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中国旱獭Ⅰ型干扰素受体β亚基克隆、表达及功能初步鉴定
1
作者
陶颖
杨东亮
+4 位作者
王宝菊
刘艺
桂文甲
李智
樊和斌
《临床肝胆病杂志》
CAS
北大核心
2024年第2期278-283,共6页
目的克隆中国旱獭Ⅰ型干扰素受体β亚基(mhIFNAR2)的基因,并进行抗体制备及功能鉴定。方法应用RT-PCR技术,从中国旱獭脾组织中扩增得到序列,克隆至原核表达载体p RSET-B,表达重组蛋白,电泳和Western Blot法鉴定;重组蛋白常规免疫BALB/c...
目的克隆中国旱獭Ⅰ型干扰素受体β亚基(mhIFNAR2)的基因,并进行抗体制备及功能鉴定。方法应用RT-PCR技术,从中国旱獭脾组织中扩增得到序列,克隆至原核表达载体p RSET-B,表达重组蛋白,电泳和Western Blot法鉴定;重组蛋白常规免疫BALB/c小鼠制备其胞外段多克隆抗体,免疫组化、免疫荧光和Western Blot法鉴定;再通过si RNA阻断的方法检测其功能。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果从mhIFNAR2扩增出149~1300 bp片段,其同源性在分析的种属中以土拨鼠最高,可达98.05%。成功地构建了表达胞外段mhIFNAR2_((50-181aa))蛋白的原核表达质粒,命名为pRSET-B.mhIFNAR2;其表达重组蛋白分子量27 kD,纯化后纯度约为95%,浓度约为160μg/mL。用纯化的重组蛋白常规免疫BALB/c小鼠后,获得1∶1000的特异性多克隆抗体,用免疫组化及免疫荧光可见细胞膜、细胞质有表达。合成的三条siRNA,其中有一条起始于277位点的siRNA(siRNA277)与空白对照及阴性对照相比,可以沉默目的基因的表达,并能减弱干扰素的信号通路(P值均<0.05)。结论获得mhIFNAR2的部分序列,成功地制备出抗mhIFNAR2胞外段多克隆抗体,该抗体有较高的效价和特异性,并能用于免疫组化、免疫荧光及Western Blot的检测。用siRNA277可以抑制目的基因的表达,并能阻断干扰素的信号通路。
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关键词
受体
干扰素αβ
克隆
乙型肝炎
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职称材料
新型冠状病毒肺炎临床防治方案专家共识
被引量：
16
2
作者
赵敏
秦恩强
+8 位作者
张大伟
徐哲
赵鹏
王福生
毛青
黄长形
江宗群
江晓静
无
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第11期1109-1116,共8页
2019年底,新型冠状病毒肺炎(COVID-19)暴发,引发全球重大公共卫生危机。全军传染病学专业委员会根据急性传染病不同阶段的特点,撰写了《新型冠状病毒肺炎临床防治方案专家共识》,将COVID-19的整个疾病过程分为潜伏期、初期、进展期、极...
2019年底,新型冠状病毒肺炎(COVID-19)暴发,引发全球重大公共卫生危机。全军传染病学专业委员会根据急性传染病不同阶段的特点,撰写了《新型冠状病毒肺炎临床防治方案专家共识》,将COVID-19的整个疾病过程分为潜伏期、初期、进展期、极期与恢复期,希望将该病不同时期的临床特征尽可能准确地呈现,以方便临床医师更精准地实施临床救治,更希望临床医师能够把握时机、有效干预,最大可能地阻断疾病向重型,尤其是向危重型发展的进程。当然,作为一种全新的呼吸道传染病,人类对它的探究和了解还在继续,因此随着疾病认识的不断加深,方案也需不断修订与完善。
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关键词
新型冠状病毒肺炎
感染性疾病
临床实践指南
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职称材料
题名
中国旱獭Ⅰ型干扰素受体β亚基克隆、表达及功能初步鉴定
1
作者
陶颖
杨东亮
王宝菊
刘艺
桂文甲
李智
樊和斌
机构
中国人民
解放军中部战区总医院感染科
华中
科
技大学同济医学院附属协和
医院
感染
科
出处
《临床肝胆病杂志》
CAS
北大核心
2024年第2期278-283,共6页
基金
国家自然科学基金(3021170)
国家重大基础研究项目(973)(2005CB522900)。
文摘
目的克隆中国旱獭Ⅰ型干扰素受体β亚基(mhIFNAR2)的基因,并进行抗体制备及功能鉴定。方法应用RT-PCR技术,从中国旱獭脾组织中扩增得到序列,克隆至原核表达载体p RSET-B,表达重组蛋白,电泳和Western Blot法鉴定;重组蛋白常规免疫BALB/c小鼠制备其胞外段多克隆抗体,免疫组化、免疫荧光和Western Blot法鉴定;再通过si RNA阻断的方法检测其功能。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果从mhIFNAR2扩增出149~1300 bp片段,其同源性在分析的种属中以土拨鼠最高,可达98.05%。成功地构建了表达胞外段mhIFNAR2_((50-181aa))蛋白的原核表达质粒,命名为pRSET-B.mhIFNAR2;其表达重组蛋白分子量27 kD,纯化后纯度约为95%,浓度约为160μg/mL。用纯化的重组蛋白常规免疫BALB/c小鼠后,获得1∶1000的特异性多克隆抗体,用免疫组化及免疫荧光可见细胞膜、细胞质有表达。合成的三条siRNA,其中有一条起始于277位点的siRNA(siRNA277)与空白对照及阴性对照相比,可以沉默目的基因的表达,并能减弱干扰素的信号通路(P值均<0.05)。结论获得mhIFNAR2的部分序列,成功地制备出抗mhIFNAR2胞外段多克隆抗体,该抗体有较高的效价和特异性,并能用于免疫组化、免疫荧光及Western Blot的检测。用siRNA277可以抑制目的基因的表达,并能阻断干扰素的信号通路。
关键词
受体
干扰素αβ
克隆
乙型肝炎
Keywords
Receptor,Interferon alpha-beta
Clone
Hepatitis B
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
新型冠状病毒肺炎临床防治方案专家共识
被引量：
16
2
作者
赵敏
秦恩强
张大伟
徐哲
赵鹏
王福生
毛青
黄长形
江宗群
江晓静
无
机构
解放军
总
医院
第五医学中心
感染
病医学部
陆军军医大学西南
医院
感染
科
空军军医大学第二附属
医院
感染
科
解放军
联勤保障部队第
解放军中部战区总医院感染科
全军传染病学专业委员会
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第11期1109-1116,共8页
文摘
2019年底,新型冠状病毒肺炎(COVID-19)暴发,引发全球重大公共卫生危机。全军传染病学专业委员会根据急性传染病不同阶段的特点,撰写了《新型冠状病毒肺炎临床防治方案专家共识》,将COVID-19的整个疾病过程分为潜伏期、初期、进展期、极期与恢复期,希望将该病不同时期的临床特征尽可能准确地呈现,以方便临床医师更精准地实施临床救治,更希望临床医师能够把握时机、有效干预,最大可能地阻断疾病向重型,尤其是向危重型发展的进程。当然,作为一种全新的呼吸道传染病,人类对它的探究和了解还在继续,因此随着疾病认识的不断加深,方案也需不断修订与完善。
关键词
新型冠状病毒肺炎
感染性疾病
临床实践指南
Keywords
coronavirus disease 2019
infectious disease
clinical practice guideline
分类号
R373.1 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
中国旱獭Ⅰ型干扰素受体β亚基克隆、表达及功能初步鉴定
陶颖
杨东亮
王宝菊
刘艺
桂文甲
李智
樊和斌
《临床肝胆病杂志》
CAS
北大核心
2024
0
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职称材料
2
新型冠状病毒肺炎临床防治方案专家共识
赵敏
秦恩强
张大伟
徐哲
赵鹏
王福生
毛青
黄长形
江宗群
江晓静
无
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
16
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