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外泌体负载的miR-520a-5p对胎鼠宫内生长受限妊娠结局的改善作用及其机制
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作者 相萌 徐冰 +2 位作者 王培莎 刘思旗 张少华 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第5期1230-1239,共10页
目的:探讨外泌体(Exos)负载的微小RNA-520a-5p(miR-520a-5p)对胎鼠宫内生长受限(FGR)妊娠结局的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养小鼠胎盘间充质干细胞(MSCs),并利用miR-520a-5p腺病毒载体(Ad-miR-520a-5p)转染获得高负载miR-520a... 目的:探讨外泌体(Exos)负载的微小RNA-520a-5p(miR-520a-5p)对胎鼠宫内生长受限(FGR)妊娠结局的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养小鼠胎盘间充质干细胞(MSCs),并利用miR-520a-5p腺病毒载体(Ad-miR-520a-5p)转染获得高负载miR-520a-5p的Exos(miR-520a-5p-MSCs-Exos)并进行鉴定。C57BL/6小鼠按照雌雄2∶1的比例合笼交配成功妊娠,将40只怀孕小鼠分为对照组、FGR组、NC-MSCs-Exos组和miR-520a-5p-MSCs-Exos组,每组10只。除对照组外,其余组小鼠采用孕期过度暴露地塞米松(DEX)诱发妊娠期母体小鼠的FGR模型。检测胎鼠出生体质量和生后1、2、3及4周体质量,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组小鼠胎盘组织中miR-520a-5p、DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组小鼠胎盘组织中DNMT3b和VEGF蛋白表达水平,甲基化特异性PCR(MSP)分析各组小鼠胎盘组织中VEGF启动子甲基化率,双荧光素酶报告基因实验验证miR-520a-5p与DNMT3b之间的靶向关系。结果:透射电子显微镜(TEM)和纳米粒子追踪分析(NTA)分析,Exos呈球形,粒径集中在100 nm附近;Western blotting法,Exos表面生物标志物CD63和CD81均呈阳性表达;RT-qPCR法,与NC-MSCs-Exos和Ad-NC-MSCs-Exos比较,Ad-miR-520a-5p-MSCs-Exos中miR-520a-5p表达水平升高(P<0.001)。4组子代小鼠出生体质量和生后1、2及3周体质量比较差异均有统计学意义(F=36.084,F=19.851,F=77.755,F=103.223;P<0.001)。与对照组比较,FGR组子代小鼠出生体质量和生后1、2及3周体质量均降低(P<0.05);与FGR组和NC-MSCs-Exos组比较,miR-520a-5p-MSCs-Exos组子代小鼠出生体质量和生后1、2及3周体质量均升高(P<0.05)。单因素方差分析,4组小鼠胎盘组织中miR-520a-5p、DNMT3b和VEGF mRNA表达水平比较差异有统计学意义(F=103.224,F=856.460,F=214.563;P<0.001);组间两两比较,与对照组比较,FGR组小鼠胎盘组织中miR-520a-5p和VEGF mRNA表达水平降低(P<0.05),DNMT3b mRNA表达水平升高(P<0.05);与FGR组和NC-MSCs-Exos组比较,miR-520a-5p-MSCs-Exos组小鼠胎盘组织中miR-520a-5p和VEGF mRNA表达水平升高(P<0.05),DNMT3b mRNA表达水平降低(P<0.05)。单因素方差分析,4组小鼠胎盘组织中DNMT3b和VEGF蛋白表达水平比较差异有统计学意义(F=245.601,F=149.360;P<0.001);组间两两比较,与对照组比较,FGR组小鼠胎盘组织中DNMT3b蛋白水平升高(P<0.05),VEGF蛋白表达水平降低(P<0.05);与FGR组和NC-MSCs-Exos组比较,miR-520a-5p-MSCs-Exos组小鼠胎盘组织中DNMT3b蛋白表达水平降低(P<0.05),VEGF蛋白表达水平升高(P<0.05)。单因素方差分析,4组小鼠胎盘组织中VEGF启动子甲基化率比较差异有统计学意义(F=687.096,P<0.001);组间两两比较,与对照组比较,FGR组小鼠胎盘组织中VEGF启动子甲基化率升高(P<0.05);与FGR组和NC-MSCs-Exos组比较,miR-520a-5p-MSCs-Exos组小鼠胎盘组织中VEGF启动子甲基化率降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验,与miR-NC组比较,miR-520a-5p组DNMT3b-WT报告载体细胞的荧光素酶活性明显降低(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-520a-5p组DNMT3b-MUT报告载体细胞的荧光素酶活性无明显改变,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:高负载miR-520a-5p的MSCs来源的Exos可能通过靶向下调DNMT3b表达,抑制VEGF甲基化,促进VEGF表达,改善FGR胎鼠妊娠结局。 展开更多
关键词 胎儿宫内生长受限 外泌体 间充质干细胞 微小RNA-520a-5p DNA甲基转移酶3B 血管内皮生长因子
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不明原因复发性流产患者绒毛组织中DNA低甲基化及机制 被引量:11
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作者 李静 于学文 +2 位作者 杨洋 王立芹 张永爱 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期351-356,共6页
目的探究不明原因复发性流产(URSA)患者绒毛组织全基因组甲基化水平和甲基化相关酶基因表达情况。方法选取URSA患者31例(URSA组)及同期正常早孕放弃妊娠行人工流产的妇女30例(对照组)。取绒毛组织,采用ELISA测定绒毛组织中总DNA的甲基... 目的探究不明原因复发性流产(URSA)患者绒毛组织全基因组甲基化水平和甲基化相关酶基因表达情况。方法选取URSA患者31例(URSA组)及同期正常早孕放弃妊娠行人工流产的妇女30例(对照组)。取绒毛组织,采用ELISA测定绒毛组织中总DNA的甲基化水平,实时定量PCR检测DNA甲基化转移酶1(DNMT1)、DNMT3a、DNMT3b、去甲基化酶10-11转位酶1(TET1)、TET2、TET3的mRNA水平,Western blot法检测DNMT1、DNMT2、DNMT3、TET1、TET2、TET3蛋白水平。免疫化学染色检测绒毛组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、TET1、TET2、TET3的表达和分布。结果与对照组相比,URSA组的全基因组甲基化水平显著降低,URSA组绒毛组织中DNMT1、DNMT3b的mRNA和蛋白水平显著降低,TET1、TET2的mRNA和蛋白水平显著增加。结论URSA妇女的流产绒毛组织呈现出低甲基化水平的状态,可能与DNMT1、DNMT3b上调,TET1、TET2下调有关。 展开更多
关键词 复发性流产 DNMT3B DNA甲基化转移酶1(DNMT1) 10-11转位酶1(TET1) TET2 甲基化
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人参皂苷Rg1对子痫前期大鼠氧化应激和炎症的调控作用及机制研究 被引量:7
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作者 宋姗姗 杨洋 +1 位作者 何静 唐俊峰 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2020年第10期1088-1096,共9页
目的:探究人参皂苷Rg1对L-亚硝酸左旋精氨酸甲酯(L-NAME)诱导的子痫前期模型大鼠的改善作用及其机制。方法:实验分为4组(n=15):空白组、模型组、人参皂苷Rg1低剂量组(25mg/kg)和高剂量(50 mg/kg)。通过L-NAME诱导建立子痫前期大鼠模型... 目的:探究人参皂苷Rg1对L-亚硝酸左旋精氨酸甲酯(L-NAME)诱导的子痫前期模型大鼠的改善作用及其机制。方法:实验分为4组(n=15):空白组、模型组、人参皂苷Rg1低剂量组(25mg/kg)和高剂量(50 mg/kg)。通过L-NAME诱导建立子痫前期大鼠模型。给药组则在妊娠第5天开始给予相应剂量的人参皂苷Rg1。在第7、13、15、17、19天检查各组实验大鼠的收缩压、舒张压及动脉压;以及测定第20天的24 h尿蛋白。在第21天处死实验大鼠,收集组织样本。采用免疫组化测定胚胎组织中胶质细胞缺失因子1(GCM-1)蛋白;试剂盒测定血清和胚胎组织中的超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性,以及丙二醛(MDA)、白介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平变化。Western blot实验检测胚胎组织中Nrf2、HO-1、NF-κB、IκBα、Bcl-2、Bax、Caspase-3、total Cyt-C和胞浆中Cyt-C蛋白表达。结果:实验结果显示,人参皂苷Rg1能够明显改善模型大鼠的收缩压、舒张压、动脉压和尿蛋白升高(P<0.05),抑制胎盘组织中GCM-1、Nrf2、HO-1、Bax、Caspase-3、total Cyt-C和胞浆中Cyt-C蛋白表达降低(P<0.05),促进NF-κB、IκBα和Bcl-2蛋白表达显著性升高(P<0.05);并能够显著性促进模型大鼠血清和胚胎组织中的SOD和CAT活性降低(P<0.05),抑制MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05)。结论:Rg1能够明显改善子痫前期孕鼠的血压和尿蛋白水平,并能够促进其胎盘组织中GCM-1蛋白表达,抑制机体氧化应激损伤、炎症反应,减少胎盘组织细胞凋亡。 展开更多
关键词 子痫前期 氧化应激 炎症 人参皂苷RG1
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miR-494通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胰岛β细胞增殖、抑制其凋亡增加胰岛素分泌 被引量:2
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作者 宋姗姗 杨洋 +1 位作者 何静 唐俊峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1003-1009,共7页
目的 探究微小RNA-494 (miR-494)与胰岛β细胞功能和妊娠糖尿病之间的关系。方法 选择20例妊娠糖尿病患者和健康体检者,反转录PCR测定其外周血miR-494的含量;培养INS-1胰岛细胞瘤细胞,分别采用含低糖(3.3 mmol/L)和高糖(16.7 mmol/L)处... 目的 探究微小RNA-494 (miR-494)与胰岛β细胞功能和妊娠糖尿病之间的关系。方法 选择20例妊娠糖尿病患者和健康体检者,反转录PCR测定其外周血miR-494的含量;培养INS-1胰岛细胞瘤细胞,分别采用含低糖(3.3 mmol/L)和高糖(16.7 mmol/L)处理后,采用ELISA测定胰岛素含量来评价胰岛细胞基础和高糖刺激的胰岛素分泌能力;采用miR-494模拟物对照、miR-494模拟物、miR-494抑制物对照、miR-494抑制物分别处理INS-1细胞24、48、72 h,收集细胞。采用噻唑蓝(MTT)法检测INS-1细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡;反转录PCR检测INS-1细胞Wnt3a、β联蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和c-Myc的mRNA表达;Western blot法检测细胞Wnt3a、β-catenin、cyclin D1、c-Myc蛋白表达。结果 与正常对照组相比,妊娠糖尿病患者空腹胰岛素、空腹血糖、1 h血糖和2 h血糖显著升高;外周血miR-494含量降低。过表达miR-494的INS-1细胞上清液胰岛素浓度增加,当给予高糖后,过表达miR-494进一步促进胰岛素分泌。过表达miR-494明显促进INS-1细胞活性,抑制INS-1细胞凋亡;miR-494能够显著性促进Wnt3a、β-catenin、cyclin D1、c-Myc的mRNA和蛋白表达,miR-494抑制物处理则结果相反。结论 miR-494通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胰岛β细胞增殖、抑制其凋亡增加胰岛素分泌。 展开更多
关键词 妊娠糖尿病 WNT β联蛋白(β-catenin) 微小RNA-494(miR-494) 胰岛Β细胞
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Smad3通过p38/MAPK信号通路调控细胞自噬及凋亡促进胰腺癌进程 被引量:5
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作者 张旭东 刘浩昂 +5 位作者 王志浩 兰凯 陈蕊 李凯 刘树义 Rajiv Kumar JHA 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第19期1968-1978,共11页
目的观察Smad3对胰腺癌细胞Panc-1、BxPC-3凋亡、自噬的影响,初步探讨Smad3表达水平影响胰腺癌进程的可能机制。方法基于GEPIA2数据库进行生物信息学分析,探究Smad3与胰腺癌发生、发展及生存的相关性。利用CRISPR/Cas9系统以及短发卡RNA... 目的观察Smad3对胰腺癌细胞Panc-1、BxPC-3凋亡、自噬的影响,初步探讨Smad3表达水平影响胰腺癌进程的可能机制。方法基于GEPIA2数据库进行生物信息学分析,探究Smad3与胰腺癌发生、发展及生存的相关性。利用CRISPR/Cas9系统以及短发卡RNA(ShRNA)敲除及敲减Smad3的表达,采用Real-Time quantitative PCR(qPCR)和Western blot检测细胞中Smad3 mRNA和蛋白水平变化。实验组转入ShSmad3-1、ShSmad3-2序列,将不靶向任何基因的Sh-Scramble序列作为对照组(Scr)。将转入Smad3 guide RNA(gRNA)序列作为CRISPR/Cas9的实验组,转入空载质粒的作为CRISPR/Cas9的对照组。采用Western blot检测细胞中LC3、p62、p38以及p-p38蛋白变化情况,同时在敲减Smad3的胰腺癌细胞用PI-Annexin V试剂盒染色并进行流式分析。利用pLVX-Smad3质粒进行回补实验,并用p38抑制剂SB203580处理细胞检测相关蛋白的变化情况。结果GEPIA2数据库及临床标本分析结果显示,Smad3在胰腺癌组织中高表达(P<0.05)。在胰腺癌细胞BxPC-3中转入ShSmad3-1、ShSmad3-2后,Smad3的mRNA和蛋白水平均显著降低(P<0.05)。同时在Panc-1中转入Smad3 guide RNA筛选到2个Smad3敲除细胞系。与对照组相比,敲减Smad3胰腺癌细胞凋亡显著增加(P<0.05)。Western blot实验发现:Smad3敲减及敲除后,p-p38的蛋白水平显著增加(P<0.05),LC3、p62水平显著降低(P<0.05)。进一步通过回补实验及利用SB203580处理胰腺癌细胞,发现p62、LC3蛋白水平能回复(P<0.01)。结论干扰Smad3促进胰腺癌细胞过度自噬,进而导致细胞凋亡增加,可能与激活p38/MAPK信号通路有关。 展开更多
关键词 SMAD3 胰腺癌 细胞凋亡 自噬
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NF-κb和PCNA在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变中的表达及临床意义 被引量:1
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作者 刘爽 李瑶 张斌 《中国医学前沿杂志(电子版)》 2015年第11期55-58,共4页
目的探讨分析核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在宫颈病变过程中的表达及临床特征。方法采用免疫组织化学SP法检测NF-κB和PCNA在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变(cervic... 目的探讨分析核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在宫颈病变过程中的表达及临床特征。方法采用免疫组织化学SP法检测NF-κB和PCNA在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)(Ⅰ~Ⅲ)及宫颈鳞癌组织中的阳性表达率。结果 1 NF-κB在正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ、宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为12.9%、35.0%、52.0%、78.8%;PCNA在正常宫颈、CINI、CINⅡ~Ⅲ及宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为16.1%、50.0%、72.0%、90.9%;2 NF-κB和PCNA在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率与临床分期、病理分级及淋巴结转移相关(P〈0.05);与年龄无显著相关性(P〉0.05);3 NF-κB与PCNA在宫颈鳞癌组织中的表达呈正相关(r=0.609,P〈0.05)。结论 NF-κB和PCNA可能参与宫颈病变过程,联合检测二者在宫颈组织中的表达情况,可作为宫颈疾病的鉴别、诊断及评估等辅助手段。 展开更多
关键词 宫颈鳞癌 宫颈上皮内瘤变 核因子ΚB 增殖细胞核抗原 SP法
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