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Mex3c基因敲除对小鼠胚胎神经管发育的影响及其机制
1
作者
路志国
吴晓婷
+3 位作者
王凯
张波
汪涌
杜勇
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第9期1029-1037,共9页
目的研究Mex3c基因敲除对小鼠胚胎神经管发育的影响及其可能的机制。方法利用NCBI数据库分析Mex3c基因在小鼠各个组织中的表达情况,荧光原位杂交技术(FISH)检测Mex3c在Mex3c+/+小鼠不同发育时期(E12.5 d、E14.5 d)神经管中的表达情况。...
目的研究Mex3c基因敲除对小鼠胚胎神经管发育的影响及其可能的机制。方法利用NCBI数据库分析Mex3c基因在小鼠各个组织中的表达情况,荧光原位杂交技术(FISH)检测Mex3c在Mex3c+/+小鼠不同发育时期(E12.5 d、E14.5 d)神经管中的表达情况。将性发育成熟的小鼠按照Mex3c+/-雄∶雌(1∶1)的比例进行合笼繁殖,取繁殖的胚胎,采用PCR鉴定小鼠基因型,按照基因型分为3组:野生型组(Mex3c+/+,WT组)、纯合子敲除组(Mex3c-/-,KO组)与杂合子敲除组(Mex3c+/-),采用HE染色观察3组胚胎神经管的发育情况;免疫荧光染色及Western blotting检测WT组、KO组的胚胎神经干细胞增殖及凋亡情况;透射电镜观察WT组、KO组神经管发育及线粒体的超微结构。提取WT组、KO组神经管的RNA,进行RNA-seq测序,利用R.3.6.3对差异表达基因进行KEGG信号通路富集分析,并采用RT-qPCR验证测序结果。结果NCBI数据库分析及FISH检测结果显示,Mex3c基因主要表达于胚胎的中枢神经系统。HE染色结果显示,在E12.5 d、E13.5 d,胚胎神经管的发育在KO组、WT组及杂合子敲除组无明显差异;而在E14.5 d,KO组较WT组的胚胎神经管发育迟缓,表型明显异常,据此选择E14.5 d的KO组及WT组胚胎神经管组织进行后续实验。免疫荧光染色结果显示,KO组PCNA阳性细胞率明显低于WT组(P<0.001)。Western blotting检测结果显示,KO组Bax/Bcl-2比值高于WT组(P<0.01)。透射电镜观察显示,与WT组比较,KO组突触间隙消失,胚胎神经管的线粒体水肿,线粒体嵴断裂,结构明显异常。RNA-seq测序分析结果显示,共获得377个差异基因,其中表达上调101个,表达下调276个。KEGG信号通路富集分析发现,差异基因的主要信号通路富集于神经活性配体受体相互作用信号通路。RT-qPCR验证结果显示该信号通路中的Avpr1a、Drd1、Htr7、Sstr1、Oxtr、Gabra5 mRNA表达水平下调(P<0.05或P<0.01),与RNA-seq结果一致。结论Mex3c在小鼠胚胎神经管发育过程中起着重要作用,可能通过神经活性配体受体相互作用信号通路,参与调控神经干细胞的增殖及凋亡过程,进而影响神经管的发育。
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关键词
基因
Mex3c
神经管
发育异常
基因敲除
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题名
Mex3c基因敲除对小鼠胚胎神经管发育的影响及其机制
1
作者
路志国
吴晓婷
王凯
张波
汪涌
杜勇
机构
空军军医大学第二附属医院泌尿外
科
宁夏医
科
大学总医院小儿外
科
西安国际医学中心消化内镜诊疗科
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第9期1029-1037,共9页
基金
国家自然科学基金(82260308,81560253)。
文摘
目的研究Mex3c基因敲除对小鼠胚胎神经管发育的影响及其可能的机制。方法利用NCBI数据库分析Mex3c基因在小鼠各个组织中的表达情况,荧光原位杂交技术(FISH)检测Mex3c在Mex3c+/+小鼠不同发育时期(E12.5 d、E14.5 d)神经管中的表达情况。将性发育成熟的小鼠按照Mex3c+/-雄∶雌(1∶1)的比例进行合笼繁殖,取繁殖的胚胎,采用PCR鉴定小鼠基因型,按照基因型分为3组:野生型组(Mex3c+/+,WT组)、纯合子敲除组(Mex3c-/-,KO组)与杂合子敲除组(Mex3c+/-),采用HE染色观察3组胚胎神经管的发育情况;免疫荧光染色及Western blotting检测WT组、KO组的胚胎神经干细胞增殖及凋亡情况;透射电镜观察WT组、KO组神经管发育及线粒体的超微结构。提取WT组、KO组神经管的RNA,进行RNA-seq测序,利用R.3.6.3对差异表达基因进行KEGG信号通路富集分析,并采用RT-qPCR验证测序结果。结果NCBI数据库分析及FISH检测结果显示,Mex3c基因主要表达于胚胎的中枢神经系统。HE染色结果显示,在E12.5 d、E13.5 d,胚胎神经管的发育在KO组、WT组及杂合子敲除组无明显差异;而在E14.5 d,KO组较WT组的胚胎神经管发育迟缓,表型明显异常,据此选择E14.5 d的KO组及WT组胚胎神经管组织进行后续实验。免疫荧光染色结果显示,KO组PCNA阳性细胞率明显低于WT组(P<0.001)。Western blotting检测结果显示,KO组Bax/Bcl-2比值高于WT组(P<0.01)。透射电镜观察显示,与WT组比较,KO组突触间隙消失,胚胎神经管的线粒体水肿,线粒体嵴断裂,结构明显异常。RNA-seq测序分析结果显示,共获得377个差异基因,其中表达上调101个,表达下调276个。KEGG信号通路富集分析发现,差异基因的主要信号通路富集于神经活性配体受体相互作用信号通路。RT-qPCR验证结果显示该信号通路中的Avpr1a、Drd1、Htr7、Sstr1、Oxtr、Gabra5 mRNA表达水平下调(P<0.05或P<0.01),与RNA-seq结果一致。结论Mex3c在小鼠胚胎神经管发育过程中起着重要作用,可能通过神经活性配体受体相互作用信号通路,参与调控神经干细胞的增殖及凋亡过程,进而影响神经管的发育。
关键词
基因
Mex3c
神经管
发育异常
基因敲除
Keywords
gene,Mex3c
neural tube
dysplasia
gene knockout
分类号
R363.2 [医药卫生—病理学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Mex3c基因敲除对小鼠胚胎神经管发育的影响及其机制
路志国
吴晓婷
王凯
张波
汪涌
杜勇
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024
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