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牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
1
1
作者
赵征
文玲英
+2 位作者
金岩
杨曦
轩东英
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期166-170,共5页
目的制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体。方法采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28...
目的制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体。方法采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,经过初步纯化及SDS-PAGE电泳,在35300的新蛋白带处直接割胶,作为抗原免疫新西兰大白兔后获取抗体。结果成功构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白,免疫兔子1个月后,获得免疫血清,盐析法纯化得到多克隆抗体。Western印迹结果显示所得到的抗体具有较高的特异性,ELISA分析证实其效价可达1∶16000。结论成功制备出高效价的抗ADAM28多克隆抗体,为进一步研究ADAM28在牙齿发育中的作用和表达分布奠定基础。
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关键词
adam28基因
融合蛋白
多克隆抗体
免疫印迹
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题名
牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
1
1
作者
赵征
文玲英
金岩
杨曦
轩东英
机构
西安第四军医大学
口腔
医学
院儿童口腔科
西安第四军医大学
组织工程研发中心
西安第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室
出处
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期166-170,共5页
基金
国家自然科学基金资助课题(30572046)
文摘
目的制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体。方法采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,经过初步纯化及SDS-PAGE电泳,在35300的新蛋白带处直接割胶,作为抗原免疫新西兰大白兔后获取抗体。结果成功构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白,免疫兔子1个月后,获得免疫血清,盐析法纯化得到多克隆抗体。Western印迹结果显示所得到的抗体具有较高的特异性,ELISA分析证实其效价可达1∶16000。结论成功制备出高效价的抗ADAM28多克隆抗体,为进一步研究ADAM28在牙齿发育中的作用和表达分布奠定基础。
关键词
adam28基因
融合蛋白
多克隆抗体
免疫印迹
Keywords
adam28 gene
Fusion protein
Polyclonal antibody
Western blot
分类号
R78 [医药卫生—口腔医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定
赵征
文玲英
金岩
杨曦
轩东英
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
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