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马动脉炎病毒主要结构蛋白基因酵母工程菌的构建及鉴定
1
作者
杜建
王志亮
+2 位作者
宋厚辉
金宁一
张念祖
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2005年第11期3-5,共3页
目的:构建马动脉炎病毒读码框ORF5、ORF6、ORF7主要结构蛋白基因全长片段的克隆载体及汉逊酵母穿梭载体,并获得重组工程菌,为下一步酵母表达重组目的蛋白奠定基础。方法:应用RT-PCR方法从病毒核酸中扩增ORF5、ORF6和ORF7读码框的全长基...
目的:构建马动脉炎病毒读码框ORF5、ORF6、ORF7主要结构蛋白基因全长片段的克隆载体及汉逊酵母穿梭载体,并获得重组工程菌,为下一步酵母表达重组目的蛋白奠定基础。方法:应用RT-PCR方法从病毒核酸中扩增ORF5、ORF6和ORF7读码框的全长基因,产物回收后分别与PUC18和PMD18-T载体连接并转化DH5αE.coli,经氨苄筛选及测序,建立克隆载体PUC18-GL、PUC18-M和PMD18T-ORF7;以构建的克隆载体为模板,用重新设计的引物构建了汉逊酵母分泌性穿梭载体,然后电转化至汉逊酵母基因组中。结果:所有重组质粒经PCR和酶切鉴定均出现目的片段,测序结果证实正确,目的基因ORF5、ORF6与酵母重组成功。结论:构建了含有目的基因ORF5、ORF6的重组酵母工程菌,为实现分泌表达目的蛋白,进而研制病毒亚单位疫苗及诊断试剂提供了物质基础。
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关键词
马动脉炎病毒
结构蛋白基因
克隆
汉逊酵母菌
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职称材料
马动脉炎病毒RT-PCR检测方法的建立
被引量：
3
2
作者
杜建
王志亮
+2 位作者
陈继明
金宁一
张念祖
《中国动物检疫》
CAS
北大核心
2005年第5期28-30,共3页
根据已报道的马动脉炎病毒基因组保守基因核苷酸序列,设计并合成了1对引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,成功地从病毒感染的细胞中扩增出约200bp的片段,与理论设计值(204bp)大小一致。而正常的RK-13、BHK-21和Vero细胞和同为动脉炎病...
根据已报道的马动脉炎病毒基因组保守基因核苷酸序列,设计并合成了1对引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,成功地从病毒感染的细胞中扩增出约200bp的片段,与理论设计值(204bp)大小一致。而正常的RK-13、BHK-21和Vero细胞和同为动脉炎病毒科的猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)作为对照的扩增结果均为阴性。敏感性试验表明,该方法可以检测出10-4个TCID50的病毒含量,说明具有较好的敏感性。
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关键词
PCR检测方法
马动脉炎病毒
RT
呼吸道综合征
Vero细胞
TCID50
核苷酸序列
病毒基因组
PCR扩增
敏感性试验
病毒感染
病毒含量
设计值
猪繁殖
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职称材料
马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白真核表达载体的构建与瞬时表达
3
作者
杜建
王志亮
+1 位作者
金宁一
张念祖
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期133-135,共3页
将马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白基因GL插入真核表达载体pVAX1中构建真核表达载体pVAX1-GL,酶切和测序结果表明构建是正确的,用脂质体转染试剂将其转染BHK-21细胞并通过间接免疫荧光试验检测其在体外的表达情况,结果在转染的细胞表面观察到...
将马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白基因GL插入真核表达载体pVAX1中构建真核表达载体pVAX1-GL,酶切和测序结果表明构建是正确的,用脂质体转染试剂将其转染BHK-21细胞并通过间接免疫荧光试验检测其在体外的表达情况,结果在转染的细胞表面观察到绿色荧光,证明基因得到了表达,而对照则无绿色荧光,本研究为马动脉炎基因疫苗的研究奠定了基础。
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关键词
马动脉炎病毒
大囊膜糖蛋白
真核表达载体
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职称材料
题名
马动脉炎病毒主要结构蛋白基因酵母工程菌的构建及鉴定
1
作者
杜建
王志亮
宋厚辉
金宁一
张念祖
机构
农业部动物检疫所国家外来动物疫病诊断中心
中国科学院微生物研究所
解放军军需大学病毒基因工程重点实验室
农业部热带亚热带动物
病毒
学
重点
实验室
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2005年第11期3-5,共3页
基金
农业部诊断技术标准和农业部热带亚热带动物病毒学重点开放实验室
基金项目(200205)
文摘
目的:构建马动脉炎病毒读码框ORF5、ORF6、ORF7主要结构蛋白基因全长片段的克隆载体及汉逊酵母穿梭载体,并获得重组工程菌,为下一步酵母表达重组目的蛋白奠定基础。方法:应用RT-PCR方法从病毒核酸中扩增ORF5、ORF6和ORF7读码框的全长基因,产物回收后分别与PUC18和PMD18-T载体连接并转化DH5αE.coli,经氨苄筛选及测序,建立克隆载体PUC18-GL、PUC18-M和PMD18T-ORF7;以构建的克隆载体为模板,用重新设计的引物构建了汉逊酵母分泌性穿梭载体,然后电转化至汉逊酵母基因组中。结果:所有重组质粒经PCR和酶切鉴定均出现目的片段,测序结果证实正确,目的基因ORF5、ORF6与酵母重组成功。结论:构建了含有目的基因ORF5、ORF6的重组酵母工程菌,为实现分泌表达目的蛋白,进而研制病毒亚单位疫苗及诊断试剂提供了物质基础。
关键词
马动脉炎病毒
结构蛋白基因
克隆
汉逊酵母菌
Keywords
equine arteritis virus
structural protein gene
cloning
Hansenula polymorpha Yeast
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
马动脉炎病毒RT-PCR检测方法的建立
被引量：
3
2
作者
杜建
王志亮
陈继明
金宁一
张念祖
机构
农业部动物检疫所国家外来动物疫病诊断中心
昆明市畜牧兽医站
解放军军需大学病毒基因工程重点实验室
农业部热带亚热带动物
病毒
学
重点
实验室
出处
《中国动物检疫》
CAS
北大核心
2005年第5期28-30,共3页
文摘
根据已报道的马动脉炎病毒基因组保守基因核苷酸序列,设计并合成了1对引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,成功地从病毒感染的细胞中扩增出约200bp的片段,与理论设计值(204bp)大小一致。而正常的RK-13、BHK-21和Vero细胞和同为动脉炎病毒科的猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)作为对照的扩增结果均为阴性。敏感性试验表明,该方法可以检测出10-4个TCID50的病毒含量,说明具有较好的敏感性。
关键词
PCR检测方法
马动脉炎病毒
RT
呼吸道综合征
Vero细胞
TCID50
核苷酸序列
病毒基因组
PCR扩增
敏感性试验
病毒感染
病毒含量
设计值
猪繁殖
分类号
S858.23 [农业科学—临床兽医学]
S852.652 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白真核表达载体的构建与瞬时表达
3
作者
杜建
王志亮
金宁一
张念祖
机构
农业部动物检疫所国家外来动物疫病诊断中心
解放军军需大学病毒基因工程重点实验室
农业部热带亚热带动物
病毒
学
重点
实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期133-135,共3页
基金
农业部诊断技术标准和农业部热带亚热带动物病毒学重点实验室开放基金(200205)
文摘
将马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白基因GL插入真核表达载体pVAX1中构建真核表达载体pVAX1-GL,酶切和测序结果表明构建是正确的,用脂质体转染试剂将其转染BHK-21细胞并通过间接免疫荧光试验检测其在体外的表达情况,结果在转染的细胞表面观察到绿色荧光,证明基因得到了表达,而对照则无绿色荧光,本研究为马动脉炎基因疫苗的研究奠定了基础。
关键词
马动脉炎病毒
大囊膜糖蛋白
真核表达载体
Keywords
equine arteritis virus
major envelope glycoprotein
eukaryotic expression vector
分类号
S852.652 [农业科学—基础兽医学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
马动脉炎病毒主要结构蛋白基因酵母工程菌的构建及鉴定
杜建
王志亮
宋厚辉
金宁一
张念祖
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2005
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
马动脉炎病毒RT-PCR检测方法的建立
杜建
王志亮
陈继明
金宁一
张念祖
《中国动物检疫》
CAS
北大核心
2005
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
马动脉炎病毒大囊膜糖蛋白真核表达载体的构建与瞬时表达
杜建
王志亮
金宁一
张念祖
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
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职称材料
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