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卤代烷烃脱卤素酶标签α1A-肾上腺素受体色谱方法的建立与评价
1
作者
袁心怡
李良喜
+4 位作者
赵勤
张晓英
李倩
赵新锋
冀旭
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第10期935-942,共8页
受体色谱技术是将色谱技术的高分离能力和药物-受体间的高特异性识别能力结合起来的一种分析技术,能够对中药等复杂体系中靶向活性成分进行高效筛选与准确辨识。该技术的关键在于发展高效、温和、简便的固定化方法,使得固定化受体活性...
受体色谱技术是将色谱技术的高分离能力和药物-受体间的高特异性识别能力结合起来的一种分析技术,能够对中药等复杂体系中靶向活性成分进行高效筛选与准确辨识。该技术的关键在于发展高效、温和、简便的固定化方法,使得固定化受体活性得以保持。传统的以生物交联剂为核心的随意共价固定化技术存在反应特异性较差、需要纯化蛋白质等不足。针对该问题,本研究将卤代烷烃脱卤素酶(Halo)与6-氯己酸的特异性生物正交反应引入至α_(1A)-肾上腺素受体(α_(1A)-AR)的固定化过程,将Halo标签α_(1A)-AR一步固定至6-氯己酸修饰的氨丙基硅胶表面,无需对α_(1A)-AR进行纯化。采用扫描电子显微镜和色谱法对Halo-α_(1A)-AR色谱固定相进行形貌及活性表征,证明受体已成功固定且具有特异性识别配体的能力,30天内稳定性良好。非线性色谱法研究结果显示:盐酸哌唑嗪、盐酸特拉唑嗪和乌拉地尔通过一类结合位点与Halo-α_(1A)-AR色谱固定相作用,结合常数分别为3.85×10^(5)、5.00×10^(5)和5.90×10^(5)L/mol;甲磺酸酚妥拉明和盐酸坦索罗辛在Halo-α_(1A)-AR色谱固定相上则存在两类位点,前者与受体亲和力分别为3.12×10^(6) L/mol和6.01×10^(5)L/mol,后者则为9.98×10^(5)L/mol和2.11×10^(4) L/mol。与传统物理吸附法或N,N′-羰基二咪唑法制备的α_(1A)-AR色谱柱相比,本文所用固定化方法无需纯化受体,在一定程度上避免了受体活性损失,实现了蛋白质一步固定化方法,亲和力测定值更接近于溶液中受体-药物的真值,为复杂体系靶向活性成分高效筛选与准确测定奠定了基础。
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关键词
α1A-肾上腺素受体
卤代烷烃脱卤素酶
一步固定化
非线性色谱法
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职称材料
基于psb A-trn H序列的秦艽分子鉴定及其药效分析
被引量：
1
2
作者
姜钊
张景瑜
+4 位作者
张卫花
孔秀梅
姜一
冀旭
赵勤
《山西农业科学》
2023年第1期7-13,共7页
秦艽相近相似混伪品较多,且药效差异显著,为准确区分西北地区秦艽混伪品及药效,试验利用psb Atrn H基因作为条形码鉴定5种来自西藏、四川、青海地区相近秦艽的药材,基因测序后,在GenBank数据库中通过序列比对选取药材同源序列,利用MEGA ...
秦艽相近相似混伪品较多,且药效差异显著,为准确区分西北地区秦艽混伪品及药效,试验利用psb Atrn H基因作为条形码鉴定5种来自西藏、四川、青海地区相近秦艽的药材,基因测序后,在GenBank数据库中通过序列比对选取药材同源序列,利用MEGA 7.0软件计算双参数(K2P)遗传距离,并基于邻近法构建系统进化树,分析物种系统发育关系;另外,利用紫外分光光度法检测试验样本龙胆苦苷含量及DPPH清除率,评估不同地区药材龙胆苦苷含量及抗氧化能力。结果表明,结合K2P遗传距离、系统发育关系和psb A-trn H基因相似性确定试验样品中3种为粗茎秦艽(Gentiana crasicaulis),另外2种分别为麻花秦艽(G.straminea)和黄管秦艽(G.officinalis)。所有样品龙胆苦苷含量在8.56%~12.76%,其中大小表现为黄管秦艽>麻花秦艽>粗茎秦艽;DPPH清除率范围为66.49%~90.68%,其中麻花秦艽>黄管秦艽,而3个不同地区的粗茎秦艽DPPH清除率差异较大。综上,psb A-trn H基因序列在秦艽植物鉴定和系统分类研究上十分有效,不同地区试验样品中龙胆苦苷含量均较高,抗氧化能力较强。
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关键词
秦艽
PSBA-TRNH
分子鉴定
龙胆苦苷
DPPH清除率
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职称材料
题名
卤代烷烃脱卤素酶标签α1A-肾上腺素受体色谱方法的建立与评价
1
作者
袁心怡
李良喜
赵勤
张晓英
李倩
赵新锋
冀旭
机构
西藏民族大学西藏藏医药研究中心藏药活性成分及药理机制研究联合实验室
西藏
民族大学
藏药
检测技术教育部工程
研究
中心
西北
大学
生命科学学院
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第10期935-942,共8页
基金
国家自然科学基金(22374116,22074118)
西藏自治区自然科学基金青年项目(XZ202401ZR0117)
+1 种基金
西藏自治区科技计划(藏医药重大专项)项目(XZ202101ZD0019G)
西藏民族大学藏药检测技术教育部工程研究中心开放课题(2022-ZYZXK09).
文摘
受体色谱技术是将色谱技术的高分离能力和药物-受体间的高特异性识别能力结合起来的一种分析技术,能够对中药等复杂体系中靶向活性成分进行高效筛选与准确辨识。该技术的关键在于发展高效、温和、简便的固定化方法,使得固定化受体活性得以保持。传统的以生物交联剂为核心的随意共价固定化技术存在反应特异性较差、需要纯化蛋白质等不足。针对该问题,本研究将卤代烷烃脱卤素酶(Halo)与6-氯己酸的特异性生物正交反应引入至α_(1A)-肾上腺素受体(α_(1A)-AR)的固定化过程,将Halo标签α_(1A)-AR一步固定至6-氯己酸修饰的氨丙基硅胶表面,无需对α_(1A)-AR进行纯化。采用扫描电子显微镜和色谱法对Halo-α_(1A)-AR色谱固定相进行形貌及活性表征,证明受体已成功固定且具有特异性识别配体的能力,30天内稳定性良好。非线性色谱法研究结果显示:盐酸哌唑嗪、盐酸特拉唑嗪和乌拉地尔通过一类结合位点与Halo-α_(1A)-AR色谱固定相作用,结合常数分别为3.85×10^(5)、5.00×10^(5)和5.90×10^(5)L/mol;甲磺酸酚妥拉明和盐酸坦索罗辛在Halo-α_(1A)-AR色谱固定相上则存在两类位点,前者与受体亲和力分别为3.12×10^(6) L/mol和6.01×10^(5)L/mol,后者则为9.98×10^(5)L/mol和2.11×10^(4) L/mol。与传统物理吸附法或N,N′-羰基二咪唑法制备的α_(1A)-AR色谱柱相比,本文所用固定化方法无需纯化受体,在一定程度上避免了受体活性损失,实现了蛋白质一步固定化方法,亲和力测定值更接近于溶液中受体-药物的真值,为复杂体系靶向活性成分高效筛选与准确测定奠定了基础。
关键词
α1A-肾上腺素受体
卤代烷烃脱卤素酶
一步固定化
非线性色谱法
Keywords
α1A-adrenergic receptor(α1A-AR)
haloalkane dehalogenase(Halo)
one-step immobilization
nonlinear chromatography
分类号
O658 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
基于psb A-trn H序列的秦艽分子鉴定及其药效分析
被引量：
1
2
作者
姜钊
张景瑜
张卫花
孔秀梅
姜一
冀旭
赵勤
机构
西藏民族大学西藏藏医药研究中心藏药活性成分及药理机制研究联合实验室
西藏
民族大学
药材检测技术教育部工程
研究
中心
西藏
民族大学
高原生物医学大数据挖掘与生物信息学分析
实验室
沧州市
中心
医院病理科
出处
《山西农业科学》
2023年第1期7-13,共7页
基金
国家自然科学基金项目(81660722)
西藏自治区科技创新基地自主研究项目(XZ2021JR0003G)
西藏自治区自然科学基金项目(XZ202201ZR0061G,XZ202101ZR0076G)。
文摘
秦艽相近相似混伪品较多,且药效差异显著,为准确区分西北地区秦艽混伪品及药效,试验利用psb Atrn H基因作为条形码鉴定5种来自西藏、四川、青海地区相近秦艽的药材,基因测序后,在GenBank数据库中通过序列比对选取药材同源序列,利用MEGA 7.0软件计算双参数(K2P)遗传距离,并基于邻近法构建系统进化树,分析物种系统发育关系;另外,利用紫外分光光度法检测试验样本龙胆苦苷含量及DPPH清除率,评估不同地区药材龙胆苦苷含量及抗氧化能力。结果表明,结合K2P遗传距离、系统发育关系和psb A-trn H基因相似性确定试验样品中3种为粗茎秦艽(Gentiana crasicaulis),另外2种分别为麻花秦艽(G.straminea)和黄管秦艽(G.officinalis)。所有样品龙胆苦苷含量在8.56%~12.76%,其中大小表现为黄管秦艽>麻花秦艽>粗茎秦艽;DPPH清除率范围为66.49%~90.68%,其中麻花秦艽>黄管秦艽,而3个不同地区的粗茎秦艽DPPH清除率差异较大。综上,psb A-trn H基因序列在秦艽植物鉴定和系统分类研究上十分有效,不同地区试验样品中龙胆苦苷含量均较高,抗氧化能力较强。
关键词
秦艽
PSBA-TRNH
分子鉴定
龙胆苦苷
DPPH清除率
Keywords
Gentiana sp.
psb A-trn H
molecular identification
gentiopicroside
DPPH radical scavenging rate
分类号
R282.5 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
卤代烷烃脱卤素酶标签α1A-肾上腺素受体色谱方法的建立与评价
袁心怡
李良喜
赵勤
张晓英
李倩
赵新锋
冀旭
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于psb A-trn H序列的秦艽分子鉴定及其药效分析
姜钊
张景瑜
张卫花
孔秀梅
姜一
冀旭
赵勤
《山西农业科学》
2023
1
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职称材料
已选择
0
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