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大骨节病患者外周血真菌毒素环境反应基因表达谱的研究 被引量:3
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作者 张峰 郭雄 +2 位作者 王爽 武世勋 王立新 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期400-406,共7页
目的比较分析真菌毒素环境反应基因在大骨节病(KBD)患者和正常对照者外周血中的表达谱差异,探讨其与KBD患病风险的相关性。方法收集25例KBD成年患者和17例正常对照个体外周血样品,提取总RNA。采用Agilent全基因组表达芯片、单基因表达... 目的比较分析真菌毒素环境反应基因在大骨节病(KBD)患者和正常对照者外周血中的表达谱差异,探讨其与KBD患病风险的相关性。方法收集25例KBD成年患者和17例正常对照个体外周血样品,提取总RNA。采用Agilent全基因组表达芯片、单基因表达分析和基因集富集表达分析技术(GSEA),比较真菌毒素环境反应基因在KBD患者和正常对照个体外周血中的基因表达谱差异。基因表达芯片数据采用RT-PCR进行验证。结果①T-2毒素、雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、脱氧镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1、赫曲霉毒素A和胶霉毒素相关的11个环境反应基因在KBD患者和正常对照个体外周血中的表达水平存在显著差异(表达率>2.0或<0.5),功能主要涉及细胞凋亡、免疫炎症和蛋白合成与修饰等。②真菌毒素相关的11个环境反应基因在KBD患者外周血中显著上调(P<0.05),功能涉及细胞凋亡、外环境刺激反应、生长发育和氧化还原反应等。结论多种真菌毒素环境反应基因在KBD患者外周血中表达异常。真菌毒素可能通过影响相关环境反应基因的表达,诱发软骨细胞功能障碍,导致关节软骨损伤。 展开更多
关键词 大骨节病 真菌毒素 环境反应基因 基因表达芯片 外周血
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T-2毒素中毒对低硒大鼠关节软骨细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响 被引量:2
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作者 杨浩杰 王治伦 +7 位作者 陈静宏 宋代琴 薛森海 周晓荣 陈群 谭希旺 杨占田 马天有 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期272-274,278,共4页
目的探讨T-2毒素对低硒喂养大鼠关节软骨细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响,以了解大骨节病病因及软骨细胞凋亡的发生机制。方法新生的雄性大鼠随机分为4组,正常饲料组、低硒饲料组、正常饲料+T-2毒素组、低硒饲料+T-2毒素组。正常饲料和... 目的探讨T-2毒素对低硒喂养大鼠关节软骨细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响,以了解大骨节病病因及软骨细胞凋亡的发生机制。方法新生的雄性大鼠随机分为4组,正常饲料组、低硒饲料组、正常饲料+T-2毒素组、低硒饲料+T-2毒素组。正常饲料和正常饲料+T-2毒素组、低硒饲料组和低硒饲料+T-2毒素组大鼠分别给予人工合成正常饮食和低硒饮食30 d。之后,正常饲料+T-2毒素组和低硒饲料+T-2毒素组给予T-2毒素(每天每克体重200 ng)灌胃30 d。提取大鼠关节软骨RNA,采用Real-Ti me PCR法检测凋亡相关基因P53、caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA表达。结果与正常饮食大鼠血硒(73.92±30.01)ng/mL相比,低硒饮食30 d的大鼠血硒为(4.16±3.56)ng/mL,二者之间有统计学差异(P<0.05)。与正常饲料组比较,低硒饲料组、正常饲料+T-2毒素组、低硒饲料+T-2毒素组中的P53、caspase-3、Bax的mRNA表达上调,Bcl-2的mRNA表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);与低硒饲料组相比,低硒饲料+T-2毒素组中的P53、caspase-3、Bax的mRNA表达上调,Bcl-2的mRNA表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);P53、caspase-3、Bax的mRNA在低硒饲料+T-2毒素组表达高于正常饲料+T-2毒素组;Bcl-2的mRNA在低硒饲料+T-2毒素组表达低于正常饲料+T-2毒素组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论每天每克体重200 ng T-2毒素作用30 d,可以引起低硒饲料喂养大鼠软骨细胞凋亡因子mRNA的表达改变。 展开更多
关键词 T-2毒素 硒缺乏 软骨细胞 细胞凋亡 P53 CASPASE-3 BAX Bcl-2 大鼠
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p42^MAPK siRNA诱导HeLa细胞凋亡的相关基因表达研究 被引量:2
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作者 刘利英 黄辰 +4 位作者 李宗芳 宋土生 倪磊 罗禹 赵小鸽 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期129-132,共4页
目的应用小干扰RNA(siRNA)沉默HeLa细胞MAPK p42,研究其诱导细胞凋亡的分子机制。方法将筛选的MAPK p42靶向小干扰RNA(p42MAPKsiRNA)用脂质体转染至HeLa细胞。激光共聚焦显微镜观察小干扰RNA处理的细胞内钙变化,免疫组织化学法检测细胞B... 目的应用小干扰RNA(siRNA)沉默HeLa细胞MAPK p42,研究其诱导细胞凋亡的分子机制。方法将筛选的MAPK p42靶向小干扰RNA(p42MAPKsiRNA)用脂质体转染至HeLa细胞。激光共聚焦显微镜观察小干扰RNA处理的细胞内钙变化,免疫组织化学法检测细胞Bcl-2和Bax的表达,流式细胞仪检测细胞内Caspase-3的活性。结果小干扰RNA-1和小干扰RNA-2均可诱导HeLa细胞内钙升高,导致Bcl-2表达下调和Bax表达上调,但是Caspase-3未参与细胞凋亡过程。结论MAPK p42小干扰RNA介导的HeLa细胞凋亡与Bcl-2/Bax通路有关。 展开更多
关键词 MAPK P42 小干扰RNA Bcl-2 Bax 细胞凋亡 HELA细胞
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大骨节病关节软骨细胞凋亡及其相关调控因子的表达 被引量:15
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作者 王世捷 郭雄 +5 位作者 左弘 张银刚 许鹏 平智广 张增铁 耿冬 《第一军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期643-646,共4页
目的探讨大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达分布的特点.方法收集15例大骨节病儿童和15例正常对照儿童关节软骨.采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记(TUNEL)技术和Bcl-2、Bax、Fas... 目的探讨大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达分布的特点.方法收集15例大骨节病儿童和15例正常对照儿童关节软骨.采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记(TUNEL)技术和Bcl-2、Bax、Fas及iNos蛋白免疫组化抗生物素蛋白-生物素-碱性磷酸酶(B-SA)法染色,观察大骨节病儿童和正常对照儿童关节软骨的凋亡细胞和Bcl-2、Bax、Fas及iNos蛋白阳性表达细胞的密度与分布.结果 (1)大骨节病儿童关节软骨中层凋亡阳性细胞数[(33.60±2.71)%]较正常关节软骨[(1.33±0.41)%]显著增多(t=11.59,P<0.01);(2)大骨节病儿童关节软骨表层和中层Bcl-2、Bax、Fas及iNos的表达显著高于正常关节软骨中的表达(t=11.75~18.65,P<0.01);大骨节病儿童关节软骨各层Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达阳性率有显著性差异(F=73.49~114.42,P<0.01),以表层最多[分别为(41.93±12.26)%、(45.60±15.78)%、(53.60±16.49)%和(45.47±14.02)%],其次为中层[分别为(14.93±3.50)%、(13.87±4.32)%、(23.27±4.83)%、(21.67±6.82)%].结论大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas、iNos表达较正常人显著增多. 展开更多
关键词 大骨节病 软骨 关节 细胞凋亡 Bcl-2 Bax FAS INOS
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西藏珞巴族HLA-DRB1基因多态性 被引量:9
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作者 康龙丽 高放 +3 位作者 张洪波 袁东亚 赵锋仓 李生斌 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期135-139,共5页
目的:检测西藏珞巴族HLA DRB1等位基因及基因型频率,并将其与18个人群的HLA DRB1频率进行比较,绘制系统发生树。方法:应用聚合酶链反应序列特异性寡核苷酸探针(PCR SSO)技术,对我国西藏南部林芝地区3代内无血缘关系的92个珞巴族健康个... 目的:检测西藏珞巴族HLA DRB1等位基因及基因型频率,并将其与18个人群的HLA DRB1频率进行比较,绘制系统发生树。方法:应用聚合酶链反应序列特异性寡核苷酸探针(PCR SSO)技术,对我国西藏南部林芝地区3代内无血缘关系的92个珞巴族健康个体进行了HLA DRB1位点的基因分型。采用不加权配对组算术方法(UPGMA)绘制系统发生树。结果:在92例珞巴族个体的184个等位基因中共检出11种HLA DRB1等位基因,其中HLA DRB1*04(27. 20% ),DRB*12(25. 50% )在珞巴族中最常见,共占珞巴族可检出等位基因的52. 70%;其他频率大于5%的等位基因还有DRB1*14(15. 20% ),DRB1*15(9. 80% )和DRB1*08(8. 20% )。结论:西藏珞巴族HLA DRB1等位基因分布与其他华人群体均存在很大的差异,显示其HLA等位基因频率分布的民族独特性;在遗传距离上珞巴族和藏族最近,这与民族学、历史学和社会学研究结果相一致。 展开更多
关键词 珞巴族 HLA-DRB1等位基因 基因多态性 西藏 序列特异性寡核苷酸探针 系统发生树 聚合酶链反应 等位基因分布 基因频率分布 基因型频率 无血缘关系 基因分型 健康个体 林芝地区 遗传距离 人群体 独特性 社会学 绘制 检出
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有机镓治疗维甲酸诱导骨质疏松模型大鼠的实验研究 被引量:6
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作者 雷艳霞 赵俊杰 +5 位作者 胡爱玲 李广元 张丹英 赵晶 耿东 郭雄 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1361-1364,共4页
目的对比研究有机镓和无机镓对维甲酸致大鼠骨质疏松模型骨代谢的影响及治疗作用。方法用维甲酸按85mg/(kg·d)灌胃15d,建立大鼠骨质疏松模型,经有机镓、氯化镓灌胃给药治疗4周后,应用生化、病理等方法研究其对骨代谢相关指标的影响... 目的对比研究有机镓和无机镓对维甲酸致大鼠骨质疏松模型骨代谢的影响及治疗作用。方法用维甲酸按85mg/(kg·d)灌胃15d,建立大鼠骨质疏松模型,经有机镓、氯化镓灌胃给药治疗4周后,应用生化、病理等方法研究其对骨代谢相关指标的影响,并比较其治疗效果。结果维甲酸可引起大鼠骨结构、骨钙及其它元素含量的改变,血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、碱性磷酸酶(AKP)明显上升等改变。应用有机镓、氯化镓治疗后,可改善骨密度及骨形态计量学参数,增加股骨和牙齿中的镓、钙、磷含量,降低TRAP和AKP活性,其中以有机镓效果最明显,且用量最少。结论在动物实验中,镓盐能通过降低骨转换率而改善骨质疏松,且有机镓较无机镓更安全、有效。 展开更多
关键词 有机镓 镓盐 维甲酸 骨质疏松 骨代谢 大鼠
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大骨节病差异表达基因PAPSS2对成骨细胞矿化及碱性磷酸酶活性的影响 被引量:5
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作者 王伟卓 程一钊 +2 位作者 郭雄 王坤正 袁普卫 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期175-181,共7页
目的探讨大骨节病差异表达基因PAPSS2在MC3T3-E1细胞成骨样分化过程中的表达及其对碱性磷酸酶(ALP)活性和细胞矿化的影响。方法培养MC3T3-E1细胞并诱导成骨分化,观察PAPSS2在成骨细胞分化过程中的基因及蛋白表达情况;用慢病毒介导的RNA... 目的探讨大骨节病差异表达基因PAPSS2在MC3T3-E1细胞成骨样分化过程中的表达及其对碱性磷酸酶(ALP)活性和细胞矿化的影响。方法培养MC3T3-E1细胞并诱导成骨分化,观察PAPSS2在成骨细胞分化过程中的基因及蛋白表达情况;用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术或逆转录病毒转染高表达载体,分别构建PAPSS2低表达慢病毒及逆转录病毒高表达载体包装,滴度测定,验证细胞转染效率;分别转染MC3T3-E1细胞并设空白对照组,观察PAPSS2沉默或高表达后ALP活性的变化及细胞成骨矿化的影响。结果 PAPSS2在成骨细胞分化过程中mRNA及蛋白均随着矿化过程表达增加。用慢病毒介导的RNAi技术,成功降低了MC3T3-E1成骨细胞中PAPSS2的表达,使用逆转录病毒转染高表达载体显著增加PAPSS2基因的表达。PAPSS2沉默表达时,ALP活性和细胞矿化作用显著降低,高表达后其作用相反。结论 PAPSS2可调节成骨细胞ALP活性和细胞矿化作用,其异常表达可能与大骨节病骨骼病变相关。 展开更多
关键词 大骨节病 成骨细胞 基因功能 碱性磷酸酶 骨关节炎 逆转录病毒 PAPSS2 细胞矿化
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hTERT基因核心启动子调控的TRAIL基因表达载体的构建及对卵巢癌细胞凋亡的影响 被引量:5
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作者 李红梅 宋天保 +4 位作者 于月成 曹云新 王红英 宋晖 张明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期243-246,共4页
目的:构建了人端粒酶逆转录酶(humantelomeraseresersetranscription,hTERT)基因核心启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-relatedapoptosisinducingligand,TRAIL)基因真核表达载体并观察其对卵巢癌细胞凋亡的诱导作用。方法... 目的:构建了人端粒酶逆转录酶(humantelomeraseresersetranscription,hTERT)基因核心启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-relatedapoptosisinducingligand,TRAIL)基因真核表达载体并观察其对卵巢癌细胞凋亡的诱导作用。方法:从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增了TRAIL基因片段。测序正确后,利用基因重组方法将TRAIL基因克隆入带有hTERT基因核心启动子pIRES2-EGFP真核表达载体中。获得由hTERT基因核心启动子调控的绿色荧光蛋白和带有效应型TRAIL基因的真核表达载体hTER-Tpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL。用脂质体转染法,将其转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞中,应用RT-PCR法检测转染前后卵巢癌细胞中外源基因的表达情况,以流式细胞术检测TRAIL对卵巢癌细胞的细胞周期的影响及诱导凋亡的作用。结果:经酶切鉴定及测序结果证实,所构建的重组载体正确。转染hTERTpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL载体后,SKOV3细胞的增殖受到抑制,出现明显凋亡。结论:hTERT基因核心启动子在卵巢癌细胞中可特异性地调控其下游TRAIL基因的表达,并发挥其促凋亡作用。构建由hTERT基因核心启动子调控的表达载体,可能是一种新型和有希望的肿瘤治疗的途径。 展开更多
关键词 hTERT基因核心启动子 TRAIL基因 表达载体 卵巢癌细胞 凋亡
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Ⅰ型胶原蛋白基因在反流性食管炎、Barrett食管及食管腺癌中的表达 被引量:5
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作者 赵俊杰 雷艳霞 +4 位作者 康丽丽 赵晶 李亚清 刘晓庆 任春蓉 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期443-445,477,共4页
目的探讨反流性食管炎、Barrett食管及食管腺癌黏膜组织中Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)基因mRNA的表达水平及意义。方法经胃镜取材,采用荧光定量PCR方法检测反流性食管炎、Barrett食管、食管腺癌组织中COL1A1基因mRNA的表达水平。结果 COL1A1m... 目的探讨反流性食管炎、Barrett食管及食管腺癌黏膜组织中Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)基因mRNA的表达水平及意义。方法经胃镜取材,采用荧光定量PCR方法检测反流性食管炎、Barrett食管、食管腺癌组织中COL1A1基因mRNA的表达水平。结果 COL1A1mRNA在正常组和反流性食管炎阴性组食管黏膜中呈低表达(0.154±0.119,0.152±0.105),在Barrett食管与食管腺癌食管黏膜中呈明显的高表达(0.396±0.170,0.726±0.561)。并且在从正常→反流性食管炎→Barrett食管→食管腺癌的发生、发展过程中,COL1A1mRNA的表达呈现渐进性增强,并与病期有关。结论 COL1A1基因的异常表达与反流性食管炎、Barrett食管和食管腺癌的发生、发展密切相关;COL1A1mRNA的表达水平可用作监测Barrett食管和食管腺癌早期发生及干预治疗效果的有用指标。 展开更多
关键词 反流性食管炎 BARRETT食管 食管腺癌 Ⅰ型胶原蛋白基因
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大骨节病患者12号染色体6个STR位点基因频率分析 被引量:7
10
作者 左弘 郭雄 +5 位作者 康龙丽 平智广 张宝弟 王世捷 赖江华 耿冬 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期414-417,共4页
目的分析大骨节病患者、病区内对照人群和非病区外对照人群12号染色体上6个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点的多态性。方法采用荧光标记基因扫描方法,对12号染色体上D12S358、D12S1675、D12S1663、 D12S1697、D12S1725和D1... 目的分析大骨节病患者、病区内对照人群和非病区外对照人群12号染色体上6个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点的多态性。方法采用荧光标记基因扫描方法,对12号染色体上D12S358、D12S1675、D12S1663、 D12S1697、D12S1725和D12S1613位点在大骨节病区患者和病区内对照及非病区外对照人群中的多态性进行分析。计算相应人群中6个位点的基因频率、基因型频率,并对各组间基因频率进行比较。结果 12号染色体上D12S358、 D12S1675、D12S1663、D12S1697、D12S1725和D12S1613位点在大骨节病患者分别检出7、7、7、10、12和8个等位基因,13、12、9、17、19和10个基因型;在病区内对照人群中分别检出7、5、7、9、13和9个等位基因,12、10、12、19、16和8 个基因型;在非病区外对照人群中分别检出7、5、5、12、8和9个等位基因,17、16、8、22、14和8个基因型;各组间基因频率进行比较,在D12S1725位点,患者与病区内对照(P=-0.0119)及非病区外对照间(P=0.0050)均有显著性差异,而病区正常组及非病区正常组间无差异(P=0.590);其余各位点在三组间均无显著性差异。结论大骨节病患者12号染色体的6个STR位点中D12S1725等位基因分布显著不同于病区与非病区正常人。 展开更多
关键词 短串联重复序列 大骨节病 12号染色体
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携EGFP基因的逆转录病毒包装细胞的分选和滴度测定 被引量:5
11
作者 张银刚 郭雄 +2 位作者 周京军 鱼兵 刘兵 《第一军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期30-32,36,共4页
目的探讨利用荧光激活细胞分选技术获得有效重组逆转录病毒包装细胞系的方法。方法用脂质体介导pLEGFP转染PA317细胞,用荧光显微镜观察转染结果;依据EGFP荧光利用流式细胞仪的分选技术获得多克隆和单克隆源性的包装细胞,并利用PCR、RT-... 目的探讨利用荧光激活细胞分选技术获得有效重组逆转录病毒包装细胞系的方法。方法用脂质体介导pLEGFP转染PA317细胞,用荧光显微镜观察转染结果;依据EGFP荧光利用流式细胞仪的分选技术获得多克隆和单克隆源性的包装细胞,并利用PCR、RT-PCR对其鉴定;以NIH3T3为靶细胞,对其滴度进行测定。结果荧光显微镜显示用脂质体介导的方法成功的转染PA317细胞,在4次连续流式细胞仪分选后得到了稳定表达的多克隆和单克隆源性的包装细胞。PCR和RT-PCR分别从多克隆和单克隆源性的包装细胞细胞基因组DNA以及多克隆和部分(6/8)单克隆源性的包装细胞培养上清中的重组逆转录病毒RNA中扩增出了插入的EGFP片段。滴度测定显示得到的包装细胞能够产生有效的病毒滴度。结论荧光激活细胞分选技术是获得有效病毒滴度的包装细胞的有效方法。 展开更多
关键词 EGFP 重组逆转录病毒载体 荧光激活细胞分选技术 基因转染
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同源异盒基因BP_1在肺癌组织中的表达及临床意义 被引量:4
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作者 线胤生 党诚学 +3 位作者 阎春霞 李和平 Sidney W.Fu 王作仁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1173-1175,共3页
目的本研究通过对BP1mRNA在肺癌组织中的表达状况的研究,探讨BP1mRNA在肺癌中的表达水平以及和肺癌的临床关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测46例肺癌病人的癌组织,相应的癌旁组织和正常组织标本中BP1mRNA的表达程度及... 目的本研究通过对BP1mRNA在肺癌组织中的表达状况的研究,探讨BP1mRNA在肺癌中的表达水平以及和肺癌的临床关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测46例肺癌病人的癌组织,相应的癌旁组织和正常组织标本中BP1mRNA的表达程度及意义。结果在46组标本中,肺癌组织中有36例BP1mRNA呈阳性表达(78.26%),癌旁组织6例呈阳性表达(13.04%),正常组织中未检出阳性表达。癌组织,癌旁组织和正常组织中BP1mRNA的表达率之间存在显著性差异(P<0.01)。癌旁组织和正常组织中BP1基因的表达率之间无显著性差异(P>0.05)。在21例高分化标本中13例呈中高表达,25例低分化标本中22例呈中高表达,两者之间存在显著性差异(P<0.01);在20例Ⅰ-Ⅱ期肺癌标本中12例BP1基因呈中高表达,26例Ⅲ-Ⅳ期标本中15例呈中高表达,两者之间无显著性差异(P>0.05)。BP1基因的表达程度在24例鳞癌中21例呈高表达,在22例腺癌中19例呈高表达,两者之间无显著性差异(P>0.05)。结论BP1mRNA在肺癌组织中的表达显著上调;BP1基因的表达可能与肺癌分化程度有关,与病理类型和TNM分期无关。 展开更多
关键词 肺肿瘤 BP1基因 基因表达 RT-PCR
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NANOG基因在宫颈癌中的表达及其意义 被引量:13
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作者 文雯 冀静 郑鹏生 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期26-31,共6页
目的研究NANOG在宫颈癌中的表达及其在宫颈癌发生发展中的作用。方法用免疫组织化学检测正常宫颈、宫颈原位癌及宫颈癌中NANOG的表达;分别用原代宫颈癌肿瘤球细胞及肿瘤球分化细胞接种裸鼠,观察移植瘤的生长情况。结果与正常组织相比,... 目的研究NANOG在宫颈癌中的表达及其在宫颈癌发生发展中的作用。方法用免疫组织化学检测正常宫颈、宫颈原位癌及宫颈癌中NANOG的表达;分别用原代宫颈癌肿瘤球细胞及肿瘤球分化细胞接种裸鼠,观察移植瘤的生长情况。结果与正常组织相比,宫颈原位癌及宫颈癌中NANOG基因的表达显著增强(P<0.05)。新鲜宫颈癌组织经过无血清培养可以生成肿瘤球,再次经过血清培养后能够分化成上皮样细胞;裸鼠移植瘤实验证实这种肿瘤球细胞具有很高的成瘤性。结论宫颈癌组织中存在肿瘤干细胞,NANOG在介导宫颈癌的发生过程中起到重要作用。 展开更多
关键词 宫颈癌 NANOG基因 肿瘤干细胞
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凋亡抑制基因Survivin和GW112在Barrett食管与食管腺癌中的表达及其意义 被引量:3
14
作者 赵俊杰 雷艳霞 +2 位作者 任春蓉 赵晶 刘晓庆 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期720-723,共4页
目的探讨凋亡抑制基因Survivin和GW112在反流性食管炎、Barrett食管及食管腺癌中的表达及其意义。方法采用SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法检测反流性食管炎、Barrett食管、食管腺癌黏膜组织中SurvivinmRNA和GW112 mRNA的表达。结果 GW... 目的探讨凋亡抑制基因Survivin和GW112在反流性食管炎、Barrett食管及食管腺癌中的表达及其意义。方法采用SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法检测反流性食管炎、Barrett食管、食管腺癌黏膜组织中SurvivinmRNA和GW112 mRNA的表达。结果 GW112在对照组和反流性食管炎阴性组中呈低水平表达,明显低于反流性食管炎阳性组、Barrett食管组及食管腺癌组的表达(P<0.05),反流性食管炎阳性组、Barrett食管组及食管腺癌组GW112表达水平无明显差异(P>0.05)。Survivin表达水平依正常对照、反流性食管炎阴性、反流性食管炎阳性、Barrett食管、食管腺癌的次序渐进增强,其中反流性食管炎阳性组、Barrett食管与食管腺癌组患者Survivin表达水平明显高于对照组和反流性食管炎阴性组(P<0.05,P<0.01),且3组间亦存在显著性差异(P<0.05,P<0.01)。结论 Survivin和GW112基因的过度表达引起的细胞凋亡抑制在Barrett食管及其腺癌发生、发展过程中起着重要的作用,尤其是Survivin在Barrett食管与食管腺癌的发生、发展最早步骤中可能扮演着更主要的角色。 展开更多
关键词 SURVIVIN GW112 BARRETT食管 食管腺癌 实时荧光定量PCR
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人不同孕期胎盘组织中实时荧光定量PCR内参基因的选择 被引量:3
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作者 赵晶 赵俊杰 +3 位作者 康丽丽 李亚清 王斌 雷艳霞 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期218-221,共4页
目的比较人不同孕期胎盘组织中最常用的内参基因及其他几种管家基因mRNA表达水平的差异及稳定性,选出用于该研究的最佳内参基因。方法应用荧光实时定量RT-PCR技术检测6种管家基因[3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、β肌动蛋白(β-actin)、β2... 目的比较人不同孕期胎盘组织中最常用的内参基因及其他几种管家基因mRNA表达水平的差异及稳定性,选出用于该研究的最佳内参基因。方法应用荧光实时定量RT-PCR技术检测6种管家基因[3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、β肌动蛋白(β-actin)、β2微球蛋白(β2-M)、18S核糖体RNA(18srRNA)、RNA聚合酶Ⅱ(RPⅡ)、泛素(UBC)]在早、中、晚不同孕期孕妇绒毛和胎盘组织中mRNA的表达情况,并应用geNorm程序对内参基因表达稳定性进行分析。结果在早、中、晚不同孕期的孕妇早孕绒毛或胎盘组织中内参基因GAPDH mRNA的表达水平变化最大,其中在早孕绒毛组织中表达水平最高,随着孕期的延长其表达水平逐渐降低;内参基因β-actin mRNA转录水平则呈相反的趋势变化,标本间mRNA表达水平变化亦较大;内参基因β2-M、18S和UBC mRNA表达水平在不同孕期标本间变化相对较小,其中内参基因RPⅡmRNA表达水平在不同孕期标本间变化最小。所选内参基因的表达稳定度由高到低依次为RPⅡ>UBC>18srRNA>β2-M>β-actin>GAPDH。结论在应用荧光实时定量RT-PCR技术研究基因转录表达时,应根据研究所用的材料选择合适的内参基因;本研究中RPⅡ是可用的稳定内参基因。 展开更多
关键词 实时定量PCR 内参基因 GeNorm程序分析 不同孕期 胎盘组织
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尿毒症ApoE基因敲除小鼠加速发展的动脉粥样硬化与体内T细胞(Treg/Teff)平衡的关系 被引量:3
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作者 申燕 袁祖贻 +9 位作者 刘艳 肖嫣 吴岳 赵燕 田雨灵 刘卫民 王丽君 梁萧 陈涛 耿涛 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期214-218,223,共6页
目的建立尿毒症apoE-/-小鼠的动物模型,探讨模型鼠主动脉加速发展的动脉粥样硬化与体内T细胞(Treg/Teff)平衡的关系。方法选用C57BL/6J遗传背景的apoE-/-鼠为研究对象,通过右肾皮质电凝加左肾切除术建立尿毒症apoE-/-鼠模型,对照apoE-/... 目的建立尿毒症apoE-/-小鼠的动物模型,探讨模型鼠主动脉加速发展的动脉粥样硬化与体内T细胞(Treg/Teff)平衡的关系。方法选用C57BL/6J遗传背景的apoE-/-鼠为研究对象,通过右肾皮质电凝加左肾切除术建立尿毒症apoE-/-鼠模型,对照apoE-/鼠行假手术。造模后2周检测肾功能判断造模是否成功。造模后10周采血检测肾功、血清总胆固醇;应用ELISA法检测血清TGF-β1及IFN-γ浓度;应用流式细胞术检测脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率;应用实时荧光定量PCR法检测主动脉组织中Foxp3及IFN-γ mRNA的表达;收集主动脉根部行冰冻切片油红O染色计算斑块相对面积。分析肾功能指标与Treg数量的相关性。结果造模后肾功能检测显示造模成功。造模后10周与对照组apoE-/鼠相比:尿毒症apoE-/-鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块相对面积显著提高,脾脏Treg细胞比率下降,血清TGF-β1浓度降低及IFN-γ、总胆固醇浓度升高,主动脉Foxp3 mRNA表达下调及IFN-γ mRNA表达上调。肾功能指标与Treg数量呈显著负相关。结论成功地建立了尿毒症apoE-/-小鼠模型。模型鼠主动脉加速发展的动脉粥样硬化与体内Treg数量减少、功能受损及Teff功能上调,即T细胞亚群(Treg/Teff)失衡有关。 展开更多
关键词 尿毒症 ApoE-/-鼠 动脉粥样硬化 调节性T细胞
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survivin-si RNA质粒的构建及其抑制survivin基因在Hela细胞中的表达 被引量:2
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作者 陈丽宏 强辉 +2 位作者 张晨 段英梅 贺大林 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期578-580,607,共4页
目的合成、克隆、筛选survivin-si RNA干扰片段,构建含有survivin-si RNA的骨架质粒,明确其抑制survivin基因在Hela细胞中表达。方法利用RNA干扰方法构建真核表达载体pGenesil1.1-survivin-si RNA。体外培养人宫颈癌Hela细胞,利用脂质... 目的合成、克隆、筛选survivin-si RNA干扰片段,构建含有survivin-si RNA的骨架质粒,明确其抑制survivin基因在Hela细胞中表达。方法利用RNA干扰方法构建真核表达载体pGenesil1.1-survivin-si RNA。体外培养人宫颈癌Hela细胞,利用脂质体法将该质粒转染Hela细胞。利用Western blot法检测该质粒转染后survivin基因的表达,筛选最佳干扰质粒。通过MTT法检测Hela细胞的生长。通过流式细胞学技术检测细胞凋亡率。结果成功构建及筛选出survivin-si RNA质粒。MTT实验及流式细胞学实验证实该质粒体外能够有效诱导细胞凋亡。结论成功构建survivin-si RNA质粒,为今后应用该质粒进行宫颈癌的基因治疗提供了实验基础。 展开更多
关键词 SURVIVIN RNA干扰 HELA细胞 宫颈癌
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hGDF5基因转染对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响 被引量:3
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作者 任晓勇 张银刚 陈文弦 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期15-19,共5页
目的探讨人生长分化因子5(hGDF5)基因转染对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及分化的影响。方法采用脂质体介导方法将hGDF5基因转入体外培养的兔BMSCs,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、间接免疫荧光检测hGDF5 mRNA和蛋白质的表达,并通过检... 目的探讨人生长分化因子5(hGDF5)基因转染对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及分化的影响。方法采用脂质体介导方法将hGDF5基因转入体外培养的兔BMSCs,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、间接免疫荧光检测hGDF5 mRNA和蛋白质的表达,并通过检测碱性磷酸酶活性、细胞增殖能力(MTT法)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)以及蛋白多糖(PG)的表达,分析转染hGDF5对BMSCs增殖、分化的影响。结果hGDF5 mRNA及蛋白在基因转染细胞内得到正确表达;hGDF5基因转染组和对照组相比,ColⅡ、PG表达水平显著增高(P<0.01,P<0.01),而碱性磷酸酶活性和细胞增殖能力无明显变化(P>0.05)。结论外源基因转染可以使BMSCs表达有生物活性的hGDF5。高表达的hGDF5可以促进BMSCs向软骨表型分化,但对细胞增殖和碱性磷酸酶活性无明显影响。 展开更多
关键词 生长分化因子5 骨髓间充质干细胞 基因转染 分化
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大鼠增龄过程中骨质疏松与椎间盘退变的相关性分析 被引量:2
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作者 张银刚 李天清 +1 位作者 王金堂 郭雄 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期540-543,共4页
目的研究大鼠增龄过程中骨质疏松症和椎间盘退变的相关性。方法50只健康纯种SD大鼠,喂养22个月,建立老龄大鼠模型,进行股骨、胫骨、腰椎等组织学观察,并评价椎间盘退变的相关指标(椎间盘软骨Ⅱ型和Ⅹ型胶原表达、软骨终板血管芽相对面... 目的研究大鼠增龄过程中骨质疏松症和椎间盘退变的相关性。方法50只健康纯种SD大鼠,喂养22个月,建立老龄大鼠模型,进行股骨、胫骨、腰椎等组织学观察,并评价椎间盘退变的相关指标(椎间盘软骨Ⅱ型和Ⅹ型胶原表达、软骨终板血管芽相对面积、软骨终板钙化层/非钙化层厚度)与骨质疏松的相关指标(骨皮质厚度指数、骨小梁相对面积、骨密度、骨最大应力和应变)的相关性。结果骨质疏松相关指标骨皮质厚度指数、骨小梁相对面积、股骨密度、椎体骨密度与椎间盘退变指标终板血管芽相对面积、非钙化/钙化层比值、Ⅱ型胶原定量之间存在中度到强度的负相关,而与Ⅹ型胶原表达存在中度到强度的正相关,其中椎体骨密度与软骨终板的Ⅹ型胶原相关性最强。骨生物力学指标最大变形和最大负荷与椎间盘退变的各个指标无相关性。结论骨质疏松和椎间盘退变呈负相关,这种相关并不能完全归因于环境因素;而骨生物力学最大变形、最大负荷和椎间盘退变无相关性。 展开更多
关键词 骨质疏松症 椎间盘 老龄大鼠
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人端粒酶逆转录酶基因核心启动子调控的肿瘤细胞特异性表达载体的构建 被引量:1
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作者 李红梅 宋天保 +2 位作者 于月成 黄红艳 张明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期96-98,102,共4页
目的构建了人端粒酶逆转录酶(human telomerasereserse transcription,hTERT)基因核心启动子调控的肿瘤细胞特异表达载体。方法提取人SKOV3细胞的基因组,利用PCR技术克隆hTERT基因核心启动子。并将其插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的表... 目的构建了人端粒酶逆转录酶(human telomerasereserse transcription,hTERT)基因核心启动子调控的肿瘤细胞特异表达载体。方法提取人SKOV3细胞的基因组,利用PCR技术克隆hTERT基因核心启动子。并将其插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的表达载体中。用脂质体转染法,将其分别转染肿瘤细胞和正常细胞,检测肿瘤细胞和正常细胞中GFP差异表达。结果HTERT基因核心启动子调控的表达载体,在所检测的3种肿瘤细胞中均具有明显的转录活性;而在正常细胞中则无明显的转录活性。结论hTRET基因核心启动子具有肿瘤特异性,构建hTERT基因核心启动子的载体可能是一种新型和有希望肿瘤治疗的途径。 展开更多
关键词 端粒酶逆转录酶和新基因启动子 基因治疗 表达载体
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