HCV全基因组培养细胞的比较蛋白组学研究 被引量：3

1

作者 赵四海 寻萌 +5 位作者 楚雍烈 朱彤 薛欣 徐琨 宋娟 邵明明 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2174-2177,共4页

利用比较蛋白质组技术研究了转染丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)全基因组的人肝癌细胞系Huh7细胞模型中蛋白质表达谱的变化,建立了Huh7-HCV的双向凝胶电泳蛋白质表达图谱和数据库.通过双向凝胶电泳分离和图像分析,对表达差异2倍... 利用比较蛋白质组技术研究了转染丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)全基因组的人肝癌细胞系Huh7细胞模型中蛋白质表达谱的变化,建立了Huh7-HCV的双向凝胶电泳蛋白质表达图谱和数据库.通过双向凝胶电泳分离和图像分析,对表达差异2倍以上蛋白质点进行了胶内酶解和MALDI-TOF MS鉴定.得到包括与细胞骨架蛋白、细胞周期、凋亡和信号转导等相关的14个蛋白质,并且用Western blot验证了热休克蛋白70的蛋白质组研究结果.利用HCV全基因组培养系统,采用蛋白质组学技术,为研究HCV病毒和宿主细胞相互作用提供了新的实验数据,为深入研究HCV病毒复制和分子致病机理奠定了基础. 展开更多

关键词 培养细胞 丙型肝炎病毒 蛋白质组学

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温度对果蝇学习记忆行为的影响 被引量：2

2

作者 雷莉 范桂香 +2 位作者 宋土生 黄辰 牛跃英 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期341-343,共3页

目的研究温度对果蝇学习记忆行为的影响。方法设两个离心管,一只离心管内只有食物,果蝇既可以嗅到味道,也可以吃到食物;另一只离心管也有食物,果蝇只可以嗅到味道而不能吃到食物。将果蝇在不同的温度下饲养后,观察不同温度下饲养的果蝇... 目的研究温度对果蝇学习记忆行为的影响。方法设两个离心管,一只离心管内只有食物,果蝇既可以嗅到味道,也可以吃到食物;另一只离心管也有食物,果蝇只可以嗅到味道而不能吃到食物。将果蝇在不同的温度下饲养后,观察不同温度下饲养的果蝇进入两只离心管内的数量变化。结果高温环境下生长的果蝇进入可以吃到食物的离心管的数量少于正常温度和低温环境下生长的果蝇。结论高温可以降低果蝇的学习记忆行为。 展开更多

关键词 果蝇 温度 学习记忆

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Med1对T细胞发育及CD4^(+)T细胞在免疫应答中分化的影响 被引量：1

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作者 郑会强 焦安君 +6 位作者 刘海艳 雷蕾 丁人一 封钊 张丹 张连军 张保军 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1296-1303,共8页

目的:CD4^(+)T细胞在免疫应答过程中的分化受到由众多分子组成的复杂而精细的信号通路的调控,且调控T-bet表达的分子机制并未阐明。中介体复合物亚基1(mediator complex subunit 1,Med1)与多种辅助因子结合调节基因转录,促进细胞存活和... 目的:CD4^(+)T细胞在免疫应答过程中的分化受到由众多分子组成的复杂而精细的信号通路的调控,且调控T-bet表达的分子机制并未阐明。中介体复合物亚基1(mediator complex subunit 1,Med1)与多种辅助因子结合调节基因转录,促进细胞存活和增殖,影响恒定自然杀伤T细胞(invariant natural killer T cell,iNKT)的发育。本研究旨在探讨Med1对T细胞发育及CD4^(+)T细胞在免疫应答中分化的影响。方法:构建T细胞特异性敲除Med1基因(KO)小鼠(Med1F/FCD4cre^(+))并对其进行验证。采用流式细胞术检测KO组和对照(Con)组(Med1F/FCD4cre−)小鼠胸腺、脾和淋巴结中CD4^(+)和CD8^(+)T细胞的百分比及数目;用淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus,LCMV)感染小鼠8 d后,检测小鼠脾中CD4^(+)T细胞及抗原特异性(GP66^(+))CD4^(+)T细胞的百分比及数目、Th1细胞(Ly6c^(+)PSGL1^(+))占CD4^(+)T细胞及抗原特异性CD4^(+)T细胞的百分比及数目、CD4^(+)T细胞及抗原特异性CD4^(+)T细胞中Tbet的荧光强度。结果:KO组与Con组小鼠胸腺中CD4^(+)和CD8^(+)T细胞的百分比及数目、脾和淋巴结中CD4^(+)T细胞的百分比及数目差异均无统计学意义(均P>0.05),但KO组脾和淋巴结中CD8^(+)T细胞的百分比及数目较Con组均显著降低(均P<0.05)。感染LCMV后,KO组与Con组小鼠脾中CD4^(+)T细胞及抗原特异性CD4^(+)T细胞的百分比及数目差异均无统计学意义(均P>0.05),但KO组Th1细胞占CD4^(+)T细胞及抗原特异性CD4^(+)T细胞的百分比及数目、CD4^(+)T细胞及抗原特异性CD4^(+)T细胞中T-bet的表达较Con组均显著降低(均P<0.05)。结论:T细胞中特异性敲除Med1基因不影响胸腺中CD4^(+)和CD8^(+)T细胞的发育,但是影响外周CD8^(+)T细胞的维持。在免疫应答中Med1基因缺失影响转录因子T-bet的表达,最终导致CD4^(+)T细胞向Th1细胞分化减少。 展开更多

关键词 中介体复合物亚基1 T细胞发育 免疫应答 TH1细胞 T-BET

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柴胡皂甙D诱导肝癌细胞同时发生凋亡及类凋亡性细胞死亡 被引量：14

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作者 卢新兰 卢朝辉 +5 位作者 曹琰 张旭 王新 李雅睿 郭丹 和水祥 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期966-971,共6页

目的探讨柴胡皂甙D(saikosaponin-d,SSD)诱导人肝癌Hep3B细胞死亡的作用及其可能机制。方法将肝癌Hep3B细胞分为空白对照组、DMSO(溶媒)对照组和3个SSD(5、10、15μmol/L)处理组,MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标记后采用流式... 目的探讨柴胡皂甙D(saikosaponin-d,SSD)诱导人肝癌Hep3B细胞死亡的作用及其可能机制。方法将肝癌Hep3B细胞分为空白对照组、DMSO(溶媒)对照组和3个SSD(5、10、15μmol/L)处理组,MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标记后采用流式细胞仪定量检测死亡细胞的比例;Hoechst 33258染色后在形态学方面检测细胞凋亡;分光光度法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)凋亡蛋白酶活性;倒置显微镜观察细胞形态改变;Western blotting和Real-time PCR技术分别用于检测CHOP(C/EBP homology protein)蛋白和mRNA表达。结果MTT结果显示,SSD浓度和时间依赖性抑制Hep3B细胞生长;流式细胞术结果表明SSD诱导Hep3B细胞死亡;Hoechst 33258染色后在荧光显微镜下观察,发现SSD处理组的细胞核出现凋亡细胞特征性的核染色体凝集、核固缩和碎裂;SSD可明显激活关键的凋亡执行分子caspase-3;通过倒置显微镜观察到SSD处理的细胞内出现大量空泡样改变——类凋亡的发生;总caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理能够有效抑制caspase-3活性,但仅能部分抑制SSD诱导的细胞死亡,且不能减少SSD诱导的细胞内空泡形成;SSD诱导应激诱导性分子CHOP蛋白和mRNA表达上调,该作用不能被Z-VAD-FMK抑制。结论SSD可诱导人肝癌Hep3B细胞同时发生caspase依赖性凋亡和非caspase依赖性类凋亡,其中CHOP表达升高可能是参与SSD诱导类凋亡的分子机制之一。 展开更多

关键词 柴胡皂甙D 细胞凋亡 类凋亡 肝癌 CHOP

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HIV患者合并感染基因1和4型丙型肝炎病毒治疗效果的Meta分析 被引量：3

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作者 赵四海 刘恩岐 +2 位作者 成大欣 薛欣 楚雍烈 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期315-319,共5页

目的:探讨HIV患者共感染难治性丙型肝炎病毒(HCV,基因1型和4型)后的临床药物处理对策。方法:收集国内外2000年至今报道的干扰素或聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗HCV/HIV共感染患者的随机临床对照试验结果,提取其中共感染基因1型或4型HC... 目的:探讨HIV患者共感染难治性丙型肝炎病毒(HCV,基因1型和4型)后的临床药物处理对策。方法:收集国内外2000年至今报道的干扰素或聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗HCV/HIV共感染患者的随机临床对照试验结果,提取其中共感染基因1型或4型HCV的HIV患者资料。利用Meta分析方法探讨HIV患者罹患丙型肝炎后,尤其是感染基因1型或4型HCV后的治疗方案。结果:Medline文献检索结果命中88篇文献,其中6篇符合纳入标准,共提取感染基因1型或4型HCV的HIV患者资料1 131份。数据分析结果显示,聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗基因1型或4型HCV的HIV患者所获得的持续病毒反应率是26%,高于干扰素联合利巴韦林治疗的反应率(8%)。聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗也优于聚乙二醇干扰素单独疗法(26%vs 13%)。而聚乙二醇干扰素联合利巴韦林疗法在基因2型或3型HCV感染的HIV患者可获得55%的持续病毒反应率。干扰素或聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗HCV/HIV共感染患者的副反应发生率和停药率相似。结论:聚乙二醇干扰素联合利巴韦林在治疗基因1型或4型HCV的HIV患者时优于干扰素联合利巴韦林或聚乙二醇干扰素单独疗法。 展开更多

关键词 肝炎病毒 基因型 重叠感染/免疫学 干扰素-α2a/治疗应用 聚乙烯二醇类/治疗应用 利巴韦林/治疗应用 药物疗法 联合

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丙型肝炎病毒研究模型的现状与未来 被引量：2

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作者 赵四海 楚雍烈 +1 位作者 寻萌 薛欣 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2007年第6期614-619,共6页

在过去较长时间内,由于缺少合适的丙型肝炎病毒研究模型,对丙肝病毒感染机制、生活周期和致病机制的研究进展较为缓慢。对丙肝病毒的认识不足严重阻碍了相关预防性疫苗和治疗药物的研制。近年建立的丙肝病毒全基因体外培养系统是一项重... 在过去较长时间内,由于缺少合适的丙型肝炎病毒研究模型,对丙肝病毒感染机制、生活周期和致病机制的研究进展较为缓慢。对丙肝病毒的认识不足严重阻碍了相关预防性疫苗和治疗药物的研制。近年建立的丙肝病毒全基因体外培养系统是一项重大突破,这将促进人们对丙肝病毒的全面认识和丙型肝炎防治药物的开发。 展开更多

关键词 病毒培养 肝炎病毒 病毒复制 丙型肝炎病毒 研究模型

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角蛋白8在四氯化碳诱导的小鼠肝损伤中的表达 被引量：1

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作者 赵四海 楚雍烈 刘恩岐 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期37-42,共6页

目的:探讨角蛋白8在四氯化碳诱导的小鼠肝损伤中的表达和角蛋白8可能参与肝损伤过程的机制。方法:取ICR小鼠40只,分为4组,每组10只,雌雄各半。A组接受四氯化碳处理2周(6%的四氯化碳橄榄油溶液腹腔注射,300μl/kg体重,每周3次);B组接受... 目的:探讨角蛋白8在四氯化碳诱导的小鼠肝损伤中的表达和角蛋白8可能参与肝损伤过程的机制。方法:取ICR小鼠40只,分为4组,每组10只,雌雄各半。A组接受四氯化碳处理2周(6%的四氯化碳橄榄油溶液腹腔注射,300μl/kg体重,每周3次);B组接受四氯化碳处理4周;C组接受四氯化碳处理6周;D组为空白对照组。各组分别在最后一次注射四氯化碳的第3天,过量麻醉处死后取材。依次分离脾脏、双肾和心脏等重要脏器并称重。提取肝脏总RNA、RT-PCR和免疫组化方法检测角蛋白8的表达变化。结果:四氯化碳处理导致肝脏重量和体重的比值增高,第0、2、4和6周分别为5.60%、6.87%、7.83%和7.76%,差别具有统计学意义(P<0.01),脾脏重量和体重的比值也增高(P<0.05)。HE染色显示,肝损伤程度随四氯化碳处理时间延长而加重。RT-PCR和免疫组化检测发现,角蛋白8在肝脏的表达随四氯化碳处理时间延长而升高。结论:在四氯化碳诱导的小鼠肝损伤模型中,角蛋白8的表达水平和肝损伤程度在一定条件下呈正相关。角蛋白8的细胞内积累可能是肝损伤的分子机制之一。 展开更多

关键词 四氯化碳 角蛋白 免疫组织化学 疾病模型 动物 肝疾病 化学诱导 基因表达

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抗恶性黑素瘤单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体的构建及评评价 被引量：2

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作者 王昊 杨一飞 +5 位作者 王炜 管冰 寻萌 张海 王字玲 赵勇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1149-1155,共7页

目的构建抗MM单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体,并验证其表达效率及功能。方法通过PCR方法将鱼精蛋白截短片段序列与抗黑色素瘤细胞表面抗原单链抗体基因相连接;采用TaKaRap MD19-T载体试剂盒将PCR后获得的融合蛋白扩增产物进行T载体... 目的构建抗MM单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体,并验证其表达效率及功能。方法通过PCR方法将鱼精蛋白截短片段序列与抗黑色素瘤细胞表面抗原单链抗体基因相连接;采用TaKaRap MD19-T载体试剂盒将PCR后获得的融合蛋白扩增产物进行T载体构建;构建GST融合蛋白表达载体以实现在大肠杆菌中该融合蛋白的可溶性表达,经两步亲和纯化后获得scFv-tP蛋白;采用凝胶阻滞电泳迁移率变动分析EMSA技术检测Anti-MM scFv-tP与siRNA的结合活性;荧光分子标记scFv-tP蛋白后分别采用流式细胞术检测和共聚焦显微镜观察其与Li Br细胞株进行细胞表面抗原结合活性验证;采用不同浓度FITC标记的siRNA与scFv-tP进行混合,分别与LiBr细胞(A)及DU145细胞(B)进行混合孵育,观察肿瘤细胞对携载siRNA的单链抗体的内化活性。结果成功构建抗恶性黑素瘤单链抗体-鱼精蛋白片段融合蛋白(Anti-MM scFv-tP)表达载体;实现在大肠杆菌中该融合蛋白的可溶性表达,可获得较纯的scFv-tP蛋白;Anti-MM scFv-tP蛋白与siRNA有明显的结合与携载能力,可以有效与LiBr细胞表面特异性抗原进行结合,且有较强的内化活性。结论本研究构建的抗MM单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体可稳定表达,Anti-MM scFv-tP蛋白具有siRNA结合携载能力,可靶向识别结合进入LiBr细胞,为后续进一步研究该单链抗体融合蛋白靶向载体携载siRNA在体内外抑制恶性黑色素瘤恶性进展奠定坚实的基础。 展开更多

关键词 恶性黑色素瘤 单链抗体 表达载体 Anti-MM-scFv-tp

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丙型肝炎病毒全基因组培养细胞中转录调节基因的差异表达 被引量：1

9

作者 赵四海 寻萌 +3 位作者 楚雍烈 朱彤 王毅华 闫丽鹏 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第2期164-169,共6页

目的:利用基因芯片的高通量分析性能和丙型肝炎病毒(HCV)全基因组细胞培养系统,研究HCV对宿主细胞转录调节基因的影响和机制。方法:用人工构建的HCV感染Huh-7肝癌细胞株,待其发生细胞病变后收集培养细胞,以同步培养但不感染HCV的细胞作... 目的:利用基因芯片的高通量分析性能和丙型肝炎病毒(HCV)全基因组细胞培养系统,研究HCV对宿主细胞转录调节基因的影响和机制。方法:用人工构建的HCV感染Huh-7肝癌细胞株,待其发生细胞病变后收集培养细胞,以同步培养但不感染HCV的细胞作为阴性对照。提取感染细胞和对照细胞的总RNA、总蛋白和细胞培养上清。总蛋白用于Western blotting鉴定HCV蛋白在感染细胞内的表达情况。细胞培养上清用于检测HCV在感染细胞内合成后的释放情况。总RNA用10g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定抽提情况,再纯化后进行逆转录cRNA合成、荧光标记和纯化后用于基因芯片分析,检测宿主细胞转录调节基因的差异表达。结果:在细胞培养上清液中可检测到HCV,感染细胞内可检测到HCV蛋白表达。基因芯片检测2倍差异表达转录调节基因发现,上调基因11个,下调基因11个。结论:HCV全基因组细胞培养系统为研究HCV对感染细胞转录调节基因表达的影响提供了良好工具。利用基因芯片技术,筛选出HCV全基因组细胞培养系统中差异表达的转录调节基因,为研究HCV感染对细胞基因转录的影响提供了重要资料,加深了对HCV和宿主细胞相互作用机制的认识。 展开更多

关键词 肝炎 丙型 肝炎病毒 基因 调节 丙肝病毒 细胞培养 转录 基因

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人doppel蛋白及其类似蛋白PrPΔ32-121对SH-SY5Y细胞的细胞毒性作用

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作者 徐琨 王新 +7 位作者 田婵 石崧 王桂荣 石琦 周瑞敏 姜惠英 楚雍烈 董小平 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期32-35,46,共5页

目的体外观察细胞瞬时表达的人Dpl(doppel)蛋白对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,并与其结构类似蛋白——截短型PrP(PrPΔ32-121)加以比较。方法通过PCR方法获得人PRND基因及截短型PRNP基因并克隆至真核表达载体,瞬时转染SH-SY5Y细胞... 目的体外观察细胞瞬时表达的人Dpl(doppel)蛋白对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,并与其结构类似蛋白——截短型PrP(PrPΔ32-121)加以比较。方法通过PCR方法获得人PRND基因及截短型PRNP基因并克隆至真核表达载体,瞬时转染SH-SY5Y细胞后,观察蛋白表达及其定位情况;采用MTT实验检测转染细胞的生长状态;用流式细胞仪、Western blot等方法检测转染细胞的凋亡状态。结果两种蛋白均可在转染细胞中表达,并存在于细胞膜上;MTT结果显示,在转染24 h后均出现明显的细胞毒性作用;细胞凋亡相关实验发现,转染细胞AnnexinV/PI双染阳性细胞数量增多,pro-casepase-3和Bcl-2因子水平降低。结论瞬时表达的Dpl蛋白与截短型PrP可产生类似的神经细胞毒性作用,并诱导启动细胞凋亡过程。 展开更多

关键词 doppel蛋白 朊蛋白 细胞毒性作用 细胞凋亡

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RH株弓形虫颅内定位注射建立急性弓形虫脑炎小鼠模型的研究

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作者 司开卫 刘建新 +5 位作者 吴锋 李小其 付子豪 巩锦华 王军阳 程彦斌 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期746-754,共9页

目的观察RH株弓形虫定位感染小鼠海马引起的组织病变,以构建急性弓形虫脑炎小鼠模型。方法利用颅内定位注射技术,将定量(100、500、1000个)RH株弓形虫滋养体,定位注射入小鼠海马CA1区,观察小鼠的生存状况;Giemsa染色方法观察小鼠腹水和... 目的观察RH株弓形虫定位感染小鼠海马引起的组织病变,以构建急性弓形虫脑炎小鼠模型。方法利用颅内定位注射技术,将定量(100、500、1000个)RH株弓形虫滋养体,定位注射入小鼠海马CA1区,观察小鼠的生存状况;Giemsa染色方法观察小鼠腹水和脑组织匀浆中弓形虫数量的变化;尼氏染色和HE染色观察小鼠海马神经组织的病理改变;用免疫组化ABC法观察弓形虫在脑组织的分布。结果RH株弓形虫感染各组小鼠在感染第4天表现出明显的弓背、竖毛、腹胀、头颅细微震颤、偏瘫等症状。定量100感染组小鼠生存时间较长,腹水中未发现弓形虫滋养体,脑组织匀浆在96 h后发现少量的假包囊,小鼠死亡后则有较多滋养体;尼氏染色和HE染色则在144 h发现较多的组织坏死灶,CA1区神经细胞缺失;随感染时间的延长而脑组织损伤加重。而定量500感染组和定量1000感染组小鼠腹水和脑匀浆中均发现弓形虫滋养体;尼氏染色发现海马区神经元丢失和大量坏死;HE染色发现组织坏死灶及炎性细胞浸润,脑组织损伤均较定量100感染组小鼠显著加重;免疫组化证实坏死灶中有弓形虫的分布。结论定位感染RH株弓形虫100个滋养体小鼠存活时间较长,脑组织病理变化逐渐加重,损伤局限于脑组织内,小鼠表现典型的弓形虫脑炎症状。因此定位感染100个弓形虫滋养体可以构建急性弓形虫脑炎小鼠模型,可为弓形虫对脑神经的损伤机制研究奠定基础。 展开更多

关键词 弓形虫 颅内定位注射 海马 弓形虫脑炎

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盐酸青藤碱通过C/EBPβ-COX-2通路抑制LPA诱导的肝癌细胞增殖 被引量：6

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作者 王新 卢朝辉 +6 位作者 李雅睿 郭丹 张旭 曹琰 李皓瑞 和水祥 卢新兰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第5期786-789,共4页

目的观察溶血磷脂酸(LPA)对肝癌细胞CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)和环氧合酶-2(COX-2)表达及增殖的影响,并进一步探讨抗炎药物盐酸青藤碱(SIN)对其可能的作用。方法采用人肝癌Huh7细胞系,分别用Real-time PCR和Western blot检测基因... 目的观察溶血磷脂酸(LPA)对肝癌细胞CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)和环氧合酶-2(COX-2)表达及增殖的影响,并进一步探讨抗炎药物盐酸青藤碱(SIN)对其可能的作用。方法采用人肝癌Huh7细胞系,分别用Real-time PCR和Western blot检测基因mRNA和蛋白表达水平;MTT法检测细胞增殖。结果用10μmol/L LPA处理Huh7细胞不同时间(0~6 h)后,C/EBPβ、COX-2的蛋白和mRNA表达水平呈时间依赖性升高;分别用不同浓度的LPA(0~10μmol/L)处理Huh7细胞6 h后,C/EBPβ、COX-2的蛋白和mRNA表达均呈浓度依赖性升高;SIN浓度依赖性抑制LPA所诱导的C/EBPβ、COX-2表达及细胞增殖。结论LPA通过诱导C/EBPβ-COX-2通路表达促进人肝癌Huh7细胞增殖,而SIN能够通过下调C/EBPβ-COX-2表达抑制LPA所诱导的细胞增殖。 展开更多

关键词 溶血磷脂酸 CCAAT/增强子结合蛋白β 环氧合酶-2 盐酸青藤碱 肝癌

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Arntl基因敲除对小鼠T细胞发育及抗感染功能的影响

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作者 孙亚娥 焦安君 +8 位作者 王昕 张星哲 雷蕾 杨小丰 解涛 周晓勃 史霖 张保军 刘晓斌 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期402-407,432,共7页

目的观察Arntl基因敲除对小鼠T细胞发育及抗感染功能的影响。方法构建在T细胞中特异性敲除Arntl基因小鼠(Arntl^(F/F)CD4cre^(+),KO);采用流式细胞术(FCM)检测KO小鼠胸腺和脾脏中T细胞各亚群的比例及数目;检测淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(... 目的观察Arntl基因敲除对小鼠T细胞发育及抗感染功能的影响。方法构建在T细胞中特异性敲除Arntl基因小鼠(Arntl^(F/F)CD4cre^(+),KO);采用流式细胞术(FCM)检测KO小鼠胸腺和脾脏中T细胞各亚群的比例及数目;检测淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus,LCMV)感染7 d后小鼠脾脏中T细胞各亚群比例、病毒特异性CD8^(+)T细胞的比例,以及CD8^(+)T细胞中IFN-γ的表达水平;qPCR方法检测小鼠脾脏中病毒载量;借助流式细胞仪分选初始CD4^(+)T细胞(CD4^(+)CD25^(-)CD44^(-)CD62L^(+)T细胞),经体外诱导Th1细胞分化,检测表达IFN-γ细胞的比例。结果与对照组(Arntl^(F/F)CD4cre^(-),WT)小鼠相比,KO小鼠胸腺和脾脏中T细胞各亚群的百分比及数目均无明显改变(P>0.05)。感染LCMV后,KO小鼠脾脏中效应T细胞的比例较对照组无明显改变(P>0.05),但分泌IFN-γT细胞的比例显著增多(P<0.05),病毒清除率升高(P<0.05)。此外,KO小鼠初始CD4^(+)T细胞向Th1细胞分化较对照组显著增强(P<0.05)。结论Arntl在T细胞中特异性敲除不影响T细胞的发育,但会增强T细胞抗病毒感染的能力。 展开更多

关键词 Arntl T细胞发育 病毒感染 免疫应答 辅助性(Th)T细胞分化

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利用CRISPR/Cas9核酸酶靶向细菌必需基因的特异性抗菌剂研究 被引量：1

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作者 王令 任艳艳 +5 位作者 郭苗苗 王金萍 杜伟立 郭熠洁 路宏朝 张涛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1080-1089,共10页

CRISPR/Cas9核酸酶是一种高效和精确的基因组DNA编辑工具。目前,CRISPR/Cas9被开发成一种新型抗菌剂,通过靶向破坏目标基因,例如抗生素耐药基因来诱导细菌死亡。本研究利用CRISPR携带多靶点优势,同时靶向大肠杆菌必需基因gyrA、gyrB和fo... CRISPR/Cas9核酸酶是一种高效和精确的基因组DNA编辑工具。目前,CRISPR/Cas9被开发成一种新型抗菌剂,通过靶向破坏目标基因,例如抗生素耐药基因来诱导细菌死亡。本研究利用CRISPR携带多靶点优势,同时靶向大肠杆菌必需基因gyrA、gyrB和folA,以达到杀菌作用。本设计针对3个内源基因的CRISPR系列载体,分别含有1个、2个或3个靶点。当IPTG诱导Cas9表达后,CRISPR RNA (crRNA)和反式作用CRISPR RNA (trans-activating CRISPR RNA, tracrRNA)复合物募集Cas9切割靶基因,导致细菌死亡。随着crRNA中靶点数量的增加,杀菌效率显著提高。当含有3个靶点的crRNA作用于细菌基因组时,杀菌效率达到99.35%。此外,在存活的大肠杆菌中,crRNA表达质粒的靶序列和直接重复序列发现碱基缺失,而内源靶基因和Cas9基因均未发生突变。最后,该CRISPR系统还应用于其他大肠杆菌实验室菌株和产肠毒素K88菌株,并表现出高效的杀菌作用。我们设计了一种基于CRISPR/Cas9核酸酶的新型抗菌剂,为抗菌剂的研发提供新策略。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 必需基因 抗菌剂 杀菌作用

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