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火鸡隐孢子虫18S核糖体DNA部分序列测定与系统发育分析 被引量:5
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作者 李建华 张西臣 +3 位作者 田宗成 尹继刚 何宏轩 杨举 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期267-269,共3页
从长春地区鸭的粪便中分离纯化了火鸡隐孢子虫 (Cryptosporidiummeleagridis )卵囊 ,根据隐孢子虫 18SrDNA基因序列设计合成引物 ,用PCR扩增了卵囊基因组DNA大小 5 86bp的片段 ,PCR产物经电泳鉴定后用试剂盒回收纯化 ,纯化后PCR产物直... 从长春地区鸭的粪便中分离纯化了火鸡隐孢子虫 (Cryptosporidiummeleagridis )卵囊 ,根据隐孢子虫 18SrDNA基因序列设计合成引物 ,用PCR扩增了卵囊基因组DNA大小 5 86bp的片段 ,PCR产物经电泳鉴定后用试剂盒回收纯化 ,纯化后PCR产物直接测序。将测得的序列用Dnastar软件分析并与国外已发表的相应序列进行了同源性比较 ,并绘制了系统发育进化树。结果初步建立了火鸡隐孢子虫的PCR检测方法 ,序列分析显示长春鸭源火鸡隐孢子虫与国外 9株隐孢子虫相应序列同源性在 82 7%~ 99.8%之间 ,其中与国外火鸡源火鸡隐孢子虫相应序列同源性为 85 .3% ;与C .felis同源性最低 ,与C .muris同源性最高。 展开更多
关键词 隐孢子虫 18S RDNA PCR
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以CP23重组蛋白为抗原建立检测微小隐孢子虫抗体间接ELISA方法的研究 被引量:5
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作者 何宏轩 张西臣 +2 位作者 尹继刚 李建华 杨举 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第1期3-5,共3页
以在 E.coli高效表达的微小隐孢子虫子孢子表面抗原 CP2 3为抗原 ,以辣根过氧化物酶 (HRP)标记的山羊抗鼠Ig G为二抗 ,建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接 EL ISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为 1μg/孔纯化的 E.coli表达的CP2 3抗原... 以在 E.coli高效表达的微小隐孢子虫子孢子表面抗原 CP2 3为抗原 ,以辣根过氧化物酶 (HRP)标记的山羊抗鼠Ig G为二抗 ,建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接 EL ISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为 1μg/孔纯化的 E.coli表达的CP2 3抗原包被酶标板 ,用 10 %兔血清进行封闭 ,以正常 E.coli裂解上清液稀释待检血清。实验表明应用 CP2 3重组蛋白作为诊断 C.parvum抗原具有特异性高。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 抗体检测 CP23重组蛋白 抗原 间接ELISA方法 辣根过氧化物酶 隐孢子虫病
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用微小隐孢子虫子孢子表面蛋白DNA疫苗免疫小鼠的实验研究 被引量:4
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作者 何宏轩 张西臣 +4 位作者 尹继刚 李建华 杨举 刘明远 宣华 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第2期3-5,共3页
为了探讨微小隐孢子虫子孢子表面蛋白 CP15 / 60重组质粒 pc DNA3 .1- 15 / 60 DNA疫苗诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果。用重组的 DNA疫苗于 BAL B/ c小鼠后腿胫骨前肌肉注射免疫 ,于 0、3、6周共免疫 3次 ,10 0 μg/次。免疫后... 为了探讨微小隐孢子虫子孢子表面蛋白 CP15 / 60重组质粒 pc DNA3 .1- 15 / 60 DNA疫苗诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果。用重组的 DNA疫苗于 BAL B/ c小鼠后腿胫骨前肌肉注射免疫 ,于 0、3、6周共免疫 3次 ,10 0 μg/次。免疫后不同时间检测体液和细胞免疫应答指标。并用 1× 10 6 卵囊进行攻虫试验。结果表明 pc DNA 3 .1- 15 / 60可诱导机体产生相应的特异性抗体 ,对 C.parvum卵囊攻击具有保护作用。微小隐孢子虫子孢子表面蛋白 CP15 / 60重组质粒 pc DNA3 .1- 15 / 60有可能作为侯选的隐孢子虫 DNA疫苗 。 展开更多
关键词 子孢子表面蛋白 微小隐孢子虫 DNA疫苗 免疫应答 体液免疫 细胞免疫 隐孢子虫病
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小球隐孢子虫子孢子表面蛋白CP15/60基因的克隆和序列分析 被引量:3
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作者 何宏轩 张西臣 +5 位作者 欧阳红生 徐卫东 陈建宝 尹继刚 李建华 杨举 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期182-184,共3页
将小球隐孢子虫子孢子表面蛋白 (CP15 / 6 0 )编码区基因克隆及测序 ,并对其抗原决定簇进行分析。抽提牛源小球隐孢子虫孵囊基因组DNA ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增编码CP15 / 6 0的基因 ,然后将其克隆到pMD18_T载体中 ,用双脱氧链末端终... 将小球隐孢子虫子孢子表面蛋白 (CP15 / 6 0 )编码区基因克隆及测序 ,并对其抗原决定簇进行分析。抽提牛源小球隐孢子虫孵囊基因组DNA ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增编码CP15 / 6 0的基因 ,然后将其克隆到pMD18_T载体中 ,用双脱氧链末端终止法测DNA序列。结果 ,用PCR扩增获得了CP15 / 6 0的编码区基因 ,并测定了该基因编码区序列。与GenBank比较 ,核苷酸序列同源性为 :98.9% ;推导的氨基酸序列同源性为 :99.3%。 展开更多
关键词 小球隐孢子虫 子孢子表面蛋白 CP15/60基因 序列分析 基因克隆 CP15/60基因
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微小隐孢子虫CP15基因高效真核表达载体的构建及其在Hela细胞中的表达 被引量:1
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作者 何宏轩 张西臣 +3 位作者 欧阳红生 尹继刚 李建华 杨举 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期240-242,共3页
目的 :构建隐孢子虫CP15真核表达载体pCR3 1 15 ,观察其在Hela细胞中的表达。方法 :用BglⅡ从pMD18 T 15中酶切得到CP15基因 ,将其插入真核表达载体pCR3 1(+)的BamHⅠ位点 ,构建CP15真核表达载体pCR3 1 15 ,脂质体介导法将其转染Hela细... 目的 :构建隐孢子虫CP15真核表达载体pCR3 1 15 ,观察其在Hela细胞中的表达。方法 :用BglⅡ从pMD18 T 15中酶切得到CP15基因 ,将其插入真核表达载体pCR3 1(+)的BamHⅠ位点 ,构建CP15真核表达载体pCR3 1 15 ,脂质体介导法将其转染Hela细胞 ,并用G4 18加压筛选 ,用RT PCR方法检测外源CP15基因的转录 ,用ELISA法和间接免疫荧光法检测其活性。结果 :酶切鉴定表明已成功构建了重组真核表达载体pCR3 1 15 ;外源CP15基因能在转染细胞中有效转录 ;ELISA法和间接免疫荧光法实验结果表明表达产物具有良好的生物活性。结论 :构建的pCR3 1 15真核表达载体在Hela细胞中具有良好的表达活性。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 CPl5基因 真核表达载体 构建
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犬贾第虫包囊排出规律的研究 被引量:1
6
作者 喻建军 张西连 李建华 《湖南畜牧兽医》 2000年第4期10-10,共1页
对自然感染贾第虫的比格大进行粪检调查,结果表明大贸第虫包囊排出呈间歇性,其间歇期为7-8d,排囊后12~14d达到排爱高峰期,峰期持续2~3d,排囊持续时间为25~27d。用2只幼犬进行免疫抑制接种犬贾第虫,接种后第7d出现然包囊,排囊... 对自然感染贾第虫的比格大进行粪检调查,结果表明大贸第虫包囊排出呈间歇性,其间歇期为7-8d,排囊后12~14d达到排爱高峰期,峰期持续2~3d,排囊持续时间为25~27d。用2只幼犬进行免疫抑制接种犬贾第虫,接种后第7d出现然包囊,排囊后6~7d达到排囊高峰期.高峰期持续小5d。受染动物出现腹泻,体重减轻。 展开更多
关键词 贾第虫 排囊 规律 免疫抑制 间歇性 包囊排出
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犬贾第虫包囊排出规律的研究
7
作者 喻建军 张西臣 李建华 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第2期64-65,共2页
目的 对自然感染贾第虫的比格犬进行粪检调查 ,结果表明犬贾第虫包囊排出呈间歇性 ,其间歇期为 7~ 8天 ,排囊后 12~ 14天达到排囊高峰期 ,峰期持续 2~ 3天 ,排囊持续时间为 2 5~ 2 7天。用 2只幼犬进行免疫的抑制接种犬贾第虫 ,接... 目的 对自然感染贾第虫的比格犬进行粪检调查 ,结果表明犬贾第虫包囊排出呈间歇性 ,其间歇期为 7~ 8天 ,排囊后 12~ 14天达到排囊高峰期 ,峰期持续 2~ 3天 ,排囊持续时间为 2 5~ 2 7天。用 2只幼犬进行免疫的抑制接种犬贾第虫 ,接种后第 7天出现排包囊 ,排囊后 6~ 7天达到排囊高峰期 ,高峰期持续 4~ 5天。受染动物出现腹泻 ,体重减轻。 展开更多
关键词 贾第虫 免疫抑制 包囊排出
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寄生虫核酸疫苗的研究概况
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作者 何宏轩 张西臣 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第5期42-45,共4页
关键词 寄生虫 核酸疫苗 特点 构建方法 免疫效力
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原虫病毒的研究进展
9
作者 喻建军 张西臣 《塔里木农垦大学学报》 2001年第1期49-54,共6页
关键词 原虫病毒 研究进展 鉴定方法
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