目的 探讨基于PDZ结合基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif, TAZ)在卵巢癌中的表达情况,并进一步分析其在卵巢癌中的作用机制。方法 利用仙桃学术分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TC...目的 探讨基于PDZ结合基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif, TAZ)在卵巢癌中的表达情况,并进一步分析其在卵巢癌中的作用机制。方法 利用仙桃学术分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TCGA)数据库中卵巢癌组织及正常对照组织中TAZ mRNA表达水平,并进行受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic, ROC)分析。通过人类蛋白质图谱(The Human Protein Atlas, HPA)数据库提供的免疫组化切片,分析TAZ蛋白在卵巢癌组织及正常对照组织中的表达。将卵巢癌细胞SKOV3分为2组:阴性对照组和缺氧组,采用实时定量PCR和Western blot分别检测TAZ的mRNA及蛋白表达;在HIF-2α过表达质粒转染SKOV3细胞后,检测TAZ的表达变化。获取TCGA数据库中376例卵巢癌RNAseq数据及相应的临床信息,通过基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析TAZ相关的差异表达基因,并分析TAZ高、低表达组中铁死亡相关基因的表达差异。结果 卵巢癌中Hippo通路核心分子TAZ的mRNA水平显著下调(P<0.05),蛋白水平上调,TAZ在卵巢癌诊断中的曲线下面积为0.739。与对照组比较,缺氧组SKOV3细胞中TAZ的表达水平显著升高(P<0.05)。转染HIF-2α过表达质粒后,TAZ的mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05)。富集分析结果显示,TAZ可能参与细胞外基质-受体相互作用、局灶黏附、PI3K-Akt信号通路、胶原纤维结构等信号通路及生物学过程。此外,部分铁死亡相关基因的表达在TAZ高、低表达组间存在显著差异。结论 TAZ在卵巢癌中呈现异常表达,并与缺氧反应及铁死亡等关键生物过程密切相关,提示其作为卵巢癌潜在生物标志物和治疗靶点的可能性。展开更多
目的探讨miR-603抑制宫颈癌细胞增殖和迁移的机制。方法采用基因编辑系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated nuclease 9,CRISPR/Cas9)分别敲除宫颈癌细胞SiHa中人乳头瘤病毒16(human papil...目的探讨miR-603抑制宫颈癌细胞增殖和迁移的机制。方法采用基因编辑系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated nuclease 9,CRISPR/Cas9)分别敲除宫颈癌细胞SiHa中人乳头瘤病毒16(human papilloma virus 16,HPV16)E6、E7后采用real-time PCR检测miR-603的表达。将宫颈癌细胞SiHa分为4组:mimic NC组、mimic 603组、inhibitor NC组和inhibitor 603组,将mimic NC、mimic 603、inhibitor NC及inhibitor 603分别转染SiHa细胞,通过real-time PCR检测miR-603的表达水平,CCK-8法检测SiHa细胞增殖能力,Transwell小室法检测SiHa细胞迁移能力。双荧光素酶报告试验检测miR-603是否与IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQ motif-containing GTPase activating protein 3,IQGAP3)直接结合,Western blotting检测IQGAP3蛋白表达。UALCAN(The University of Alabama at Birmingham cancer data analysis portal)数据库分析IQGAP3在肿瘤中的表达情况;通过肿瘤细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)数据库分析IQGAP3在宫颈癌细胞系中的表达;利用分析癌症基因表达和病毒感染的交互式在线数据库(an interactive online database for analysis of gene expression and viral infection in cancer,OncoDB)分析IQGAP3与宫颈癌患者HPV感染的相关性。结果敲除HPV16 E6、E7后miR-603的表达升高(P<0.05)。过表达miR-603后,SiHa细胞的增殖和迁移能力下降(P<0.05);敲低miR-603后,SiHa细胞的增殖和迁移能力增强(P<0.05)。双荧光素酶报告试验提示IQGAP3是miR-603的直接靶点,过表达miR-603后,IQGAP3的表达降低,敲低miR-603可促进IQGAP3的表达。UALCAN数据库显示IQGAP3在多种肿瘤组织中表达高于正常对照,OncoDB数据库分析发现HPV16、18阳性患者IQGAP3表达均高于阴性患者。使用CCLE数据库分析IQGAP3在宫颈癌细胞系的表达,发现HPV阴性C33A细胞中IQGAP3表达明显低于HPV16阳性CASKI、SiHa细胞,以及HPV18阳性HELA、C4I、C4II及MS751细胞。结论敲除HPV16 E6、E7后miR-603表达上调,miR-603可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖和迁移,这可能与其直接靶向宫颈癌中高表达的IQGAP3有关。展开更多
目的探讨基因组拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV-seq)技术及染色体核型分析在染色体异常检测中的应用价值。方法采用CNV-seq技术和传统的染色体核型分析对42例患者进行染色体分析,对比分析两种检测方法的优势及局...目的探讨基因组拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV-seq)技术及染色体核型分析在染色体异常检测中的应用价值。方法采用CNV-seq技术和传统的染色体核型分析对42例患者进行染色体分析,对比分析两种检测方法的优势及局限性。结果CNV-seq结果显示,42例标本中染色体拷贝数异常7例,检出率为 16.67%;而染色体核型分析结果显示,存在8例染色体异常(其中染色体结构异常6例,数目异常2例),检出率为 19.04%;此外,还检出4例为染色体多态性变异。结论CNV-seq技术不仅能检测出常规的染色体数目和结构异常(尤其能对来源未知的染色体片段提供更为精准的检测信息),还能检测到100 kb以上的染色体片段的微缺失和微重复;CNV-seq技术不能检测染色体平衡易位和倒位等。传统的染色体核型分析联合CNV-seq检测将会为染色体异常患者提供更为精确的临床诊断。展开更多
目的初步探讨原代角质形成细胞接受不同剂量中波紫外线(UVB)照射后细胞增殖和自噬的变化情况。方法分离人皮肤角质形成细胞,用0,10,20,40 m J/cm^2剂量UVB照射细胞,照射后12 h,MTT法检测细胞增殖活力,MDC染色检测细胞自噬表达阳性率,Wes...目的初步探讨原代角质形成细胞接受不同剂量中波紫外线(UVB)照射后细胞增殖和自噬的变化情况。方法分离人皮肤角质形成细胞,用0,10,20,40 m J/cm^2剂量UVB照射细胞,照射后12 h,MTT法检测细胞增殖活力,MDC染色检测细胞自噬表达阳性率,Western blot法检测不同剂量UVB照射以及照射后0,2,4,8 h自噬相关蛋白LC3的表达水平。分别使用自噬抑制剂氯喹和促进剂雷帕霉素预处理原代角质形成细胞,通过UVB照射后检测细胞的存活率。结果 UVB照射后,原代角质形成细胞的增殖活力显著降低,10,20,40 m J/cm^2照射组的A490值分别为1.067±0.028,0.968±0.056,0.889±0.018,显著低于对照组(0 m J/cm2)的1.135±0.040(F=51.079,P<0.001)。UVB照射使原代角质形成细胞的自噬表达阳性率显著增加,10,20和40 m J/cm2照射组的细胞自噬表达阳性率分别为(16.81±0.23)%,(30.66±0.59)%和(24.93±0.29)%,显著高于对照组[(9.60±0.55)%,F=2 148.2,P<0.001]。随UVB照射剂量增加,原代角质形成细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达水平逐渐升高,且20 m J/cm^2UVB照射角质形成细胞后,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达水平在照射后2 h最高,照射后4-8 h逐渐降低。雷帕霉素预处理有提高UVB照射后角质形成细胞存活率的趋势,而氯喹预处理可显著降低UVB照射后角质形成细胞的存活率,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论 10,20,40 m J/cm2的UVB照射对原代角质形成细胞增殖具有抑制作用,对细胞自噬的发生具有促进作用,氯喹抑制自噬可显著降低UVB照射后角质形成细胞的存活率。展开更多
文摘目的 探讨基于PDZ结合基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif, TAZ)在卵巢癌中的表达情况,并进一步分析其在卵巢癌中的作用机制。方法 利用仙桃学术分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TCGA)数据库中卵巢癌组织及正常对照组织中TAZ mRNA表达水平,并进行受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic, ROC)分析。通过人类蛋白质图谱(The Human Protein Atlas, HPA)数据库提供的免疫组化切片,分析TAZ蛋白在卵巢癌组织及正常对照组织中的表达。将卵巢癌细胞SKOV3分为2组:阴性对照组和缺氧组,采用实时定量PCR和Western blot分别检测TAZ的mRNA及蛋白表达;在HIF-2α过表达质粒转染SKOV3细胞后,检测TAZ的表达变化。获取TCGA数据库中376例卵巢癌RNAseq数据及相应的临床信息,通过基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析TAZ相关的差异表达基因,并分析TAZ高、低表达组中铁死亡相关基因的表达差异。结果 卵巢癌中Hippo通路核心分子TAZ的mRNA水平显著下调(P<0.05),蛋白水平上调,TAZ在卵巢癌诊断中的曲线下面积为0.739。与对照组比较,缺氧组SKOV3细胞中TAZ的表达水平显著升高(P<0.05)。转染HIF-2α过表达质粒后,TAZ的mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05)。富集分析结果显示,TAZ可能参与细胞外基质-受体相互作用、局灶黏附、PI3K-Akt信号通路、胶原纤维结构等信号通路及生物学过程。此外,部分铁死亡相关基因的表达在TAZ高、低表达组间存在显著差异。结论 TAZ在卵巢癌中呈现异常表达,并与缺氧反应及铁死亡等关键生物过程密切相关,提示其作为卵巢癌潜在生物标志物和治疗靶点的可能性。
文摘目的探讨miR-603抑制宫颈癌细胞增殖和迁移的机制。方法采用基因编辑系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated nuclease 9,CRISPR/Cas9)分别敲除宫颈癌细胞SiHa中人乳头瘤病毒16(human papilloma virus 16,HPV16)E6、E7后采用real-time PCR检测miR-603的表达。将宫颈癌细胞SiHa分为4组:mimic NC组、mimic 603组、inhibitor NC组和inhibitor 603组,将mimic NC、mimic 603、inhibitor NC及inhibitor 603分别转染SiHa细胞,通过real-time PCR检测miR-603的表达水平,CCK-8法检测SiHa细胞增殖能力,Transwell小室法检测SiHa细胞迁移能力。双荧光素酶报告试验检测miR-603是否与IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQ motif-containing GTPase activating protein 3,IQGAP3)直接结合,Western blotting检测IQGAP3蛋白表达。UALCAN(The University of Alabama at Birmingham cancer data analysis portal)数据库分析IQGAP3在肿瘤中的表达情况;通过肿瘤细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)数据库分析IQGAP3在宫颈癌细胞系中的表达;利用分析癌症基因表达和病毒感染的交互式在线数据库(an interactive online database for analysis of gene expression and viral infection in cancer,OncoDB)分析IQGAP3与宫颈癌患者HPV感染的相关性。结果敲除HPV16 E6、E7后miR-603的表达升高(P<0.05)。过表达miR-603后,SiHa细胞的增殖和迁移能力下降(P<0.05);敲低miR-603后,SiHa细胞的增殖和迁移能力增强(P<0.05)。双荧光素酶报告试验提示IQGAP3是miR-603的直接靶点,过表达miR-603后,IQGAP3的表达降低,敲低miR-603可促进IQGAP3的表达。UALCAN数据库显示IQGAP3在多种肿瘤组织中表达高于正常对照,OncoDB数据库分析发现HPV16、18阳性患者IQGAP3表达均高于阴性患者。使用CCLE数据库分析IQGAP3在宫颈癌细胞系的表达,发现HPV阴性C33A细胞中IQGAP3表达明显低于HPV16阳性CASKI、SiHa细胞,以及HPV18阳性HELA、C4I、C4II及MS751细胞。结论敲除HPV16 E6、E7后miR-603表达上调,miR-603可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖和迁移,这可能与其直接靶向宫颈癌中高表达的IQGAP3有关。
文摘目的初步探讨原代角质形成细胞接受不同剂量中波紫外线(UVB)照射后细胞增殖和自噬的变化情况。方法分离人皮肤角质形成细胞,用0,10,20,40 m J/cm^2剂量UVB照射细胞,照射后12 h,MTT法检测细胞增殖活力,MDC染色检测细胞自噬表达阳性率,Western blot法检测不同剂量UVB照射以及照射后0,2,4,8 h自噬相关蛋白LC3的表达水平。分别使用自噬抑制剂氯喹和促进剂雷帕霉素预处理原代角质形成细胞,通过UVB照射后检测细胞的存活率。结果 UVB照射后,原代角质形成细胞的增殖活力显著降低,10,20,40 m J/cm^2照射组的A490值分别为1.067±0.028,0.968±0.056,0.889±0.018,显著低于对照组(0 m J/cm2)的1.135±0.040(F=51.079,P<0.001)。UVB照射使原代角质形成细胞的自噬表达阳性率显著增加,10,20和40 m J/cm2照射组的细胞自噬表达阳性率分别为(16.81±0.23)%,(30.66±0.59)%和(24.93±0.29)%,显著高于对照组[(9.60±0.55)%,F=2 148.2,P<0.001]。随UVB照射剂量增加,原代角质形成细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达水平逐渐升高,且20 m J/cm^2UVB照射角质形成细胞后,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达水平在照射后2 h最高,照射后4-8 h逐渐降低。雷帕霉素预处理有提高UVB照射后角质形成细胞存活率的趋势,而氯喹预处理可显著降低UVB照射后角质形成细胞的存活率,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论 10,20,40 m J/cm2的UVB照射对原代角质形成细胞增殖具有抑制作用,对细胞自噬的发生具有促进作用,氯喹抑制自噬可显著降低UVB照射后角质形成细胞的存活率。
