目的 研究PPAR-γ、PDGF-βR及FAK在肺动脉平滑肌细胞迁移中的分子调控机制。方法 分离大鼠肺动脉平滑肌细胞,培养至3-7代细胞用于实验。分为4组,CON组:常规培养细胞;PDGF-BB组:细胞同步化后加入PDGF-BB(20 ng/ml),刺激1 h后裂解细胞;Y1...目的 研究PPAR-γ、PDGF-βR及FAK在肺动脉平滑肌细胞迁移中的分子调控机制。方法 分离大鼠肺动脉平滑肌细胞,培养至3-7代细胞用于实验。分为4组,CON组:常规培养细胞;PDGF-BB组:细胞同步化后加入PDGF-BB(20 ng/ml),刺激1 h后裂解细胞;Y15组:细胞同步化后加入PDGF-BB(20 ng/ml)预刺激1 h,再加入FAK抑制剂Y15(10 μmol/L)刺激2 h后裂解细胞;ROSI组:细胞同步化后加入罗格列酮(10 μmol/L)刺激1 h,再加入PDGF-BB刺激1 h后裂解细胞。裂解各组处理细胞,Western blot检测各组p-PDGF-βR、p-FAK(Tyr397)水平;划痕实验及Transwell方法比较细胞迁移能力。结果 PDGF-BB组细胞迁移能力较CON组明显增强(77.3%± 4.2% vs 61.3%± 3.5%, P <0.05),p-PDGF-βR、p-FAK(Tyr397)水平提高(2.2 ± 0.12 vs 0.93 ± 0.11;1.07 ± 0.08 vs 0.39 ± 0.02, P <0.05)。Y15组细胞迁移能力较PDGF-BB组明显降低(72.7%± 4.7% vs 77.3%± 4.2%, P <0.05),p-PDGF-βR无明显变化(2.0 ± 0.10 vs 2.2 ± 0.12, P >0.05),p-FAK(Tyr397)水平降低(0.48 ± 0.09 vs 1.07 ± 0.08, P <0.05)。ROSI组细胞迁移能力较Y15组差异无统计学意义(75.3%± 4.04% vs 72.7%± 4.70%, P >0.05),p-PDGF-βR水平降低(1.25 ± 0.10 vs 2.0 ± 0.10, P <0.05);p-FAK(Tyr397)水平提高(0.52 ± 0.07 vs 0.48 ± 0.09, P <0.05);而与PDGF-BB组比较,ROSI组细胞迁移能力(77.3%± 4.2% vs 75.3%± 4.04%)及p-PDGF-βR(2.2 ± 0.12 vs 1.25 ± 0.10)、p-FAK(Tyr397)水平(1.07 ± 0.08 vs 0.52 ± 0.07)均显著降低( P <0.05)。Transwell迁移小室实验结果同划痕实验结果。结论 PPAR-γ/PDGF-βR/FAK(Tyr397)通路,可能是抑制肺动脉平滑肌细胞迁移机制之一。展开更多
文摘目的 研究PPAR-γ、PDGF-βR及FAK在肺动脉平滑肌细胞迁移中的分子调控机制。方法 分离大鼠肺动脉平滑肌细胞,培养至3-7代细胞用于实验。分为4组,CON组:常规培养细胞;PDGF-BB组:细胞同步化后加入PDGF-BB(20 ng/ml),刺激1 h后裂解细胞;Y15组:细胞同步化后加入PDGF-BB(20 ng/ml)预刺激1 h,再加入FAK抑制剂Y15(10 μmol/L)刺激2 h后裂解细胞;ROSI组:细胞同步化后加入罗格列酮(10 μmol/L)刺激1 h,再加入PDGF-BB刺激1 h后裂解细胞。裂解各组处理细胞,Western blot检测各组p-PDGF-βR、p-FAK(Tyr397)水平;划痕实验及Transwell方法比较细胞迁移能力。结果 PDGF-BB组细胞迁移能力较CON组明显增强(77.3%± 4.2% vs 61.3%± 3.5%, P <0.05),p-PDGF-βR、p-FAK(Tyr397)水平提高(2.2 ± 0.12 vs 0.93 ± 0.11;1.07 ± 0.08 vs 0.39 ± 0.02, P <0.05)。Y15组细胞迁移能力较PDGF-BB组明显降低(72.7%± 4.7% vs 77.3%± 4.2%, P <0.05),p-PDGF-βR无明显变化(2.0 ± 0.10 vs 2.2 ± 0.12, P >0.05),p-FAK(Tyr397)水平降低(0.48 ± 0.09 vs 1.07 ± 0.08, P <0.05)。ROSI组细胞迁移能力较Y15组差异无统计学意义(75.3%± 4.04% vs 72.7%± 4.70%, P >0.05),p-PDGF-βR水平降低(1.25 ± 0.10 vs 2.0 ± 0.10, P <0.05);p-FAK(Tyr397)水平提高(0.52 ± 0.07 vs 0.48 ± 0.09, P <0.05);而与PDGF-BB组比较,ROSI组细胞迁移能力(77.3%± 4.2% vs 75.3%± 4.04%)及p-PDGF-βR(2.2 ± 0.12 vs 1.25 ± 0.10)、p-FAK(Tyr397)水平(1.07 ± 0.08 vs 0.52 ± 0.07)均显著降低( P <0.05)。Transwell迁移小室实验结果同划痕实验结果。结论 PPAR-γ/PDGF-βR/FAK(Tyr397)通路,可能是抑制肺动脉平滑肌细胞迁移机制之一。
