【目的】基于高叶酸小鼠睾丸转录组数据,筛选叶酸调控牛和小鼠繁殖力的同源基因,以期为通过叶酸改善雄性动物繁殖力奠定理论基础。【方法】选取24只健康、生长状况相近的11周龄C57BL/6雄性小鼠,随机分为3组(n=8):CON、A和B组,分别饲喂2...【目的】基于高叶酸小鼠睾丸转录组数据,筛选叶酸调控牛和小鼠繁殖力的同源基因,以期为通过叶酸改善雄性动物繁殖力奠定理论基础。【方法】选取24只健康、生长状况相近的11周龄C57BL/6雄性小鼠,随机分为3组(n=8):CON、A和B组,分别饲喂2、7和15 mg/kg叶酸,连续饲喂57 d。饲喂结束后分别测定3组小鼠左、右睾丸和精囊的重量,精子密度以及缓慢前进的精子比例,通过Illumina NovaseqTM6000高通量测序进行小鼠睾丸转录组测序分析,对测序结果进行差异表达基因(DEGs)、GO功能注释和蛋白互作网络(PPI)分析,筛选叶酸调控精液品质和繁殖力的关键基因,并结合荷斯坦种公牛繁殖力相关同源基因和数量性状基因座(QTLs)数据,进一步筛选叶酸调控牛和小鼠雄性繁殖力的同源基因。【结果】相较于CON组,B组小鼠左、右精囊重量均极显著增加(P<0.01),A和B组小鼠精液中缓慢前进的精子比例均极显著降低(P<0.01)。经RNA-Seq分析发现,在A vs CON组中筛选出423个DEGs,在B vs CON组中筛选出661个DEGs,A vs CON和B vs CON组中共有的上调DEGs 85个、下调DEGs 40个。通过GO功能注释分析发现,A vs CON组的DEGs显著富集在叶酸代谢和精液品质调控相关的GO条目,B vs CON组的DEGs显著富集在叶酸代谢和生殖器官发育相关的GO条目,A vs CON和B vs CON两个组共有的上调DEGs显著富集在叶酸代谢和精液品质调控相关等功能,共有的下调DEGs显著富集在一碳代谢过程和单精受精作用功能。通过DEGs的PPI网络分析发现,筛选出的核心节点(hub)基因可能通过影响精液品质而影响雄性动物繁殖力。同时本研究中筛选出的hub基因均为奶牛的同源基因,并找出了不同浓度叶酸影响荷斯坦种公牛繁殖力的同源基因及其附近的QTLs,包括每次妊娠的授精次数QTL、精子活力QTL等。将hub基因进一步与前人荷斯坦种公牛精子转录组差异表达基因进行比对,筛选出叶酸调控牛和小鼠繁殖力的同源基因:Serpinb1b基因(牛同源基因为SERPINB1)。【结论】饲喂7和15 mg/kg叶酸能够降低精液中缓慢前进的精子比例,通过转录组测序筛选出的Serpinb1b基因(牛同源基因为SERPINB1)是叶酸调控雄性动物繁殖力的关键基因之一,可为畜牧业实际生产中大型乳用动物荷斯坦牛的养殖及选育提供参考信息。展开更多
目的开发一种共表达PD-L1高亲和受体PD-1(HAPD1)和嵌合抗原受体(CAR)的新型双效CBNK(HAPD1-CARCBNK)细胞,进一步提高肿瘤免疫治疗的疗效。方法首先构建可同时表达高亲和PD-1(HAPD1)的靶向CD19的CAR的双效慢病毒载体,并包装慢病毒感染从...目的开发一种共表达PD-L1高亲和受体PD-1(HAPD1)和嵌合抗原受体(CAR)的新型双效CBNK(HAPD1-CARCBNK)细胞,进一步提高肿瘤免疫治疗的疗效。方法首先构建可同时表达高亲和PD-1(HAPD1)的靶向CD19的CAR的双效慢病毒载体,并包装慢病毒感染从脐血中分离扩增的单个核细胞获得双效脐血CAR-NK细胞。检测分析感染效率、细胞扩增能力、表面标志物表达率;然后通过体外共培养检测细胞在不同效靶比条件下对靶细胞杀伤效率以及不同扩增时期细胞的杀伤效率。最后在免疫缺陷小鼠(24只)体内验证双效CBNK细胞在体内对靶细胞的杀伤能力。结果HAPD1和CAR基因利用慢病毒载体可高效转导至CBNK细胞[(18.63±1.88)%],病毒感染对细胞扩增倍数有一定影响(10.97±2.77 vs 24.84±3.17,P<0.05),但对细胞表面标志物表达没有显著影响(P>0.05);双效NK细胞在效靶比为5:1和10:1时的靶细胞杀伤效力高于普通CARCBNK细胞[(68.38±8.08)%,(79.11±7.42)%vs(49.65±13.60)%,(59.78±9.32)%,P<0.05]。病毒感染后第9~12天双效NK细胞具有最强靶细胞杀伤能力。体内实验进一步证实,双效NK细胞移植28 d后动物白细胞中肿瘤细胞比例低于普通CAR-CBNK细胞移植组[(19.21±3.07)%vs(29.08±3.15)%,P<0.05]。结论本研究成功构建了一种共表达HAPD1和CAR双效CBNK细胞,并在体外和体内实验证实其高效的靶细胞杀伤能力,为肿瘤免疫细胞治疗提供了一个新的有效方案。展开更多
文摘【目的】基于高叶酸小鼠睾丸转录组数据,筛选叶酸调控牛和小鼠繁殖力的同源基因,以期为通过叶酸改善雄性动物繁殖力奠定理论基础。【方法】选取24只健康、生长状况相近的11周龄C57BL/6雄性小鼠,随机分为3组(n=8):CON、A和B组,分别饲喂2、7和15 mg/kg叶酸,连续饲喂57 d。饲喂结束后分别测定3组小鼠左、右睾丸和精囊的重量,精子密度以及缓慢前进的精子比例,通过Illumina NovaseqTM6000高通量测序进行小鼠睾丸转录组测序分析,对测序结果进行差异表达基因(DEGs)、GO功能注释和蛋白互作网络(PPI)分析,筛选叶酸调控精液品质和繁殖力的关键基因,并结合荷斯坦种公牛繁殖力相关同源基因和数量性状基因座(QTLs)数据,进一步筛选叶酸调控牛和小鼠雄性繁殖力的同源基因。【结果】相较于CON组,B组小鼠左、右精囊重量均极显著增加(P<0.01),A和B组小鼠精液中缓慢前进的精子比例均极显著降低(P<0.01)。经RNA-Seq分析发现,在A vs CON组中筛选出423个DEGs,在B vs CON组中筛选出661个DEGs,A vs CON和B vs CON组中共有的上调DEGs 85个、下调DEGs 40个。通过GO功能注释分析发现,A vs CON组的DEGs显著富集在叶酸代谢和精液品质调控相关的GO条目,B vs CON组的DEGs显著富集在叶酸代谢和生殖器官发育相关的GO条目,A vs CON和B vs CON两个组共有的上调DEGs显著富集在叶酸代谢和精液品质调控相关等功能,共有的下调DEGs显著富集在一碳代谢过程和单精受精作用功能。通过DEGs的PPI网络分析发现,筛选出的核心节点(hub)基因可能通过影响精液品质而影响雄性动物繁殖力。同时本研究中筛选出的hub基因均为奶牛的同源基因,并找出了不同浓度叶酸影响荷斯坦种公牛繁殖力的同源基因及其附近的QTLs,包括每次妊娠的授精次数QTL、精子活力QTL等。将hub基因进一步与前人荷斯坦种公牛精子转录组差异表达基因进行比对,筛选出叶酸调控牛和小鼠繁殖力的同源基因:Serpinb1b基因(牛同源基因为SERPINB1)。【结论】饲喂7和15 mg/kg叶酸能够降低精液中缓慢前进的精子比例,通过转录组测序筛选出的Serpinb1b基因(牛同源基因为SERPINB1)是叶酸调控雄性动物繁殖力的关键基因之一,可为畜牧业实际生产中大型乳用动物荷斯坦牛的养殖及选育提供参考信息。
文摘目的开发一种共表达PD-L1高亲和受体PD-1(HAPD1)和嵌合抗原受体(CAR)的新型双效CBNK(HAPD1-CARCBNK)细胞,进一步提高肿瘤免疫治疗的疗效。方法首先构建可同时表达高亲和PD-1(HAPD1)的靶向CD19的CAR的双效慢病毒载体,并包装慢病毒感染从脐血中分离扩增的单个核细胞获得双效脐血CAR-NK细胞。检测分析感染效率、细胞扩增能力、表面标志物表达率;然后通过体外共培养检测细胞在不同效靶比条件下对靶细胞杀伤效率以及不同扩增时期细胞的杀伤效率。最后在免疫缺陷小鼠(24只)体内验证双效CBNK细胞在体内对靶细胞的杀伤能力。结果HAPD1和CAR基因利用慢病毒载体可高效转导至CBNK细胞[(18.63±1.88)%],病毒感染对细胞扩增倍数有一定影响(10.97±2.77 vs 24.84±3.17,P<0.05),但对细胞表面标志物表达没有显著影响(P>0.05);双效NK细胞在效靶比为5:1和10:1时的靶细胞杀伤效力高于普通CARCBNK细胞[(68.38±8.08)%,(79.11±7.42)%vs(49.65±13.60)%,(59.78±9.32)%,P<0.05]。病毒感染后第9~12天双效NK细胞具有最强靶细胞杀伤能力。体内实验进一步证实,双效NK细胞移植28 d后动物白细胞中肿瘤细胞比例低于普通CAR-CBNK细胞移植组[(19.21±3.07)%vs(29.08±3.15)%,P<0.05]。结论本研究成功构建了一种共表达HAPD1和CAR双效CBNK细胞,并在体外和体内实验证实其高效的靶细胞杀伤能力,为肿瘤免疫细胞治疗提供了一个新的有效方案。
