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中草药初提物对肺癌细胞A549的生长抑制及诱导调亡作用
被引量：
3
1
作者
李秋萍
刘丛
+2 位作者
唐祖明
陈沁
李炯
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2016年第3期240-244,共5页
目的肿瘤是因细胞增殖、凋亡等调控机制异常而引起的疾病,目前依然严重危害着人类健康。文中主要探究中草药初提物诱导肺癌细胞凋亡和抑制增殖的作用。方法以肺癌细胞A549为对象,实验设空白对照（0 ng/m L）、中草药初提物设不同剂量（...
目的肿瘤是因细胞增殖、凋亡等调控机制异常而引起的疾病,目前依然严重危害着人类健康。文中主要探究中草药初提物诱导肺癌细胞凋亡和抑制增殖的作用。方法以肺癌细胞A549为对象,实验设空白对照（0 ng/m L）、中草药初提物设不同剂量（170、340、680 ng/m L）组,培养箱中24、48 h培养。采用CCK8法和LDH法检测中草药初提物对肺癌细胞的生长抑制作用;利用荧光显微镜、流式细胞仪检测细胞调亡;以实时定量PCR和蛋白免疫印迹法检测中草药初提物对h TERT mRNA、Cleaved caspase-3和Cleaved PARP蛋白的相对表达量。结果随着初提物浓度（170、340、680 ng/m L）和处理时间（24、48 h）的增加,A549细胞存活率也随之降低,损伤率提高（P〈0.05）,IC50为510 ng/m L。空白对照（未用药处理）无DNA损伤的细胞表现为一圆形荧光细胞核,680 ng/m L A549细胞DNA呈典型的凋亡彗星尾形状。680 ng/m L初提物作用后A549尾部DNA含量较空白对照增加（P〈0.01）。流式细胞分析仪检测表明,随着初提物浓度的升高和处理时间的延长,A549细胞凋亡率逐步升高。340 ng/m L提取物处理A549细胞24 h后h TERT mRNA表达量较0 h下调[0.25（0.23~0.28）vs 1.00（0.91~1.09）],差异有统计学意义（P〈0.01）。随初提物浓度增加,A549 Cleaved caspase3和Cleaved PARP表达量增多。结论初提物通过下调h TERT mRNA表达,促进Cleaved caspase-3、Cleaved PARP蛋白的表达来诱导细胞凋亡。
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关键词
初提物
细胞凋亡
彗星实验
HTERT
CASPASE
3
PARP
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职称材料
靶向EGFR免疫毒素BI7D12-PE38KDEL的制备及其体外活性测定
被引量：
3
2
作者
毛春燕
安钢力
+4 位作者
王祥岭
翟晓晨
孟会敏
游凤涛
杨林(指导)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期558-562,573,共6页
目的:构建基于EGFR纳米抗体的免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,并检测其对EGFR肿瘤细胞的细胞毒作用。方法:采用分子克隆技术,将靶向EGFR的纳米抗体7D12以二价的形式,通过柔性连接肽(G4S)4与铜绿假单胞菌外毒素的截断形式PE38KDEL连接,构建原...
目的:构建基于EGFR纳米抗体的免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,并检测其对EGFR肿瘤细胞的细胞毒作用。方法:采用分子克隆技术,将靶向EGFR的纳米抗体7D12以二价的形式,通过柔性连接肽(G4S)4与铜绿假单胞菌外毒素的截断形式PE38KDEL连接,构建原核表达载体p ET28a-BI7D12-PE38KDEL。然后将其转化到BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达。通过镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,并经Western blot验证。通过流式细胞技术检测该免疫毒素与EGFR阳性细胞A549、HT29、MCF-7和EGFR阴性细胞CEM、Jurkat的结合能力后,将其按照一定的浓度梯度进行细胞毒实验研究,72 h后,使用WST-1试剂检测BI7D12-PE38KDEL对上述细胞的杀伤效果。结果:通过SDS-PAGE和Western blot实验验证,成功的制备了重组免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,该毒素大部分以可溶性的方式表达。BI7D12-PE38KDEL能够与EGFR阳性的A549、HT29、MCF-7肿瘤细胞特异性的结合,并且对上述细胞的细胞毒作用与阴性对照组CEM和Jurkat相比具有极其显著性差异(P<0.01)。结论:成功地构建了基于EGFR纳米抗体的重组免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,该免疫毒素能特异性的结合并杀伤EGFR阳性的肿瘤细胞。
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关键词
表皮生长因子受体
纳米抗体7D12
免疫毒素
铜绿假单胞菌外毒素PE38KDEL
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职称材料
题名
中草药初提物对肺癌细胞A549的生长抑制及诱导调亡作用
被引量：
3
1
作者
李秋萍
刘丛
唐祖明
陈沁
李炯
机构
上海
大学
生命科学学
院
西安交通大学苏州研究生院
东南
大学
生物科学与医学工程学
院
中国科学
院
苏州
纳米技术与纳米仿生
研究
所
出处
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2016年第3期240-244,共5页
基金
国家自然科学基金(61379025,31300301,31300817)
文摘
目的肿瘤是因细胞增殖、凋亡等调控机制异常而引起的疾病,目前依然严重危害着人类健康。文中主要探究中草药初提物诱导肺癌细胞凋亡和抑制增殖的作用。方法以肺癌细胞A549为对象,实验设空白对照（0 ng/m L）、中草药初提物设不同剂量（170、340、680 ng/m L）组,培养箱中24、48 h培养。采用CCK8法和LDH法检测中草药初提物对肺癌细胞的生长抑制作用;利用荧光显微镜、流式细胞仪检测细胞调亡;以实时定量PCR和蛋白免疫印迹法检测中草药初提物对h TERT mRNA、Cleaved caspase-3和Cleaved PARP蛋白的相对表达量。结果随着初提物浓度（170、340、680 ng/m L）和处理时间（24、48 h）的增加,A549细胞存活率也随之降低,损伤率提高（P〈0.05）,IC50为510 ng/m L。空白对照（未用药处理）无DNA损伤的细胞表现为一圆形荧光细胞核,680 ng/m L A549细胞DNA呈典型的凋亡彗星尾形状。680 ng/m L初提物作用后A549尾部DNA含量较空白对照增加（P〈0.01）。流式细胞分析仪检测表明,随着初提物浓度的升高和处理时间的延长,A549细胞凋亡率逐步升高。340 ng/m L提取物处理A549细胞24 h后h TERT mRNA表达量较0 h下调[0.25（0.23~0.28）vs 1.00（0.91~1.09）],差异有统计学意义（P〈0.01）。随初提物浓度增加,A549 Cleaved caspase3和Cleaved PARP表达量增多。结论初提物通过下调h TERT mRNA表达,促进Cleaved caspase-3、Cleaved PARP蛋白的表达来诱导细胞凋亡。
关键词
初提物
细胞凋亡
彗星实验
HTERT
CASPASE
3
PARP
Keywords
Herbextracts
Apoptosis
Comet assay
hTERT
caspase 3
PARP
分类号
R285 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
靶向EGFR免疫毒素BI7D12-PE38KDEL的制备及其体外活性测定
被引量：
3
2
作者
毛春燕
安钢力
王祥岭
翟晓晨
孟会敏
游凤涛
杨林(指导)
机构
苏州
大学
唐仲英血液学
研究
中心
西安交通大学苏州研究生院
博生吉医药科技(
苏州
)有限公司
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期558-562,573,共6页
基金
山东省自然科学基金资助项目(ZR2015PH029)
文摘
目的:构建基于EGFR纳米抗体的免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,并检测其对EGFR肿瘤细胞的细胞毒作用。方法:采用分子克隆技术,将靶向EGFR的纳米抗体7D12以二价的形式,通过柔性连接肽(G4S)4与铜绿假单胞菌外毒素的截断形式PE38KDEL连接,构建原核表达载体p ET28a-BI7D12-PE38KDEL。然后将其转化到BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达。通过镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,并经Western blot验证。通过流式细胞技术检测该免疫毒素与EGFR阳性细胞A549、HT29、MCF-7和EGFR阴性细胞CEM、Jurkat的结合能力后,将其按照一定的浓度梯度进行细胞毒实验研究,72 h后,使用WST-1试剂检测BI7D12-PE38KDEL对上述细胞的杀伤效果。结果:通过SDS-PAGE和Western blot实验验证,成功的制备了重组免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,该毒素大部分以可溶性的方式表达。BI7D12-PE38KDEL能够与EGFR阳性的A549、HT29、MCF-7肿瘤细胞特异性的结合,并且对上述细胞的细胞毒作用与阴性对照组CEM和Jurkat相比具有极其显著性差异(P<0.01)。结论:成功地构建了基于EGFR纳米抗体的重组免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,该免疫毒素能特异性的结合并杀伤EGFR阳性的肿瘤细胞。
关键词
表皮生长因子受体
纳米抗体7D12
免疫毒素
铜绿假单胞菌外毒素PE38KDEL
Keywords
Epidermal growth factor receptor（EGFR）
Nanobody 7D12
Immunotoxin
Pseudomonas exotoxin PE38KDEL
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
中草药初提物对肺癌细胞A549的生长抑制及诱导调亡作用
李秋萍
刘丛
唐祖明
陈沁
李炯
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2016
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
靶向EGFR免疫毒素BI7D12-PE38KDEL的制备及其体外活性测定
毛春燕
安钢力
王祥岭
翟晓晨
孟会敏
游凤涛
杨林(指导)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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参考文献
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