利用淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌特异性McAb杂交瘤细胞系,从中提取已重排的编码功能性Ig DNA 基因组(组建DNA文库)或成熟的IgH,L链mRNA片段(组建cDNA文库及制备探针),从而获得编码特异性McAb的V区基因。利用基因重组技术,将此来源于小...利用淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌特异性McAb杂交瘤细胞系,从中提取已重排的编码功能性Ig DNA 基因组(组建DNA文库)或成熟的IgH,L链mRNA片段(组建cDNA文库及制备探针),从而获得编码特异性McAb的V区基因。利用基因重组技术,将此来源于小鼠特异性IgH、L链的V区基因分别与编码人IgH、L链的C区基因相重组,构成鼠/人嵌合的Ig重组基因。然后将此重组嵌合Ig基因导入真核表达质粒(多为pSV2-ypt和pSV2-neo)_4经磷酸钙沉淀技术,原生质体融合技术或电穿孔导入技术(以后2种方法较为实用且转化频率较高),将此质粒转染哺乳动物非分泌型骨髓瘤细胞如Sp2/0等,经选择性培养基培养,从中筛选分必完整功能性的鼠/人嵌合McAb。将此cMcAb临床应用于人体内进行诊断和治疗时,具有原鼠亲本McAb特异性结合抗原的能力,同时还具备优于亲本鼠McAb的介导补体,细胞对靶抗原的杀伤和吞噬作用。而且不引起过敏反应或干扰治疗效果。从而给临床诊断,治疗恶性肿瘤。病毒,细菌等感染提供了一种新颖的免疫治疗试剂、本文对近年来鼠/人嵌合McAb的研究进展,基本技术及原理,优越性及不足之处作了简要阐述,并认为制备嵌合McAb是今后制备并取代人McAb研制及应用的一种发展趋向。展开更多
文摘利用淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌特异性McAb杂交瘤细胞系,从中提取已重排的编码功能性Ig DNA 基因组(组建DNA文库)或成熟的IgH,L链mRNA片段(组建cDNA文库及制备探针),从而获得编码特异性McAb的V区基因。利用基因重组技术,将此来源于小鼠特异性IgH、L链的V区基因分别与编码人IgH、L链的C区基因相重组,构成鼠/人嵌合的Ig重组基因。然后将此重组嵌合Ig基因导入真核表达质粒(多为pSV2-ypt和pSV2-neo)_4经磷酸钙沉淀技术,原生质体融合技术或电穿孔导入技术(以后2种方法较为实用且转化频率较高),将此质粒转染哺乳动物非分泌型骨髓瘤细胞如Sp2/0等,经选择性培养基培养,从中筛选分必完整功能性的鼠/人嵌合McAb。将此cMcAb临床应用于人体内进行诊断和治疗时,具有原鼠亲本McAb特异性结合抗原的能力,同时还具备优于亲本鼠McAb的介导补体,细胞对靶抗原的杀伤和吞噬作用。而且不引起过敏反应或干扰治疗效果。从而给临床诊断,治疗恶性肿瘤。病毒,细菌等感染提供了一种新颖的免疫治疗试剂、本文对近年来鼠/人嵌合McAb的研究进展,基本技术及原理,优越性及不足之处作了简要阐述,并认为制备嵌合McAb是今后制备并取代人McAb研制及应用的一种发展趋向。
