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慢病毒介导的中性内肽酶对Aβ诱导的SK-N-SH细胞凋亡的影响 被引量:2
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作者 任凯 崔云燕 +5 位作者 邵世滨 张亚伦 杨玲玲 段珊 丁岩 崔行 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2470-2474,共5页
目的:探讨脑中性内肽酶(NEP)外源表达对神经毒物质β淀粉样肽(Aβ)诱导SK-N-SH细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体法将含中性内肽酶NEP的四质粒系统慢病毒载体转染293FT包装细胞,制备高滴度病毒载体,感染Aβ处理的SK-N-SH细胞,用Western b... 目的:探讨脑中性内肽酶(NEP)外源表达对神经毒物质β淀粉样肽(Aβ)诱导SK-N-SH细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体法将含中性内肽酶NEP的四质粒系统慢病毒载体转染293FT包装细胞,制备高滴度病毒载体,感染Aβ处理的SK-N-SH细胞,用Western blotting方法检测NEP对Aβ的降解作用、MTT法检测细胞存活率、流式细胞术分析细胞凋亡情况、RT-PCR技术测定凋亡相关基因bcl-2及bax的表达及caspase-3活性检测。结果:胞内高表达的NEP能够显著降解Aβ,其降解程度与NEP的表达量有剂量依赖关系。细胞存活率及流式细胞术检测结果显示NEP高表达可减轻Aβ诱导的细胞凋亡,细胞存活率于感染病毒后48 h最强,为对照的170%(P<0.01),NEP活性组的凋亡率为3.86%,低于对照组的6.41%;RT-PCR结果显示NEP对Aβ诱导的细胞凋亡保护作用可能是通过减少bax的表达,抑制了caspase-3的激活程度来实现的。结论:NEP可以降解Aβ,可以保护由Aβ沉积所致的神经细胞凋亡。 展开更多
关键词 中性内肽酶 慢病毒载体 Β淀粉样肽 细胞凋亡 阿尔茨海默病
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鞘脂激活蛋白C通过上调雄激素受体的表达与活性促进LNCaP细胞的增殖 被引量:1
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作者 任凯 丁岩 +2 位作者 成凡 付慧 张雅利 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期619-622,共4页
目的构建含有鞘脂激活蛋白C(Saposin C)的真核表达载体,探讨Saposin C在前列腺癌雄激素依赖性前列腺细胞(LNCaP)中对雄激素受体(AR)及细胞增殖的影响。方法通过cDNA法构建含有TAT和Saposin C的真核表达载体,并将其转染至前列腺癌LNCaP... 目的构建含有鞘脂激活蛋白C(Saposin C)的真核表达载体,探讨Saposin C在前列腺癌雄激素依赖性前列腺细胞(LNCaP)中对雄激素受体(AR)及细胞增殖的影响。方法通过cDNA法构建含有TAT和Saposin C的真核表达载体,并将其转染至前列腺癌LNCaP细胞。通过MTS、RT-PCR、Western blot等实验,分别检测TAT-Saposin C与Saposin C的AR基因表达与其转录激活功能,以及对前列腺癌细胞增殖的影响。结果在不依赖雄激素的情况下,Saposin C能够上调AR与PSA基因mRNA和蛋白质水平的表达,增加AR的转录激活活性,刺激LNCaP细胞的增殖。结论 Saposin C通过雄激素非依赖性上调AR的表达与转录激活活性,促进LNCaP细胞的增殖。 展开更多
关键词 鞘脂激活蛋白C 雄激素受体 前列腺特异性抗原 前列腺癌 细胞增殖 雄激素依赖性前列腺细胞
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Saposin C抑制雄激素受体的多泛素化以及在蛋白酶体中的降解(英文)
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作者 任凯 任立刚 +1 位作者 丁岩 张雅利 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期462-467,共6页
本研究旨在证实鞘脂活化蛋白C(saposin C)对雄激素受体(AR)多泛素化降解的影响及其机制.通过将真核表达载体saposin C转染LNCaP细胞,发现saposin C上调AR的蛋白水平和转录激活活性.进一步将野生型和突变型泛素质粒Ubwt和UbK48R分别与sap... 本研究旨在证实鞘脂活化蛋白C(saposin C)对雄激素受体(AR)多泛素化降解的影响及其机制.通过将真核表达载体saposin C转染LNCaP细胞,发现saposin C上调AR的蛋白水平和转录激活活性.进一步将野生型和突变型泛素质粒Ubwt和UbK48R分别与saposin C共转染LNCaP细胞发现,saposin C能够促进AR蛋白的单泛素化形式的稳定性,抑制AR的多泛素化修饰及其在蛋白酶体中的降解.其分子机制是saposin C、Ub和AR三者形成复合体,抑制了AR的进一步多泛素化过程.同时还发现,在这一机制中,细胞内低浓度的雄激素(0.1 nmol/L)与saposin C具有协同作用. 展开更多
关键词 鞘脂活化蛋白C 雄激素受体 泛素一蛋白酶体系统 前列腺癌
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丙型肝炎病毒1b DY株ns5a基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
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作者 付慧 楚雍烈 +4 位作者 张丽莉 曹美茹 成凡 茹小荣 王勇健 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期376-379,398,共5页
目的克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)1b型地方株DY株ns5a基因。方法运用原核细胞基因工程技术。设计目的基因的特异引物,采用巢式PCR法,从含HCV 1b DY株全长cDNA的质粒HCV17中扩增出约480 bp的目的片段,将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,... 目的克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)1b型地方株DY株ns5a基因。方法运用原核细胞基因工程技术。设计目的基因的特异引物,采用巢式PCR法,从含HCV 1b DY株全长cDNA的质粒HCV17中扩增出约480 bp的目的片段,将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,再亚克隆到原核表达载体pET-28a中;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达;采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS5A蛋白的表达水平。结果成功构建了含有HCV1b DY株ns5a基因的重组体,并得以表达。结论成功构建和表达了HCV1b DY株ns5a基因,为进一步研究HCVns5a的基因型及探讨该基因编码的NS5A蛋白的性质和生物学活性创造了条件。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns5a基因 基因表达
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Ⅰ型糖尿病病理研究进展
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作者 宋问之 任凯 丁岩 《生物学教学》 2013年第4期2-4,共3页
Ⅰ型糖尿病是一种自体免疫疾病,临床病理表现为免疫系统攻击并杀死全部胰岛β细胞,发病机制至今不甚明确。本文从控制细胞表面人类白细胞抗原表达和编码免疫调节所需蛋白质的两种基因座切入,选取研究中的典型示例,着重介绍Ⅰ型糖尿病病... Ⅰ型糖尿病是一种自体免疫疾病,临床病理表现为免疫系统攻击并杀死全部胰岛β细胞,发病机制至今不甚明确。本文从控制细胞表面人类白细胞抗原表达和编码免疫调节所需蛋白质的两种基因座切入,选取研究中的典型示例,着重介绍Ⅰ型糖尿病病理研究在基因致病方面的最新进展和总体方向,总结概括研究者迄今已掌握的病理机制。 展开更多
关键词 Ⅰ型糖尿病 病理 人类白细胞抗原 蛋白酪氨酸磷酸化酶
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