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miR-130b-5p下调胰岛素样生长因子-1抑制人绒毛膜滋养层细胞迁移及侵袭的作用及机制 被引量：1
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作者 相萌 张旭东 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期539-547,共9页
【目的】探究微小RNA 130b-5p(miR-130b-5p)靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)迁移及侵袭的影响。【方法】将HTR8/SVneo细胞分为对照组、miR-NC组、miR-130b-5pmimics组、miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1组和m... 【目的】探究微小RNA 130b-5p(miR-130b-5p)靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)迁移及侵袭的影响。【方法】将HTR8/SVneo细胞分为对照组、miR-NC组、miR-130b-5pmimics组、miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1组和miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1-IGF-1组,双荧光素酶报告基因检测miR-130b-5p和IGF-1的靶向关系;采用实时荧光定量PCR检测HTR8/SVneo细胞样本中miR-130b-5p及IGF-1表达水平;采用CCK-8法检测HTR8/SVneo细胞增殖情况;采用全息细胞仪及Transwell法分析HTR8/SVneo细胞迁移、侵袭能力;Western blot法检测HTR8/SVneo细胞样本中IGF-1及侵袭、上皮间充质转化(EMT)蛋白表达情况。【结果】双荧光素酶报告基因结果显示,IGF-1是miR-130b-5p的潜在靶基因;相较于miR-NC组,miR-130b-5pmimics组中miR-130b-5p表达水平、细胞增殖抑制率、钙粘附蛋白E(E-cadherin)表达水平显著增加,IGF-1、c-Myc、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达水平、迁移距离、侵袭细胞数、基质金属蛋白酶9(MMP9)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、神经型钙粘附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平显著降低(P<0.05);相较于miR-130b-5pmimics+pcD⁃NA3.1组,miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1-IGF-1组中细胞增殖抑制率、E-cadherin表达水平显著降低,c-Myc、Cy⁃clinD1表达水平、迁移距离、侵袭细胞数、MMP9、MMP2、Vimentin和N-cadherin表达水平显著增加(P<0.05)。【结论】miR-130b-5p过表达可能通过抑制IGF-1表达来抑制HTR8/SVneo细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 人绒毛膜滋养层细胞 胰岛素样生长因子-1 微小RNA 130b-5p 迁移 侵袭
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外泌体负载的miR-520a-5p对胎鼠宫内生长受限妊娠结局的改善作用及其机制
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作者 相萌 徐冰 +2 位作者 王培莎 刘思旗 张少华 《吉林大学学报(医学版)》 2025年第5期1230-1239,共10页
目的:探讨外泌体(Exos)负载的微小RNA-520a-5p(miR-520a-5p)对胎鼠宫内生长受限(FGR)妊娠结局的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养小鼠胎盘间充质干细胞(MSCs),并利用miR-520a-5p腺病毒载体(Ad-miR-520a-5p)转染获得高负载miR-520a... 目的:探讨外泌体(Exos)负载的微小RNA-520a-5p(miR-520a-5p)对胎鼠宫内生长受限(FGR)妊娠结局的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养小鼠胎盘间充质干细胞(MSCs),并利用miR-520a-5p腺病毒载体(Ad-miR-520a-5p)转染获得高负载miR-520a-5p的Exos(miR-520a-5p-MSCs-Exos)并进行鉴定。C57BL/6小鼠按照雌雄2∶1的比例合笼交配成功妊娠,将40只怀孕小鼠分为对照组、FGR组、NC-MSCs-Exos组和miR-520a-5p-MSCs-Exos组,每组10只。除对照组外,其余组小鼠采用孕期过度暴露地塞米松(DEX)诱发妊娠期母体小鼠的FGR模型。检测胎鼠出生体质量和生后1、2、3及4周体质量,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组小鼠胎盘组织中miR-520a-5p、DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组小鼠胎盘组织中DNMT3b和VEGF蛋白表达水平,甲基化特异性PCR(MSP)分析各组小鼠胎盘组织中VEGF启动子甲基化率,双荧光素酶报告基因实验验证miR-520a-5p与DNMT3b之间的靶向关系。结果:透射电子显微镜(TEM)和纳米粒子追踪分析(NTA)分析,Exos呈球形,粒径集中在100 nm附近;Western blotting法,Exos表面生物标志物CD63和CD81均呈阳性表达;RT-qPCR法,与NC-MSCs-Exos和Ad-NC-MSCs-Exos比较,Ad-miR-520a-5p-MSCs-Exos中miR-520a-5p表达水平升高(P<0.001)。4组子代小鼠出生体质量和生后1、2及3周体质量比较差异均有统计学意义(F=36.084,F=19.851,F=77.755,F=103.223;P<0.001)。与对照组比较,FGR组子代小鼠出生体质量和生后1、2及3周体质量均降低(P<0.05);与FGR组和NC-MSCs-Exos组比较,miR-520a-5p-MSCs-Exos组子代小鼠出生体质量和生后1、2及3周体质量均升高(P<0.05)。单因素方差分析,4组小鼠胎盘组织中miR-520a-5p、DNMT3b和VEGF mRNA表达水平比较差异有统计学意义(F=103.224,F=856.460,F=214.563;P<0.001);组间两两比较,与对照组比较,FGR组小鼠胎盘组织中miR-520a-5p和VEGF mRNA表达水平降低(P<0.05),DNMT3b mRNA表达水平升高(P<0.05);与FGR组和NC-MSCs-Exos组比较,miR-520a-5p-MSCs-Exos组小鼠胎盘组织中miR-520a-5p和VEGF mRNA表达水平升高(P<0.05),DNMT3b mRNA表达水平降低(P<0.05)。单因素方差分析,4组小鼠胎盘组织中DNMT3b和VEGF蛋白表达水平比较差异有统计学意义(F=245.601,F=149.360;P<0.001);组间两两比较,与对照组比较,FGR组小鼠胎盘组织中DNMT3b蛋白水平升高(P<0.05),VEGF蛋白表达水平降低(P<0.05);与FGR组和NC-MSCs-Exos组比较,miR-520a-5p-MSCs-Exos组小鼠胎盘组织中DNMT3b蛋白表达水平降低(P<0.05),VEGF蛋白表达水平升高(P<0.05)。单因素方差分析,4组小鼠胎盘组织中VEGF启动子甲基化率比较差异有统计学意义(F=687.096,P<0.001);组间两两比较,与对照组比较,FGR组小鼠胎盘组织中VEGF启动子甲基化率升高(P<0.05);与FGR组和NC-MSCs-Exos组比较,miR-520a-5p-MSCs-Exos组小鼠胎盘组织中VEGF启动子甲基化率降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验,与miR-NC组比较,miR-520a-5p组DNMT3b-WT报告载体细胞的荧光素酶活性明显降低(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-520a-5p组DNMT3b-MUT报告载体细胞的荧光素酶活性无明显改变,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:高负载miR-520a-5p的MSCs来源的Exos可能通过靶向下调DNMT3b表达,抑制VEGF甲基化,促进VEGF表达,改善FGR胎鼠妊娠结局。 展开更多
关键词 胎儿宫内生长受限 外泌体 间充质干细胞 微小RNA-520a-5p DNA甲基转移酶3b 血管内皮生长因子
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