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携EGFP基因的逆转录病毒包装细胞的分选和滴度测定
被引量：
5
1
作者
张银刚
郭雄
+2 位作者
周京军
鱼兵
刘兵
《第一军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期30-32,36,共4页
目的探讨利用荧光激活细胞分选技术获得有效重组逆转录病毒包装细胞系的方法。方法用脂质体介导pLEGFP转染PA317细胞,用荧光显微镜观察转染结果;依据EGFP荧光利用流式细胞仪的分选技术获得多克隆和单克隆源性的包装细胞,并利用PCR、RT-...
目的探讨利用荧光激活细胞分选技术获得有效重组逆转录病毒包装细胞系的方法。方法用脂质体介导pLEGFP转染PA317细胞,用荧光显微镜观察转染结果;依据EGFP荧光利用流式细胞仪的分选技术获得多克隆和单克隆源性的包装细胞,并利用PCR、RT-PCR对其鉴定;以NIH3T3为靶细胞,对其滴度进行测定。结果荧光显微镜显示用脂质体介导的方法成功的转染PA317细胞,在4次连续流式细胞仪分选后得到了稳定表达的多克隆和单克隆源性的包装细胞。PCR和RT-PCR分别从多克隆和单克隆源性的包装细胞细胞基因组DNA以及多克隆和部分(6/8)单克隆源性的包装细胞培养上清中的重组逆转录病毒RNA中扩增出了插入的EGFP片段。滴度测定显示得到的包装细胞能够产生有效的病毒滴度。结论荧光激活细胞分选技术是获得有效病毒滴度的包装细胞的有效方法。
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关键词
EGFP
重组逆转录病毒载体
荧光激活细胞分选技术
基因转染
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职称材料
BMP_2-EGFP融合蛋白的构建及其生物活性
被引量：
3
2
作者
张银刚
郭雄
+2 位作者
师常宏
邹爱民
许鹏
《中南大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期16-20,共5页
目的:构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体,并检测其表达的融合蛋白的生物活性。方法: 用基因重组技术构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体,并通过酶切和PCR鉴定。脂质体法转染COS 7细 胞,用荧光显微镜检测和Westernblotting...
目的:构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体,并检测其表达的融合蛋白的生物活性。方法: 用基因重组技术构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体,并通过酶切和PCR鉴定。脂质体法转染COS 7细 胞,用荧光显微镜检测和Westernblotting分析其在COS 7细胞表达,细胞活性实验和动物体内异位成骨实验进一 步检测融合蛋白的生物活性。结果:经酶切和PCR鉴定重组质粒BMP2/pLEGFP构建成功。转染COS 7细胞后, 荧光显微镜和Westernblotting检测均显示融合蛋白在细胞中表达;分泌的产物经细胞活性实验和动物体内异位成 骨实验证实具有BMP2和EGFP的双重蛋白活性。结论:基因重组技术成功构建BMP2/pLEGFP重组体,重组体表 达的融合蛋白具有GFP和BMP2的双重活性。
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关键词
BMP2
基因转染
真核表达
生物活性
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职称材料
题名
携EGFP基因的逆转录病毒包装细胞的分选和滴度测定
被引量：
5
1
作者
张银刚
郭雄
周京军
鱼兵
刘兵
机构
西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室地方病研究所
第四军医
大学
基础部生理教研室
唐都医院中心
实验室
出处
《第一军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期30-32,36,共4页
基金
国家自然科学基金(30400163
30371252)~~
文摘
目的探讨利用荧光激活细胞分选技术获得有效重组逆转录病毒包装细胞系的方法。方法用脂质体介导pLEGFP转染PA317细胞,用荧光显微镜观察转染结果;依据EGFP荧光利用流式细胞仪的分选技术获得多克隆和单克隆源性的包装细胞,并利用PCR、RT-PCR对其鉴定;以NIH3T3为靶细胞,对其滴度进行测定。结果荧光显微镜显示用脂质体介导的方法成功的转染PA317细胞,在4次连续流式细胞仪分选后得到了稳定表达的多克隆和单克隆源性的包装细胞。PCR和RT-PCR分别从多克隆和单克隆源性的包装细胞细胞基因组DNA以及多克隆和部分(6/8)单克隆源性的包装细胞培养上清中的重组逆转录病毒RNA中扩增出了插入的EGFP片段。滴度测定显示得到的包装细胞能够产生有效的病毒滴度。结论荧光激活细胞分选技术是获得有效病毒滴度的包装细胞的有效方法。
关键词
EGFP
重组逆转录病毒载体
荧光激活细胞分选技术
基因转染
Keywords
EGFP
retroviral vector
fluorescence-activated cell sorting
gene transduction
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
BMP_2-EGFP融合蛋白的构建及其生物活性
被引量：
3
2
作者
张银刚
郭雄
师常宏
邹爱民
许鹏
机构
西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室地方病研究所
第四军医
大学
基础部微生物教研室
唐都医院中心
实验室
出处
《中南大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期16-20,共5页
基金
国家自然科学基金(30400163)
文摘
目的:构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体,并检测其表达的融合蛋白的生物活性。方法: 用基因重组技术构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体,并通过酶切和PCR鉴定。脂质体法转染COS 7细 胞,用荧光显微镜检测和Westernblotting分析其在COS 7细胞表达,细胞活性实验和动物体内异位成骨实验进一 步检测融合蛋白的生物活性。结果:经酶切和PCR鉴定重组质粒BMP2/pLEGFP构建成功。转染COS 7细胞后, 荧光显微镜和Westernblotting检测均显示融合蛋白在细胞中表达;分泌的产物经细胞活性实验和动物体内异位成 骨实验证实具有BMP2和EGFP的双重蛋白活性。结论:基因重组技术成功构建BMP2/pLEGFP重组体,重组体表 达的融合蛋白具有GFP和BMP2的双重活性。
关键词
BMP2
基因转染
真核表达
生物活性
Keywords
BMP 2
gene transfection
eukaryotic protein expression
bio-activity
分类号
R341 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
携EGFP基因的逆转录病毒包装细胞的分选和滴度测定
张银刚
郭雄
周京军
鱼兵
刘兵
《第一军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
BMP_2-EGFP融合蛋白的构建及其生物活性
张银刚
郭雄
师常宏
邹爱民
许鹏
《中南大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005
3
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职称材料
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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