤ４＋Ｔ细胞和ＣＤ４＋Ｔ／Ｈ－２Ｋｂ＋细胞的百分率，而不影响ＣＤ８＋Ｔ细胞的数量。在ＳＥＢ注射的２１　ｄ，抑制作用最强，其对ＣＤ４＋Ｔ细胞和ＣＤ４＋Ｔ／Ｈ－２Ｋｂ＋细胞的抑制率分别是６．２４％和２３．３８％。（２）在进行异源性ＭＨＣ淋巴细胞移植时注射ＳＥＢ，于移植细胞后２１　ｄ，　受体小鼠肝脏淋巴细胞上开始表达供体小鼠Ｈ－２Ｋｄ分子，至移植后４０　ｄ，表达率达到高峰７．９０％。与此同时，受体鼠外周淋巴细胞对供体鼠淋巴细胞的免疫应答能力也明显降低。结论ＳＥＢ能诱导小鼠产生免疫耐受，免疫耐受的形成与受体鼠体内ＣＤ４＋Ｔ细胞克隆的明显减少有关。 展开更多

关键词 超抗原 免疫耐受 细胞移植 同种异体移植 葡萄球菌肠毒素B

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超抗原SEB诱导的免疫耐受参与免疫赦免部位的应答反应 被引量：2

2

作者 何庆华 潘志强 +5 位作者 张文华 接英 武宇影 徐亮 彭虹 陈钰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期26-28,共3页

目的:探讨超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导的耐受性是否参与免疫赦免部位的应答反应。方法:以LEW大鼠作为受体,F344大鼠作为供体,进行角膜移植。将受体鼠随机分成5组,即在手术前7 d及移植后7 d,以球旁途径分别注射30μg/kg、60μg/kg、9... 目的:探讨超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导的耐受性是否参与免疫赦免部位的应答反应。方法:以LEW大鼠作为受体,F344大鼠作为供体,进行角膜移植。将受体鼠随机分成5组,即在手术前7 d及移植后7 d,以球旁途径分别注射30μg/kg、60μg/kg、90μg/kg和120μg/kg的SEB组和注射生理盐水的阴性对照组。阳性对照组分别为移植后注射糖皮质激素(GC)、FK506、环孢素A((CsA)和白介素-1受体拮抗剂(IL-1 ra)组。镜下观察移植后30 d内角膜的浑浊、水肿和新生血管,用抗排斥反应指数记录移植片存活天数。采用NK1.1-PE荧光抗体进行组织染色,观察移植后不同时间受体鼠角膜片的炎症细胞浸润和受体鼠眼局部NK细胞的变化。结果:注射120μg/kg SEB的大鼠移植片比生理盐水对照组的存活天数延长了22 d。与FK506、CsA、IL-1ra和GC组相比也明显延长。120μg SEB/kg受体鼠的移植片排斥反应指数为3.42±2.18,明显低于对照组6.58±3.15(P<0.01)。其中水肿指数和新生血管指数明显降低。组织染色结果显示,SEB注射后NK细胞数量增加。结论:注射SEB能降低大鼠角膜移植的排斥反应,提示SEB诱导的耐受性参与了免疫赦免部位的应答反应。 展开更多

关键词 超抗原SEB诱导 免疫耐受 免疫赦免部位 应答反应

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CD4^+ NK T细胞在超抗原SEB诱导大鼠高危角膜移植免疫耐受中的作用 被引量：2

3

作者 接英 潘志强 +2 位作者 陈钰 张文华 武宇影 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第4期289-294,共6页

目的研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B亚单位(SEB)治疗高危角膜移植免疫排斥反应与CD4+自然杀伤(NK)T细胞的相关性。方法Fisher 344大鼠21只作为供体,Lewis大鼠42只作为受体。缝线法诱导角膜新生血管,建立高危角膜移植动物模型。将受体... 目的研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B亚单位(SEB)治疗高危角膜移植免疫排斥反应与CD4+自然杀伤(NK)T细胞的相关性。方法Fisher 344大鼠21只作为供体,Lewis大鼠42只作为受体。缝线法诱导角膜新生血管,建立高危角膜移植动物模型。将受体大鼠随机分为3组,每组14只。SEB组在角膜移植术前腹腔内注射75μg/kgSEB 0.2 mL,每4日1次,共3次;SEB联合地塞米松组除按上述方法注射SEB外,在角膜移植术后每日结膜下注射5 g/L地塞米松0.1 mL,每日1次,共3次;生理盐水组按SEB组的方法腹腔内注射等体积生理盐水。术后观察植片混浊、水肿和新生血管指标并进行评分。术后第10天,每组取3只受体大鼠进行组织病理学和免疫学检测。结果SEB组植片平均存活时间为(12.50±1.41)d,较SEB联合地塞米松组(10.38±3.07)d和生理盐水组(7.30±0.67)d明显延长(P<0.05)。SEB组淋巴细胞的增生能力明显降低,脾脏和颌下淋巴结中的CD4+NK T细胞百分数明显升高。SEB联合地塞米松组脾脏和颌下淋巴结中的CD4+和CD8+细胞百分数均明显降低。SEB组房水和血清中IL-2质量浓度均明显降低,而IL-10质量浓度均明显升高。结论超抗原SEB能够明显延长大鼠高危角膜移植手术植片的存活时间,其作用机制与上调了CD4+NK T细胞有关,CD4+NK T细胞对于免疫耐受的形成有重要作用。 展开更多

关键词 角膜移植 超抗原葡萄球菌肠毒素B亚单位 NK T细胞

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免疫系统——一个开放的复杂巨系统 被引量：5

4

作者 陈钰 《复杂系统与复杂性科学》 EI CSCD 2004年第2期70-73,共4页

免疫系统是人体这个开放的复杂巨系统中的一个子系统 ,本身具有构成开放复杂巨系统的所有条件。用开放的复杂巨系统的理论和方法重新审视免疫系统会帮助我们提出无穷无尽的问题 ,这才是研究免疫学的有趣之处。免疫学是近代生物学中发展... 免疫系统是人体这个开放的复杂巨系统中的一个子系统 ,本身具有构成开放复杂巨系统的所有条件。用开放的复杂巨系统的理论和方法重新审视免疫系统会帮助我们提出无穷无尽的问题 ,这才是研究免疫学的有趣之处。免疫学是近代生物学中发展迅速的学科之一 ,与人体系统中其它子系统相同 ,是生命整体的一部分 ,和大脑同样具有识别能力 ,但区分“自己”与“非自己”的能力却不同 ;它给予人类的不仅是保护性还有损伤性。 4亿多年的进化 ,它留给我们的大部分仍是个谜。 展开更多

关键词 免疫系统 复杂系统 T细胞 人伦

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超抗原SEB诱导大鼠高危角膜移植免疫耐受淋巴细胞差异表达基因的研究

5

作者 接英 潘志强 +4 位作者 徐亮 陈钰 张文华 武宇影 彭虹 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2006年第4期371-374,共4页

目的应用基因芯片研究高危角膜移植中产生免疫耐受和发生排斥反应的受体大鼠淋巴细胞的差异基因。方法供体和受体分别为Fisher344和Lewis大鼠。受体大鼠随机分为2组,治疗组术前腹腔注射0·2ml SEB(75μg/kg),每次间隔4d,共3次。对... 目的应用基因芯片研究高危角膜移植中产生免疫耐受和发生排斥反应的受体大鼠淋巴细胞的差异基因。方法供体和受体分别为Fisher344和Lewis大鼠。受体大鼠随机分为2组,治疗组术前腹腔注射0·2ml SEB(75μg/kg),每次间隔4d,共3次。对照组注射生理盐水。缝线法建立高危角膜移植动物模型。术后研究受体植片存活时间、免疫状态和淋巴细胞差异基因。结果对照组植片平均存活时间为(7·30±0·67)d,治疗组为(12·50±1·41)d,(P<0·05)。治疗组淋巴细胞对ConA和供体淋巴细胞抗原的增生反应明显降低,DTH反应强度也明显降低。基因芯片显示两组淋巴细胞存在23个差异基因,与神经系统、肿瘤生长以及编码酶类有关。结论SEB可诱导高危角膜移植免疫耐受,相关淋巴细胞差异基因的作用需进一步研究。 展开更多

关键词 超抗原 免疫耐受 角膜移植 基因芯片 差异基因

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超抗原SEB活化耐受性NKT细胞亚群的研究 被引量：7

6

作者 陈钰 钟江 +4 位作者 徐健 陈中才 郭业磊 金婷 张继慧 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期943-946,共4页

目的:探讨超抗原SEB活化的效应细胞参与免疫耐受的NKT细胞亚群及分化特征。方法:采用C57BL/J小鼠脾细胞经SEB诱导,收集体外扩增10d的淋巴细胞为效应细胞,与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养3d,测定效应细胞对刺激... 目的:探讨超抗原SEB活化的效应细胞参与免疫耐受的NKT细胞亚群及分化特征。方法:采用C57BL/J小鼠脾细胞经SEB诱导,收集体外扩增10d的淋巴细胞为效应细胞,与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养3d,测定效应细胞对刺激剂的应答反应能力。在正常小鼠淋巴细胞与上述刺激剂反应的同时添加效应细胞,3d后测定效应细胞抑制正常淋巴细胞对刺激原的应答反应能力。用MTT染色方法记录细胞增殖的A值。以ConA活化的淋巴细胞做参照,用流式细胞术(FCM)解析了耐受性效应细胞中NKT细胞亚群并显示分化来源与功能的相关性。结果:与正常淋巴细胞对抗原应答反应能力相比,SEB活化的效应细胞对ConA、LPS和IL-2的应答反应能力明显降低,细胞生长的A值从正常组的0.80±0.04、0.60±0.03和0.55±0.07下降到0.60±0.05、0.30±0.05及0.27±0.04(P<0.01,n=3)。效应细胞抑制正常淋巴细胞对上述抗原的应答反应,尤其抑制ConA活化的T淋巴细胞的应答反应;A值分别由正常值降低到0.26±0.002、0.48±0.04及0.34±0.02(P<0.01,n=3)。效应细胞中CD4+NK1.1+、CD8+NK1.1+、TcRVβ8+/NK1.1+NKT细胞亚群显著增加(P<0.05和P<0.01,n=4)。ConA活化的淋巴细胞是T淋巴细胞并包括CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞。结论:超抗原SEB活化的耐受功能与CD4+NK1.1+、CD8+NK1.1+、TcRVβ8+NK1.1+NKT细胞亚群有关,它们由T细胞分化而来。CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞没有参与耐受性调节。 展开更多

关键词 NKT细胞亚群 超抗原 SEB 免疫耐受

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超抗原活化Th1细胞介导的对肿瘤细胞杀伤效应的研究 被引量：5

7

作者 陈钰 李琳 +1 位作者 尉承泽 周严恒 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第3期171-173,共3页

目的 :本文对超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)活化的Th1细胞介导的对肿瘤细胞杀伤作用进行了研究。方法 :人外周血淋巴细胞与SEB共同培养 ,用流式细胞术测定增殖细胞亚群 ;用酶联双夹心法测定IL 2 ,IL 4水平 ;用K5 6 2 ,HL 6 0肿瘤细胞和自... 目的 :本文对超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)活化的Th1细胞介导的对肿瘤细胞杀伤作用进行了研究。方法 :人外周血淋巴细胞与SEB共同培养 ,用流式细胞术测定增殖细胞亚群 ;用酶联双夹心法测定IL 2 ,IL 4水平 ;用K5 6 2 ,HL 6 0肿瘤细胞和自身淋巴细胞作为靶细胞测定效应细胞和细胞因子的杀伤活性。结果 :SEB共同培养 6d的淋巴细胞 ,CD4+T细胞由37.5 %增加到 48.5 % ;CD16 +淋巴细胞由 14.3%增加到 2 7.9% ;CD8+T细胞无明显增加。预先去除CD8+T细胞不影响SEB对CD4+T细胞的活化作用。结论 :SEB活化CD4+T细胞是Th1而不是Th2细胞。它们释放大量的IL 2而不是IL 4。活化的Th1细胞介导了效应细胞和细胞因子对肿瘤细胞的非特异性杀伤效应 。 展开更多

关键词 肿瘤 免疫治疗 超抗原葡萄球菌肠毒素B TH1细胞

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在小鼠异基因骨髓细胞移植中超抗原SEB诱导的耐受特征 被引量：5

8

作者 陈钰 潘志强 +1 位作者 彭虹 徐亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期544-547,共4页

目的: 研究在异基因骨髓细胞移植中葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导的耐受强度和细胞学特征.方法: 选用C57BL/J小鼠作为受体,BALB/c小鼠作为供体.所有受体小鼠在接受6×107骨髓细胞前均接受6.0Gy 60Coγ射线的照射,随机分成3组: 组1为只接... 目的: 研究在异基因骨髓细胞移植中葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导的耐受强度和细胞学特征.方法: 选用C57BL/J小鼠作为受体,BALB/c小鼠作为供体.所有受体小鼠在接受6×107骨髓细胞前均接受6.0Gy 60Coγ射线的照射,随机分成3组: 组1为只接受6.0Gy 60Coγ射线照射的对照组(照射对照组,RI);组2为照射后注射生理盐水(移植对照组,Tran.); 组3为照射后注射60 μg SEB(SEB组).180 d后由组2和组3实验鼠获得两组C57BL/L-BALB/c嵌合体小鼠.用流式细胞术分析移植后30～180d受体小鼠体内CD4+ T、 CD8+ T、 CD3+/NK1.1+ NKT淋巴细胞亚群的数量和MHC H-2Kb、 H-2Kd抗原表达的百分率,用MLR方法测定嵌合体小鼠淋巴细胞对ConA和异源性抗原的反应性.结果: (1)接受大剂量骨髓细胞移植后,注射SEB和注射生理盐水的两组小鼠均可存活180 d以上,SEB组小鼠呈现出BALB/c供体小鼠的颜色特征(白色);Tran.组小鼠呈现出其灰白色.(2)SEB组嵌合体小鼠对ConA的反应性明显低于RI组和Tran.组;对异源性抗原的应答高于Tran.组.(3)SEB组小鼠外周血中CD4+ T细胞的数量在移植后30～60 d明显下降,随后增加; CD8+T细胞的数量不变.CD3+/NK1.1+ NKT细胞的数量,从接受移植后30 d开始增加,随着时间的延长而递增,到180d达到5.71%.存活180 d的嵌合体小鼠,体内供体小鼠特有的MHC H-2Kd抗原的表达率高达80.95%,自体MHC H-2Kb抗原表达的百分率只占1.45%.(4)与SEB组相反,Tran.组小鼠CD8+ T细胞的数量持续下降; CD3+/NK1.1+NKT细胞的数量的增加只在移植后180 d上升达到5.07%.结论: 在异基因骨髓细胞移植中,SEB诱导的耐受性比单纯骨髓移植诱导的耐受性强.SEB诱导的耐受性与移植早期特异性CD4+ T细胞数量的减少和NKT细胞数的持续增加有关.反应性的降低表现为T细胞对ConA反应性的下降. 展开更多

关键词 超抗原 免疫耐受 NKT细胞

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超抗原SEB活化的NKT细胞亚群形态和分化途径的研究 被引量：4

9

作者 陈钰 郭业磊 钟江 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期596-599,共4页

目的:以NKT细胞形态和分化途径为焦点,研究超抗原SEB活化的NKT细胞亚群的特征。方法:C57BL/J小鼠脾细胞分别经SEB或者ConA诱导,收集体外扩增10d和5d的淋巴细胞以及获取正常黏附性巨噬细胞。用荧光抗体染色,流式细胞仪测定淋巴细胞和大... 目的:以NKT细胞形态和分化途径为焦点,研究超抗原SEB活化的NKT细胞亚群的特征。方法:C57BL/J小鼠脾细胞分别经SEB或者ConA诱导,收集体外扩增10d和5d的淋巴细胞以及获取正常黏附性巨噬细胞。用荧光抗体染色,流式细胞仪测定淋巴细胞和大淋巴细胞群表面CD69的表达、NKT细胞亚群百分数和不同NKT细胞亚群的分化途径。倒置显微镜400倍下比较大淋巴细胞的形态。结果:SEB活化的淋巴细胞和大淋巴细胞表面CD69分子表达由正常值的0.11%分别提高到55.00%和68.95%。大细胞群中CD8+和TCRVB8+NKT细胞亚群的百分数由原始的0.36%和0.81%分别提高到30.29%和31.48%。这些细胞位于流式细胞图的上部,是大体积细胞群。显微镜下显示SEB活化的大淋巴细胞体积不仅大于ConA活化的T淋巴细胞,而且比正常巨噬细胞大5倍以上,是非黏附性细胞。胞内质粒松散、胞质与核之比>1。SEB活化的CD8+和TCRVβ8+NKT细胞亚群均由T细胞直接分化而来。结论:SEB活化10d的NKT细胞亚群主要是CD8+NK1.1+和TCRVβ8+NK1.1+的NKT细胞。这些细胞是大体积淋巴细胞,应属于T细胞的亚群。 展开更多

关键词 NKT细胞亚群 超抗原 细胞形态 细胞分化

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体外活化CD8^+ NKT细胞的肿瘤杀伤作用 被引量：2

10

作者 郭业磊 陈钰 +1 位作者 钟江 张世仑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期947-949,共3页

目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的耐受调节性CD8+ NKT细胞对肿瘤细胞K562和A549的杀伤作用。方法:获取体外扩增0、10、20、30 d的耐受调节性效应细胞与K562和A549肿瘤细胞做混合淋巴细胞培养,MTT方法测定效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。... 目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的耐受调节性CD8+ NKT细胞对肿瘤细胞K562和A549的杀伤作用。方法:获取体外扩增0、10、20、30 d的耐受调节性效应细胞与K562和A549肿瘤细胞做混合淋巴细胞培养,MTT方法测定效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。经荧光抗体染色、流式细胞术(FCM)解析效应细胞表面CD69分子的表达率和NKT细胞亚群百分数。结果:在效靶比20∶1时,效应细胞杀伤K562和A549细胞的百分率分别达到75.4%和67.2%(P<0.05,n=3)。效应细胞的上清液未显示杀伤作用。效应细胞表面CD69分子的表达率随培养时间延长而增加,由0 d的0.11%增加到30 d的98.23%(P<0.01,n=3)。效应细胞中CD8+ NKT细胞亚群随扩增时间延长而增加,由正常值(0 d)的0.36%增加到30 d的41.59%(P<0.05,n=3)。结论:耐受调节性CD8+ NKT细胞在杀伤肿瘤细胞中起了重要作用。杀伤肿瘤细胞的作用机制是效应细胞的直接作用,与游离的细胞因子无关。 展开更多

关键词 CD8+ NKT细胞 超抗原 SEB 肿瘤免疫

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SEB诱导的CD4^+ T细胞无能、凋亡及MHC-I类分子表达下调 被引量：2

11

作者 梁峰 尉承泽 +1 位作者 陈钰 彭虹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期23-25,28,共4页

目的:探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素(SEB)体外诱导外周T细胞免疫耐受的作用机制。方法:采用SEB体外刺激C57BL/6J(B6)小鼠的脾细胞后,以MTT比色法检测脾细胞的增殖,并用PI染色后以流式细胞术(FCM)分析不同时间段处于S期、G0～G1期的细... 目的:探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素(SEB)体外诱导外周T细胞免疫耐受的作用机制。方法:采用SEB体外刺激C57BL/6J(B6)小鼠的脾细胞后,以MTT比色法检测脾细胞的增殖,并用PI染色后以流式细胞术(FCM)分析不同时间段处于S期、G0～G1期的细胞及无能T细胞的凋亡,测定T细胞亚群及MHC-I(H一2Kb)表达的变化。用琼脂糖凝胶电泳,观察不同时问段凋亡T细胞的DNA特征。结果:部分去除CD8+T细胞后,SEB可刺激B6小鼠脾细胞中CD4+T细胞大量增殖。在SEB刺激后第3天,CD4+T细胞中处于S期的比率最大,此后开始下降;而处于G0～G1期的CD4+T细胞变化则相反。在初次刺激后第3天,增殖的CD4+T细胞出现无能。FCM检测及用琼脂糖凝胶电泳检查DNA ladder证实,在第7天,无能CD4+ T细胞出现凋亡,且凋亡细胞的比率逐渐增多,不因加入抗CD3抗体或ConA而逆转。在SEB刺激后,CD4+ T细胞表面MHC-I类分子(H-2Kb)的表达,随细胞无能的出现而明显下调。结论:SEB诱导的T细胞免疫耐受,可能与CD4+ T细胞的无能、凋亡及细胞表面分子MHC-I的表达下凋有关。 展开更多

关键词 SEB CD4^+ T细胞 细胞凋亡 MHC-I类分子表达

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CD8^+ T调节细胞的研究进展 被引量：4

12

作者 郭业磊 陈钰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期762-763,共2页

关键词 CD8^+T调节细胞 FOXP3 免疫耐受

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一种新的淋巴细胞类型──NKT细胞 被引量：2

13

作者 陈钰 毛远丽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期301-303,共3页

关键词 NKT细胞 免疫调节 T细胞 表面标志特征

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iNKT细胞多样性调节机制及其在疾病中的作用 被引量：1

14

作者 陈钰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期84-86,共3页

关键词 INKT细胞 肿瘤 糖尿病 免疫性疾病

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耐受性CD8^+ NKT细胞体外增殖能力的鉴定

15

作者 郭业磊 陈钰 +1 位作者 钟江 张世仑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期170-172,共3页

目的:利用CFSE标记细胞,流式细胞术(FCM)检测法,解析超抗原SEB活化的耐受性CD8+ NKT细胞在体外增殖的情况。方法:利用CFSE标记新鲜分离的C57BL/J鼠脾细胞,分别与ConA和LPS共同培养3d,收集细胞进行荧光染色并用FCM解析细胞表面CD69分子... 目的:利用CFSE标记细胞,流式细胞术(FCM)检测法,解析超抗原SEB活化的耐受性CD8+ NKT细胞在体外增殖的情况。方法:利用CFSE标记新鲜分离的C57BL/J鼠脾细胞,分别与ConA和LPS共同培养3d,收集细胞进行荧光染色并用FCM解析细胞表面CD69分子的表达率和增殖能力。CFSE标记的鼠脾细胞与SEB共培养5d和10d后,荧光染色并用FCM解析细胞表面CD69的百分数和增殖能力。SEB活化的第10天细胞经CFSE标记后在IL-2的协同作用下继续培养10d,荧光染色,FCM解析这群细胞的增殖能力、活性分子CD69的表达率和NKT细胞亚群的变化情况。结果:ConA、LPS和SEB三者均可以刺激小鼠脾细胞增殖。ConA和LPS在3d内可以使细胞增殖3代,且CD69的表达率为74.19%和41.56%;SEB在5d和10d内分别可以使细胞增殖5代和7代,细胞表面CD69的表达率为32.09%和48.66%。SEB活化的10d细胞可以在IL-2的协同下继续传代培养10d,可以增殖7代;这群细胞中CD8+ NKT细胞亚群,由原始的0.36%增加到38.58%;细胞表面CD69分子由正常值的0.11%提高到83.74%。结论:超抗原SEB活化的CD8+ NKT细胞可以在体外进行增殖培养,且这些细胞是活性化的细胞。利用CFSE标记细胞,FCM可以检测耐受性CD8+ NKT细胞在体外的增殖水平。 展开更多

关键词 CD8+ NKT细胞 超抗原 SEB 流式细胞术 CFSE

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耐受调节性CD8^+NKT细胞体外稳定性的研究

16

作者 郭业磊 陈钰 +1 位作者 钟江 张世仑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期852-855,共4页

目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的CD8+NKT细胞耐受调节功能的稳定性。方法:超抗原SEB活化并体外扩增的10 d、20 d、30 d和冻存效应细胞被用于本研究。以正常C57BL/J鼠脾细胞为对照,将各个效应细胞与刺激剂刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)共... 目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的CD8+NKT细胞耐受调节功能的稳定性。方法:超抗原SEB活化并体外扩增的10 d、20 d、30 d和冻存效应细胞被用于本研究。以正常C57BL/J鼠脾细胞为对照,将各个效应细胞与刺激剂刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)共同培养72 h,测定效应细胞对刺激剂的应答反应能力。在正常小鼠淋巴细胞与上述刺激剂反应的同时添加各效应细胞,72 h后测定效应细胞抑制正常淋巴细胞对刺激剂的应答反应能力。体外扩增和冻存的效应细胞与异源鼠脾细胞做混合淋巴细胞培养,MTT法测定细胞的增殖情况。效应细胞用荧光抗体染色,用流式细胞术(FCM)解析NKT细胞亚群。结果:与正常淋巴细胞对刺激剂的应答反应能力相比,体外扩增10 d、20 d、30 d和冻存效应细胞对ConA或LPS的应答反应能力明显降低,细胞增殖的A值分别由正常值0.67和0.61分别下降至0.30和0.31,0.28和0.20,0.26和0.24,以及0.22和0.23(P<0.05,n=3)。效应细胞抑制正常淋巴细胞对上述刺激剂ConA或LPS的应答反应,分别由正常值0.67和0.61下降至0.33和0.39,0.30和0.43,0.36和0.43,以及0.26和0.29(P<0.05,n=3)。效应细胞与异源鼠脾细胞反应与对照组相比明显的降低,分别由正常值0.70下降至20 d的0.42,30 d的0.42以及冻存效应细胞的0.54(P<0.05,n=3)。在这群效应细胞中,主要是CD8+NKT细胞,由原始的0.36%增加到41.59%(P<0.05,n=3)。结论:耐受调节性CD8+NKT细胞可以在体外进行传代培养,并且这些传代培养细胞的耐受调节功能依然存在。 展开更多

关键词 CD8+NKT细胞 免疫耐受 超抗原 SEB

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