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免疫渗滤法实验中非特异性染色封闭方法的改进
1
作者
来宝长
谭武红
+2 位作者
安静
郑瑾
王一理
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期122-124,共3页
目的选择理想的非特异性抗原封闭方法以适应基于免疫渗滤法的蛋白芯片制备。方法以杆状病毒-昆虫表达系统制备的人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白抗原为例,采用脱脂奶粉、小牛血清、牛血清白蛋白及不同组合等5种方法对非特异性抗原进行封...
目的选择理想的非特异性抗原封闭方法以适应基于免疫渗滤法的蛋白芯片制备。方法以杆状病毒-昆虫表达系统制备的人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白抗原为例,采用脱脂奶粉、小牛血清、牛血清白蛋白及不同组合等5种方法对非特异性抗原进行封闭,检测其在免疫渗滤实验中对消除非特异性染色的效果,寻找最佳封闭非特异性染色的方法。结果经过多次重复试验,并以PBS代替血清作空白试验,结果显示,目前常用的先固相然后封闭的几种方法,其封闭效果的稳定性和重复性不佳,且空白对照易出现假阳性;同时发现使用脱脂奶粉做封闭剂封闭后,由于奶粉颗粒易堵塞NC膜的孔径,影响NC膜的渗滤速度;使用小牛血清做封闭剂封闭后,由于NC膜对小牛血清的吸附而产生背景,影响结果判读;而采用20 g/L BSA先封闭后固相的方法,在实验中得到满意的结果。结论先封闭后固相的方法,在免疫渗滤实验中对非特异性抗原封闭的效果理想、结果稳定、重复性好,为一种理想的新的封闭方法。
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关键词
免疫渗滤法
非特异性染色封闭方法
人乳头瘤病毒16型(HPV
16)
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职称材料
肿瘤引流淋巴结中免疫活性细胞分布的原位分析
被引量：
2
2
作者
陈晓黎
何建军
+3 位作者
陈侃
来宝长
司履生
王一理
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期748-751,共4页
目的:观察人乳腺癌和胃癌局部引流淋巴结(LDLN)从无转移、微转移到晚期转移过程中,免疫组织学变化及免疫活性细胞(ICC)的分布特征。方法:采用传统的病理学方法,对22例乳腺癌LDLN(71个)和7例进展期胃癌LDLN(28个)进行组织形态学分类,并...
目的:观察人乳腺癌和胃癌局部引流淋巴结(LDLN)从无转移、微转移到晚期转移过程中,免疫组织学变化及免疫活性细胞(ICC)的分布特征。方法:采用传统的病理学方法,对22例乳腺癌LDLN(71个)和7例进展期胃癌LDLN(28个)进行组织形态学分类,并以抗穿孔素、抗颗粒酶B、抗CD8、抗CD56、抗CD68、抗S-100、抗CD134及抗CD25单克隆抗体(mAb)进行催化信号放大(Catalyzedsignalamplification,CSA)免疫组化染色,检测肿瘤LNDN中ICC的分布。结果:肿瘤LDLN中以副皮质区增生和窦组织细胞增生为主,细胞毒性T淋巴细胞(CTL)及树突状细胞(DC)的数量,从无转移、微转移到晚期转移过程中有逐渐减少的趋势。在无和微转移的淋巴结内,穿孔素+、颗粒酶B+及S100+DC的数量高于晚期转移淋巴结(P<0.05);而S100+DC不仅数量减少,而且其形态也有变化,呈多角形、星形,并有胞质突起,与周围淋巴细胞接触呈活化状态的DC变为椭圆形,少有胞质突起或呈短突起的静止状态的DC。CD134+细胞及CD25+细胞的数量在晚期转移淋巴结中明显高于无和微转移淋巴结(P<0.01)。ICC在无和微转移的前哨和非前哨淋巴结中的分布无统计学意义(P>0.05)。结论:肿瘤LDLN中ICC分布的变化,提示随着肿瘤的进展,其免疫微环境向抑制机体抗肿瘤免疫的方向偏移。
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关键词
肿瘤引流淋巴结
免疫活性细胞
原位分析
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职称材料
题名
免疫渗滤法实验中非特异性染色封闭方法的改进
1
作者
来宝长
谭武红
安静
郑瑾
王一理
机构
西安交通大学生物医学信息工程教育部重点实验室生命科学与技术学院癌症研究所
西安交通大学
医学
院公共卫生系
西安
联尔科技有限公司
出处
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期122-124,共3页
基金
西安交通大学行动计划重点培植项目-生物芯片的开发应用
文摘
目的选择理想的非特异性抗原封闭方法以适应基于免疫渗滤法的蛋白芯片制备。方法以杆状病毒-昆虫表达系统制备的人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白抗原为例,采用脱脂奶粉、小牛血清、牛血清白蛋白及不同组合等5种方法对非特异性抗原进行封闭,检测其在免疫渗滤实验中对消除非特异性染色的效果,寻找最佳封闭非特异性染色的方法。结果经过多次重复试验,并以PBS代替血清作空白试验,结果显示,目前常用的先固相然后封闭的几种方法,其封闭效果的稳定性和重复性不佳,且空白对照易出现假阳性;同时发现使用脱脂奶粉做封闭剂封闭后,由于奶粉颗粒易堵塞NC膜的孔径,影响NC膜的渗滤速度;使用小牛血清做封闭剂封闭后,由于NC膜对小牛血清的吸附而产生背景,影响结果判读;而采用20 g/L BSA先封闭后固相的方法,在实验中得到满意的结果。结论先封闭后固相的方法,在免疫渗滤实验中对非特异性抗原封闭的效果理想、结果稳定、重复性好,为一种理想的新的封闭方法。
关键词
免疫渗滤法
非特异性染色封闭方法
人乳头瘤病毒16型(HPV
16)
Keywords
immuno-infiltration
non-specific staining blocking method
human papillomavirus type 16
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
肿瘤引流淋巴结中免疫活性细胞分布的原位分析
被引量：
2
2
作者
陈晓黎
何建军
陈侃
来宝长
司履生
王一理
机构
西安交通大学生物医学信息工程教育部重点实验室生命科学与技术学院癌症研究所
西安交通大学
第一附属医院肿瘤外科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期748-751,共4页
基金
陕西省自然科学基金资助(2004C220)
文摘
目的:观察人乳腺癌和胃癌局部引流淋巴结(LDLN)从无转移、微转移到晚期转移过程中,免疫组织学变化及免疫活性细胞(ICC)的分布特征。方法:采用传统的病理学方法,对22例乳腺癌LDLN(71个)和7例进展期胃癌LDLN(28个)进行组织形态学分类,并以抗穿孔素、抗颗粒酶B、抗CD8、抗CD56、抗CD68、抗S-100、抗CD134及抗CD25单克隆抗体(mAb)进行催化信号放大(Catalyzedsignalamplification,CSA)免疫组化染色,检测肿瘤LNDN中ICC的分布。结果:肿瘤LDLN中以副皮质区增生和窦组织细胞增生为主,细胞毒性T淋巴细胞(CTL)及树突状细胞(DC)的数量,从无转移、微转移到晚期转移过程中有逐渐减少的趋势。在无和微转移的淋巴结内,穿孔素+、颗粒酶B+及S100+DC的数量高于晚期转移淋巴结(P<0.05);而S100+DC不仅数量减少,而且其形态也有变化,呈多角形、星形,并有胞质突起,与周围淋巴细胞接触呈活化状态的DC变为椭圆形,少有胞质突起或呈短突起的静止状态的DC。CD134+细胞及CD25+细胞的数量在晚期转移淋巴结中明显高于无和微转移淋巴结(P<0.01)。ICC在无和微转移的前哨和非前哨淋巴结中的分布无统计学意义(P>0.05)。结论:肿瘤LDLN中ICC分布的变化,提示随着肿瘤的进展,其免疫微环境向抑制机体抗肿瘤免疫的方向偏移。
关键词
肿瘤引流淋巴结
免疫活性细胞
原位分析
Keywords
LDLN
ICC
in situ analysis
分类号
R392.31 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
免疫渗滤法实验中非特异性染色封闭方法的改进
来宝长
谭武红
安静
郑瑾
王一理
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
肿瘤引流淋巴结中免疫活性细胞分布的原位分析
陈晓黎
何建军
陈侃
来宝长
司履生
王一理
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
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