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牙龈卟啉菌蛋白酶rgp Acd基因表达载体的构建
被引量：
1
1
作者
许静
李昂
+4 位作者
苟建重
许援朝
饶国洲
刘蒸
谢红帼
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期157-159,172,共4页
目的构建牙龈卟啉菌蛋白酶rgpA催化结构域(rgpAcd)基因的表达载体。方法利用PCR技术和基因重组技术,克隆牙龈卟啉菌蛋白酶rgpAcd,插入中介载体pMD18-T中并测序鉴定。将目的基因片断插入原核表达载体pET-15b,构建表达质粒pET-15b/rgpAcd...
目的构建牙龈卟啉菌蛋白酶rgpA催化结构域(rgpAcd)基因的表达载体。方法利用PCR技术和基因重组技术,克隆牙龈卟啉菌蛋白酶rgpAcd,插入中介载体pMD18-T中并测序鉴定。将目的基因片断插入原核表达载体pET-15b,构建表达质粒pET-15b/rgpAcd,通过限制性酶切鉴定。结果PCR产物电泳结果显示,在大约1.5 kb处有一特异的条带,与预期的大小一致,核酸序列测定与分析的结果表明,克隆的1 476 bp基因序列与GenBank数据库中的序列呈现100%同源性,未发生任何突变;构建的表达质粒经酶切后所得片断与预期大小一致,表明牙龈卟啉菌蛋白酶rgpAcd基因的表达载体构建成功。结论成功克隆了牙龈卟啉菌rgpAcd基因并构建了表达载体,为进一步研制重组活载体疫苗奠定了基础。
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关键词
牙龈卟啉菌
蛋白酶
表达载体
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职称材料
“鸟枪”蛋白组学技术鉴定牙龈卟啉单胞菌47A-1亚型外膜蛋白
被引量：
1
2
作者
孙俊毅
孙媛媛
+1 位作者
苟建重
李昂
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第2期170-174,共5页
目的利用shotgun（鸟枪）蛋白质组学策略鉴定牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g）亚型47A-1外膜蛋白,深化P.g外膜蛋白的蛋白质组学研究,为进一步研究P.g外膜蛋白的致病性奠定基础。方法提取P.g47A-1外膜蛋白,SDS-PAGE电泳...
目的利用shotgun（鸟枪）蛋白质组学策略鉴定牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g）亚型47A-1外膜蛋白,深化P.g外膜蛋白的蛋白质组学研究,为进一步研究P.g外膜蛋白的致病性奠定基础。方法提取P.g47A-1外膜蛋白,SDS-PAGE电泳分离蛋白,胶内酶解为多肽混合物,应用毛细管高效液相色谱加串联质谱分析,SEQUEST程序进行数据库搜索并鉴定蛋白。结果用考马斯亮蓝法染色凝胶分离的蛋白,发现P.g47A-1蛋白条带主要在14.3~97 ku之间。酶解的肽段经毛细管高效液相色谱分离,得到肽段水平的总离子流图,分析肽段序列后发现P.g47A-1蛋白有623个唯一肽段,鉴定出136种蛋白,包括了51种已知蛋白,85种未知蛋白。结论 Shotgun技术可分析出P.g47A-1大量未知蛋白,尤其是丰度低、疏水性强的外膜蛋白,优于二维凝胶电泳（two dimensional gelelectrophoresis,2-DE）等传统蛋白质组学方法,为进一步研究P.g外膜蛋白的致病性奠定了基础。
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关键词
牙龈卟啉单胞菌
外膜蛋白
鸟枪法
蛋白质组学
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职称材料
题名
牙龈卟啉菌蛋白酶rgp Acd基因表达载体的构建
被引量：
1
1
作者
许静
李昂
苟建重
许援朝
饶国洲
刘蒸
谢红帼
机构
西安交通大学
医学院
附属
口腔
医院
口腔
内科
西安交通大学医学院附属口腔医院口腔医学研究中心
出处
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期157-159,172,共4页
基金
陕西省科技攻关计划资助项目[No.2004K11-G4(4)]
西安交通大学博士基金资助项目(No.Bjj2004108)
文摘
目的构建牙龈卟啉菌蛋白酶rgpA催化结构域(rgpAcd)基因的表达载体。方法利用PCR技术和基因重组技术,克隆牙龈卟啉菌蛋白酶rgpAcd,插入中介载体pMD18-T中并测序鉴定。将目的基因片断插入原核表达载体pET-15b,构建表达质粒pET-15b/rgpAcd,通过限制性酶切鉴定。结果PCR产物电泳结果显示,在大约1.5 kb处有一特异的条带,与预期的大小一致,核酸序列测定与分析的结果表明,克隆的1 476 bp基因序列与GenBank数据库中的序列呈现100%同源性,未发生任何突变;构建的表达质粒经酶切后所得片断与预期大小一致,表明牙龈卟啉菌蛋白酶rgpAcd基因的表达载体构建成功。结论成功克隆了牙龈卟啉菌rgpAcd基因并构建了表达载体,为进一步研制重组活载体疫苗奠定了基础。
关键词
牙龈卟啉菌
蛋白酶
表达载体
Keywords
porphyromonas gingivalis
gingipain
expression vector
分类号
R780.2 [医药卫生—口腔医学]
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职称材料
题名
“鸟枪”蛋白组学技术鉴定牙龈卟啉单胞菌47A-1亚型外膜蛋白
被引量：
1
2
作者
孙俊毅
孙媛媛
苟建重
李昂
机构
西安交通大学
医学院
附属
口腔
医院
牙周科
烟台市
口腔
医院
牙周科
西安交通大学医学院附属口腔医院口腔医学研究中心
出处
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第2期170-174,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30500560)~~
文摘
目的利用shotgun（鸟枪）蛋白质组学策略鉴定牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g）亚型47A-1外膜蛋白,深化P.g外膜蛋白的蛋白质组学研究,为进一步研究P.g外膜蛋白的致病性奠定基础。方法提取P.g47A-1外膜蛋白,SDS-PAGE电泳分离蛋白,胶内酶解为多肽混合物,应用毛细管高效液相色谱加串联质谱分析,SEQUEST程序进行数据库搜索并鉴定蛋白。结果用考马斯亮蓝法染色凝胶分离的蛋白,发现P.g47A-1蛋白条带主要在14.3~97 ku之间。酶解的肽段经毛细管高效液相色谱分离,得到肽段水平的总离子流图,分析肽段序列后发现P.g47A-1蛋白有623个唯一肽段,鉴定出136种蛋白,包括了51种已知蛋白,85种未知蛋白。结论 Shotgun技术可分析出P.g47A-1大量未知蛋白,尤其是丰度低、疏水性强的外膜蛋白,优于二维凝胶电泳（two dimensional gelelectrophoresis,2-DE）等传统蛋白质组学方法,为进一步研究P.g外膜蛋白的致病性奠定了基础。
关键词
牙龈卟啉单胞菌
外膜蛋白
鸟枪法
蛋白质组学
Keywords
Porphyromonas gingivalis
outer membrane protein
shotgun method
proteomics
分类号
R34 [医药卫生—基础医学]
R37 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牙龈卟啉菌蛋白酶rgp Acd基因表达载体的构建
许静
李昂
苟建重
许援朝
饶国洲
刘蒸
谢红帼
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
在线阅读
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职称材料
2
“鸟枪”蛋白组学技术鉴定牙龈卟啉单胞菌47A-1亚型外膜蛋白
孙俊毅
孙媛媛
苟建重
李昂
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
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