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口蹄疫病毒二价DNA疫苗的构建及实验免疫研究 被引量:6
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作者 尹革芬 金宁一 +4 位作者 张洪勇 郑敏 李昌 葛淑敏 秦晓冰 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第5期19-22,共4页
通过PCR方法从本室已构建的克隆载体pGEMT-P1-2A获得O型口蹄疫病毒主要保护性抗原VP1基因,以基因突变获得A型VP1基因。将这两种血清型的VP1基因串联后连接到真核表达载体PVAX1 PCMV启动子下游,构建成口蹄疫二价核酸疫苗pVAX1-OA。经We... 通过PCR方法从本室已构建的克隆载体pGEMT-P1-2A获得O型口蹄疫病毒主要保护性抗原VP1基因,以基因突变获得A型VP1基因。将这两种血清型的VP1基因串联后连接到真核表达载体PVAX1 PCMV启动子下游,构建成口蹄疫二价核酸疫苗pVAX1-OA。经Western blot和IFA检测,目的蛋白在HeLa细胞中获得正确表达。动物实验表明,免疫小鼠T淋巴细胞明显增殖,特异性CTL杀伤活性较对照组显著提高;血清抗体能分别与O型和A型抗原反应,抗体效价均高于空白对照组,但较灭活苗低。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VP1基因 核酸疫苗 CTL活性 抗体效价 免疫指标检测
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共表达FMDV P1-2A和3C重组鸡痘病毒疫苗与核酸疫苗的实验免疫研究 被引量:4
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作者 张洪勇 金宁一 +4 位作者 葛淑敏 尹革芬 郑敏 李子健 江文正 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第8期20-23,共4页
将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因分别插入到鸡痘病毒表达载体质粒pUTA-16Lac Z的复合启动子和单一启动子的下游,构建共表达重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL3CP1,与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞,经RT-PCR、... 将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因分别插入到鸡痘病毒表达载体质粒pUTA-16Lac Z的复合启动子和单一启动子的下游,构建共表达重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL3CP1,与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞,经RT-PCR、IFA及Western blotting检测,成功获得能正确表达目的蛋白的重组鸡痘病毒株vU-TAL3CP1。并与FMDV重组核酸疫苗免疫小鼠实验表明,各实验免疫组均能诱导小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫反应,其中以重组鸡痘病毒与核酸疫苗联合免疫效果好于其它实验各组。 展开更多
关键词 FMDV 重组鸡痘病毒疫苗 重组核酸疫苗 免疫原性 口蹄疫病毒
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共表达VP3与hIL-18基因真核重组质粒的构建及对人结肠癌细胞的影响 被引量:1
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作者 金宁一 连海 +5 位作者 米志强 李肖 徐敬龙 金洪涛 解丽华 李萍 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第9期43-46,共4页
先将鸡贫血病毒VP3基因插入真核表达载体pVAX1的多克隆位点,再将pIRES1载体上的IRES启动子及新霉素基因一同切下插入pVAX1的VP3基因下游,然后切下新霉素基因,将hIL-18基因插入其中,构建成pVVP3IL-18,将pVVP3IL-18转染Hela细胞。间接免... 先将鸡贫血病毒VP3基因插入真核表达载体pVAX1的多克隆位点,再将pIRES1载体上的IRES启动子及新霉素基因一同切下插入pVAX1的VP3基因下游,然后切下新霉素基因,将hIL-18基因插入其中,构建成pVVP3IL-18,将pVVP3IL-18转染Hela细胞。间接免疫荧光表明,在细胞膜和细胞浆观察到了特异的黄绿色荧光,证明表达了hIL-18。pVVP3IL-18转染人结肠癌细胞HCT-116后,经AO/EB染色及电镜观察,可见大量细胞凋亡。说明真核重组质粒pVVP3IL-18可在HeLa细胞中表达,并可在体外诱导人结肠癌细胞HCT-116凋亡。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 真核表达 载体 VP3 hIL-18 IRES启动子 HELA细胞 结肠癌细胞 凋亡素 真核重组质粒
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鸡贫血病毒VP3基因对荷C6胶质瘤Weister大鼠的治疗 被引量:1
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作者 邱吉庆 金宁一 +5 位作者 连海 罗毅男 郭云宝 米志强 李宵 孙迎春 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第2期25-27,共3页
构建荷C6胶质瘤Weister大鼠的肿瘤模型,随机分组给予不同的处理给药,观察治疗期间及治疗后的肿瘤生长情况,通过病理组织学、超微结构分析,检测鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗在Weister大鼠体内的抗肿瘤作用。结果表明,pVVP3治疗组肿瘤... 构建荷C6胶质瘤Weister大鼠的肿瘤模型,随机分组给予不同的处理给药,观察治疗期间及治疗后的肿瘤生长情况,通过病理组织学、超微结构分析,检测鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗在Weister大鼠体内的抗肿瘤作用。结果表明,pVVP3治疗组肿瘤生长速度明显受到抑制,其抑瘤率达85.57%。病理组织学观察可见化疗对照组肝组织有点状坏死,而pVVP3治疗组肝组织未见明显病变。肿瘤组织超微结构观察在pVVP3治疗组可见典型的凋亡特征。说明鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗对Weister大鼠C6胶质瘤生长有抑制作用,可诱导肿瘤细胞凋亡,且对肝组织无明显损伤。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 凋亡素基因 治疗 VP3基因 凋亡素 神经胶质瘤
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