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急性白血病细胞中ID4基因甲基化的PCR定量检测系统的建立及其特异性和敏感性 被引量:10
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作者 刘洋 康慧媛 +3 位作者 王莉莉 卢学春 朱宏丽 于力 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期269-274,共6页
ID4基因启动子区甲基化发生率在急性白血病中极高,甲基化程度与急性白血病关系密切。因缺少合适的研究方法,其具体的甲基化量化水平与疾病的关系,人们一直缺乏认识。本研究旨在建立ID4甲基化定量PCR体系,同时验证该方法的特异性及敏感性... ID4基因启动子区甲基化发生率在急性白血病中极高,甲基化程度与急性白血病关系密切。因缺少合适的研究方法,其具体的甲基化量化水平与疾病的关系,人们一直缺乏认识。本研究旨在建立ID4甲基化定量PCR体系,同时验证该方法的特异性及敏感性,并初步尝试在初治急性白血病骨髓样本中评估ID4的甲基化水平。首先构建质粒并建立体系标准曲线,分别使用MSP和定量MSP对细胞系样本进行检测,以传统MSP的结果为对照,验证新方法的特异性;按不同比例将甲基化阴性和阳性细胞混合,用甲基化定量PCR扩增验证新方法敏感性。结果表明,本研究成功建立了符合绝对定量要求的标准曲线;通过细胞系验证,MSP结果与定量MSP结果完全一致;同时在甲基化阴性细胞背景下,定量MSP可以稳定的检测到1∶10-5水平的ID4甲基化阳性细胞。在急性白血病骨髓样本检测中,定量MSP甲基化阳性检出率高于MSP。结论:本研究成功建立了完整的ID4基因甲基化定量PCR体系,该方法特异性好、敏感性高。 展开更多
关键词 ID4基因 DNA甲基化 甲基化定量PCR 急性白血病
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二甲基亚砜冷冻保存血小板 被引量:37
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作者 刘景汉 韩玉凤 +1 位作者 李茨芬 殷宋健 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1989年第2期106-108,共3页
将3~4%二甲基亚砜(DMSO)置于-80℃冰箱冷冻保存血小板,获得与国外报道5~6%DMSO于-80℃或-196℃液氮中冷冻保存血小板基本相同效果。本研究DMSO含量低,能较好的保持血小板功能,就是冷冻保存半年以上血小板,在临床输用也收到较好的治... 将3~4%二甲基亚砜(DMSO)置于-80℃冰箱冷冻保存血小板,获得与国外报道5~6%DMSO于-80℃或-196℃液氮中冷冻保存血小板基本相同效果。本研究DMSO含量低,能较好的保持血小板功能,就是冷冻保存半年以上血小板,在临床输用也收到较好的治疗效果。DMSO具有抗凝集作用,临床输注前要进行清洗,可提高血小板活力,增加临床输注效果,减少输血副作用。 展开更多
关键词 冷冻保存 血小板 二甲基亚砜 输血
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ID4基因甲基化定量PCR检测在急性白血病中的临床意义 被引量:6
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作者 刘洋 钟文雯 +4 位作者 康慧媛 王莉莉 卢学春 于力 朱宏丽 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期675-680,共6页
尽管治疗的进步极大地改善了急性白血病患者的预后和生存,但时至今日多数类型的急性白血病没有特异性的生物标记,因此对于多数白血病患者,影响生存的复发这一重要因素缺少有效的预警机制。ID4基因启动子区甲基化广泛发生于各类型急性白... 尽管治疗的进步极大地改善了急性白血病患者的预后和生存,但时至今日多数类型的急性白血病没有特异性的生物标记,因此对于多数白血病患者,影响生存的复发这一重要因素缺少有效的预警机制。ID4基因启动子区甲基化广泛发生于各类型急性白血病。本研究在前期建立的甲基化定量PCR体系的基础上,用该方法检测患者骨髓样本,探讨ID4甲基化定量指标(percentage of methylated reference,PMR)的临床意义。采集我院门诊及住院确诊的初治、完全缓解、复发3个阶段的急性白血病患者骨髓样本及正常对照者骨髓样本。应用ID4甲基化定量PCR体系对样本进行检测。按初治、完全缓解、复发分组比较PMR值。比较相同病例不同疾病状态的PMR的动态变化。结果表明,初治组PMR最高,其次为复发组,而完全缓解组最低。初治组PMR与完全缓解组比较存在统计学差异。4例随访病例的PMR值波动与病情变化一致。在1例复发病例中,PMR升高早于骨髓细胞学检查确认复发1.7个月。结论:本研究通过ID4基因启动子区甲基定量检测的方法初步验证:甲基化水平的量化指标PMR值与急性白血病患者肿瘤细胞负荷关系密切。PMR动态监测波动与疾病变化一致,可能具有预测复发的作用,但ID4甲基化定量指标的临床价值还有待进一步研究证据的支持。 展开更多
关键词 ID4基因 DNA甲基化 甲基化定量PCR 急性白血病
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急性特发性血小板减少性紫癜血小板平均容积的观察 被引量:3
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作者 谭汉君 冉崇蓉 +2 位作者 唐锁勤 刘凤英 李次芬 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第6期372-373,共2页
近年来由于血液自动化仪器的进展,对血小板平均容积(MPV)的测定引起了关注。国外报道了某些血液病,感染、肿瘤等情况下MPV的变化。我们于1987年4~10月对12例急性特发性血小板减少性紫癜(ITP)进行了连续MPV测定,现将结果及临床意义报告... 近年来由于血液自动化仪器的进展,对血小板平均容积(MPV)的测定引起了关注。国外报道了某些血液病,感染、肿瘤等情况下MPV的变化。我们于1987年4~10月对12例急性特发性血小板减少性紫癜(ITP)进行了连续MPV测定,现将结果及临床意义报告如下。 展开更多
关键词 儿童 MPV ITP 紫癜
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葛根素对支气管上皮细胞和嗜中性粒细胞共培养体系单核细胞趋化蛋白-1表达的影响
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作者 庞伟 兰晓梅 +1 位作者 邵玲俐 王成彬 《医学研究生学报》 CAS 2011年第1期20-24,共5页
目的嗜中性粒细胞(Neutroph il,NEU)可介导支气管上皮细胞(BEAS-2B)的炎性反应,葛根素具有抑制炎性细胞趋化作用。文中探讨葛根素对BEAS-2B细胞和NEU共培养体系中BEAS-2B细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1(Monocytechenoattractant prote in-1... 目的嗜中性粒细胞(Neutroph il,NEU)可介导支气管上皮细胞(BEAS-2B)的炎性反应,葛根素具有抑制炎性细胞趋化作用。文中探讨葛根素对BEAS-2B细胞和NEU共培养体系中BEAS-2B细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1(Monocytechenoattractant prote in-1,MCP-1)的影响。方法应用ELISA方法测量BEAS-2B细胞和NEU细胞单独培养、联合培养、加葛根素干预培养体系不同培养时间MCP-1浓度,应用实时定量PCR方法检测上述不同培养体系培养12 h后BEAS-2B细胞和NEU细胞中MCP-1基因表达。结果 BEAS-2B细胞和NEU细胞联合培养上清液中MCP-1浓度显著高于2种细胞单独培养所分泌MCP-1,联合培养的BEAS-2B细胞MCP-1基因表达水平明显上调。经葛根素干预的细胞联合培养上清液MCP-1浓度显著低于未经葛根素干预的细胞联合培养体系MCP-1浓度,前者较后者基因表达水平下调。结论 NEU细胞与BEAS-2B细胞联合培养可上调BEAS-2B细胞中MCP-1基因表达和显著增加细胞培养上清液中MCP-1浓度;葛根素可有效抑制BEAS-2B细胞和NEU细胞共培养体系MCP-1分泌和下调BEAS-2B细胞中MCP-1基因表达。 展开更多
关键词 葛根素 气道炎症 嗜中性粒细胞 单核细胞趋化蛋白-1
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抵克利得对老年不稳定型心绞痛患者血小板的抑制作用
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作者 陈练 殷宗健 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 1999年第1期65-65,共1页
关键词 抵克利得 老年 不稳定型心绞痛
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分子信标-TaqMan探针法实时荧光定量PCR新型探针及引物 被引量:8
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作者 姜文灿 岳素文 +2 位作者 江洪 葛素君 王成彬 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期107-114,共8页
在TaqMan探针法实时荧光定量PCR中,排除由引物探针聚合延伸引起的假阳性问题以及由引物二聚体(Primer Dimer,PD)引起的假阴性问题。首先对不同探针进行引物探针聚合实验;然后通过双重PCR的干扰实验选择合适的内标基因,并使用内标质粒检... 在TaqMan探针法实时荧光定量PCR中,排除由引物探针聚合延伸引起的假阳性问题以及由引物二聚体(Primer Dimer,PD)引起的假阴性问题。首先对不同探针进行引物探针聚合实验;然后通过双重PCR的干扰实验选择合适的内标基因,并使用内标质粒检测验证中部同序引物排除PD干扰的实用性;最后比较探针法不同体系检测HBV基因的灵敏度。结果表明,引物与探针聚合实验中,含有反义碱基的HBVP4在重复实验中未出现假阳性;竞争性双重PCR和非竞争性双重PCR两模板开始出现干扰作用的浓度差分别为20倍和100倍;对于内标基因,使用中部同序引物对以及普通引物对分别可以检测到10-9和10-8稀释度;3种HBV基因检测体系,使用普通引物对可以检测到Ct33左右,加入内标系统和使用中部同序引物对均可检测到Ct35左右。在TaqMan-分子信标结构调整的基础上引入反义碱基可以在排除由引物和探针聚合延伸引起的假阳性问题;在探针法中,使用中部同序引物对和加入内标系统均可降低PD的干扰程度,提升检测的灵敏度。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR TAQMAN探针 反义碱基 引物二聚体 内标系统
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