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丙型肝炎病毒非结构蛋白3全长基因的克隆和表达
被引量：
3
1
作者
安润
楚雍烈
+4 位作者
杨娥
寻萌
孙菊
卢阳
郑建武
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期449-451,473,共4页
目的克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3,为进一步研究其基因功能奠定基础。方法设计特异性引物,以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得全长NS3基因。将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,经酶切、PCR及测序鉴定后,与表达载体pET...
目的克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3,为进一步研究其基因功能奠定基础。方法设计特异性引物,以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得全长NS3基因。将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,经酶切、PCR及测序鉴定后,与表达载体pET32a重组,后转入BL21菌株并诱导表达。采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS3基因的蛋白表达水平。结果含有NS3的重组体构建成功并在大肠杆菌中表达。结论运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了HCV非结构基因NS3蛋白,为尽一步研究HCVNS3基因功能奠定了基础。
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关键词
丙型肝炎病毒
非结构蛋白3基因
基因表达
克隆
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职称材料
2型糖尿病患者肠道拟类菌属和双歧杆菌属多样性的PCR-DGGE指纹图谱分析
被引量：
7
2
作者
吴晓康
徐纪茹
+5 位作者
张旭燕
马超锋
韩蕾
申艳星
NAWAZ M
王娟
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期475-480,共6页
目的分析2型糖尿病患者肠道拟类菌属和双歧杆菌属的多样性及其与健康个体的差异,探讨糖尿病与肠道优势菌属的相关性。方法收集2型糖尿病患者和健康志愿者粪样,提取样品中菌群总DNA,利用拟类菌和双歧杆菌16SrRNA种属特异性引物,进行PCR扩...
目的分析2型糖尿病患者肠道拟类菌属和双歧杆菌属的多样性及其与健康个体的差异,探讨糖尿病与肠道优势菌属的相关性。方法收集2型糖尿病患者和健康志愿者粪样,提取样品中菌群总DNA,利用拟类菌和双歧杆菌16SrRNA种属特异性引物,进行PCR扩增,将产物用变性梯度凝胶电泳分离,获得肠道菌群分子指纹图谱,进行多样性和相似性等特征分析。结果糖尿病组和健康人组样品DGGE图谱多样性指数范围分别是:拟类菌属0.89(0.75～0.95),0.95(0.89～0.97);双歧杆菌属:0.85(0.75～0.94),0.87(0.73～0.93)。组内成对相似性系数累积曲线分析,拟类菌属:小于0.5的Cs值在糖尿病组占到总Cs值个数的85.83%,而健康人组只占到35.71%;双歧杆菌属:小于0.4的Cs值在糖尿病组占到总Cs值个数的90%,健康人组占到总Cs值个数的60.7%。结论糖尿病患者和健康人肠道拟类菌属和双歧杆菌属指纹图呈现个体特异性,糖尿病患者两种菌属多样性与健康个体无显著差异,而糖尿病患者个体之间的相似性较健康个体之间低。
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关键词
2型糖尿病
肠道菌群
变性梯度凝胶电泳
指纹图谱技术
多样性
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职称材料
人杀菌渗透增强性蛋白N末端片段在大肠杆菌中的表达
被引量：
2
3
作者
董伟
董晓慧
+3 位作者
楚雍烈
杨娥
胡刚
郑建武
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期11-14,共4页
目的构建表达人杀菌渗透增强性蛋白(BPI)N-端193个氨基酸的重组表达质粒,诱导表达BPI193重组蛋白。方法应用RT-PCR的方法从HL-60细胞内扩增出BPI氨基端1-193个氨基酸的基因序列,克隆入T载体。将BPI193基因片段定向克隆入原核表达载体PET...
目的构建表达人杀菌渗透增强性蛋白(BPI)N-端193个氨基酸的重组表达质粒,诱导表达BPI193重组蛋白。方法应用RT-PCR的方法从HL-60细胞内扩增出BPI氨基端1-193个氨基酸的基因序列,克隆入T载体。将BPI193基因片段定向克隆入原核表达载体PET-28a中,构建重组的原核表达质粒PET-BPI193,转化大肠杆菌BL21菌株,用IPTG诱导表达蛋白。应用SDS-PAGE检测蛋白表达情况,计算机薄层扫描分析蛋白占菌体总蛋白百分比;Western-blot技术检测表达蛋白的特异性。结果从HL-60细胞中扩增得到579bp的BPI193基因片段,构建了T-BPI193亚克隆和PET-BPI193重组表达质粒。转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导,经SDS-PAGE检测表明,成功表达了6His-BPI193融合蛋白。计算机薄层扫描分析表达量占菌体总蛋白的12%。Western-blot检测显示表达产物具有特异性。结论成功构建了PET-BPI193重组表达质粒。在大肠杆菌BL21内,诱导获得了BPI193与组氨酸融合表达的重组蛋白。
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关键词
杀菌/渗透增强性蛋白
基因表达
大肠杆菌
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职称材料
题名
丙型肝炎病毒非结构蛋白3全长基因的克隆和表达
被引量：
3
1
作者
安润
楚雍烈
杨娥
寻萌
孙菊
卢阳
郑建武
机构
西安交通大学
医学院
免疫
学
与病原
生物学系
出处
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期449-451,473,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30470089)
国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2002AA21416)
文摘
目的克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3,为进一步研究其基因功能奠定基础。方法设计特异性引物,以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得全长NS3基因。将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,经酶切、PCR及测序鉴定后,与表达载体pET32a重组,后转入BL21菌株并诱导表达。采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS3基因的蛋白表达水平。结果含有NS3的重组体构建成功并在大肠杆菌中表达。结论运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了HCV非结构基因NS3蛋白,为尽一步研究HCVNS3基因功能奠定了基础。
关键词
丙型肝炎病毒
非结构蛋白3基因
基因表达
克隆
Keywords
hepatitis C virus
non-structural gene NS3
cloning
gene expression
分类号
R373.2 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
2型糖尿病患者肠道拟类菌属和双歧杆菌属多样性的PCR-DGGE指纹图谱分析
被引量：
7
2
作者
吴晓康
徐纪茹
张旭燕
马超锋
韩蕾
申艳星
NAWAZ M
王娟
机构
西安交通大学
医学院
免疫
学
与病原
生物学系
西安
市
疾病
预防控制中心病毒检验科
陕西中
医学院
出处
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期475-480,共6页
基金
国家重点基础研究发展规划(973计划)项目(No.2004CB418503)~~
文摘
目的分析2型糖尿病患者肠道拟类菌属和双歧杆菌属的多样性及其与健康个体的差异,探讨糖尿病与肠道优势菌属的相关性。方法收集2型糖尿病患者和健康志愿者粪样,提取样品中菌群总DNA,利用拟类菌和双歧杆菌16SrRNA种属特异性引物,进行PCR扩增,将产物用变性梯度凝胶电泳分离,获得肠道菌群分子指纹图谱,进行多样性和相似性等特征分析。结果糖尿病组和健康人组样品DGGE图谱多样性指数范围分别是:拟类菌属0.89(0.75～0.95),0.95(0.89～0.97);双歧杆菌属:0.85(0.75～0.94),0.87(0.73～0.93)。组内成对相似性系数累积曲线分析,拟类菌属:小于0.5的Cs值在糖尿病组占到总Cs值个数的85.83%,而健康人组只占到35.71%;双歧杆菌属:小于0.4的Cs值在糖尿病组占到总Cs值个数的90%,健康人组占到总Cs值个数的60.7%。结论糖尿病患者和健康人肠道拟类菌属和双歧杆菌属指纹图呈现个体特异性,糖尿病患者两种菌属多样性与健康个体无显著差异,而糖尿病患者个体之间的相似性较健康个体之间低。
关键词
2型糖尿病
肠道菌群
变性梯度凝胶电泳
指纹图谱技术
多样性
Keywords
type 2 diabetes
gut microbiota
denaturing gradient gel electrophoresis （DGGE）
molecular profiling
diversity
分类号
R587.1 [医药卫生—内分泌]
Q938.1 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
人杀菌渗透增强性蛋白N末端片段在大肠杆菌中的表达
被引量：
2
3
作者
董伟
董晓慧
楚雍烈
杨娥
胡刚
郑建武
机构
西安交通大学医学院免疫学与病原生物学系环境与疾病相关基因教育部重点实验室
出处
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期11-14,共4页
基金
陕西省科技攻关项目(No.2002K10-GI-19)
陕西省卫生厅科研基金项目(No.02D38)
文摘
目的构建表达人杀菌渗透增强性蛋白(BPI)N-端193个氨基酸的重组表达质粒,诱导表达BPI193重组蛋白。方法应用RT-PCR的方法从HL-60细胞内扩增出BPI氨基端1-193个氨基酸的基因序列,克隆入T载体。将BPI193基因片段定向克隆入原核表达载体PET-28a中,构建重组的原核表达质粒PET-BPI193,转化大肠杆菌BL21菌株,用IPTG诱导表达蛋白。应用SDS-PAGE检测蛋白表达情况,计算机薄层扫描分析蛋白占菌体总蛋白百分比;Western-blot技术检测表达蛋白的特异性。结果从HL-60细胞中扩增得到579bp的BPI193基因片段,构建了T-BPI193亚克隆和PET-BPI193重组表达质粒。转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导,经SDS-PAGE检测表明,成功表达了6His-BPI193融合蛋白。计算机薄层扫描分析表达量占菌体总蛋白的12%。Western-blot检测显示表达产物具有特异性。结论成功构建了PET-BPI193重组表达质粒。在大肠杆菌BL21内,诱导获得了BPI193与组氨酸融合表达的重组蛋白。
关键词
杀菌/渗透增强性蛋白
基因表达
大肠杆菌
Keywords
bactericidal/permeability increasing protein
gene expression
E. coli
分类号
R373.21 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
丙型肝炎病毒非结构蛋白3全长基因的克隆和表达
安润
楚雍烈
杨娥
寻萌
孙菊
卢阳
郑建武
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
2型糖尿病患者肠道拟类菌属和双歧杆菌属多样性的PCR-DGGE指纹图谱分析
吴晓康
徐纪茹
张旭燕
马超锋
韩蕾
申艳星
NAWAZ M
王娟
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
人杀菌渗透增强性蛋白N末端片段在大肠杆菌中的表达
董伟
董晓慧
楚雍烈
杨娥
胡刚
郑建武
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
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